血清miR-483-5p和miR-532-5p水平对卵巢癌手术后复发的预测价值

王又方，夏 璇，郁雅芳，刘晓庆，孙姗姗，黄艳冰

复旦大学附属妇产科医院重症监护室，上海 200090

卵巢癌是常见的恶性肿瘤，由于早期症状不明显，常常伴有尿频、腹痛和进食困难等临床表现，往往与其他疾病容易混淆，目前有75%患者在确诊时已经属于卵巢癌晚期，其病死率呈逐年升高，给患者的生命健康带来严重威胁[1]。卵巢癌患者循环微小RNA(miRNAs)能够与目标mRNA结合，导致该mRNA沉默，从而引起一系列的生物学效应，有研究认为miRNA水平是卵巢癌诊断和预后判断的重要生物学指标[2-3]。现有研究证实，与健康对照组比较，卵巢癌患者的miR-483-5p水平明显升高，而miR-532-5p水平明显降低，二者被认为是卵巢癌潜在的临床运用指标[4]，但能否用于卵巢癌手术后预后的预测仍不清楚。本研究通过检测血清miR-483-5p和miR-532-5p水平，观察二者对卵巢癌手术后2年内出现复发的预测价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年1月至2019年6月在本院手术且经病理学检查证实的116例卵巢癌患者为卵巢癌组。纳入标准：临床资料完整；年龄在43～79岁；自愿加入本组研究。排除标准：手术前已行放疗、化疗和激素治疗者；血液性和免疫性疾病者；智力障碍或者精神疾病者；心肝肾等重要脏器功能不全者。另选择同期本院75例诊断为卵巢良性肿瘤患者为良性肿瘤组，45例体检健康女性为健康对照组。卵巢癌组年龄45～79岁，平均(58.97±11.73)岁；组织学类型：浆液性囊腺癌59例，子宫内膜样癌35例，混合型上皮癌22例；肿瘤组织分化程度：高分化45例，中分化50例，低分化21例；临床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期19例，Ⅲ期67例，Ⅳ期18例；淋巴结转移：有38例，无78例。良性肿瘤组年龄43～79岁，平均(58.18±12.73)岁；组织学类型：畸胎瘤15例，卵巢囊肿35例，卵巢纤维瘤17例，其他良性肿瘤8例。健康对照组年龄45～79岁，平均(58.72±12.72)岁。3组年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会审核通过，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1血液标本收集 卵巢癌组于入院次日和手术后7 d时，良性肿瘤组于入院次日，健康对照组于体检当日抽取肘静脉血5 mL左右，室温下静置约20 min，然后采用离心半径15 cm、3 000 r/min离心10 min，取上清液约3 mL，置于-80 ℃冰箱中待测。

1.2.2实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR) 采用TaqMan miRNA试剂盒提取细胞总RNA，采用q-PCR仪检测血清miR-483-5p和miR-532-5p水平。根据目标基因的mRNA序列，设计引物，用设计软件Primer express 3.0软件设计反转录产物为模板，miR-483-5p扩增引物正向：5′-ACACTCCAGCTGGGAAGACGCGAGGAAGAA-3′，反向：5′-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3′；miR-532-5p扩增引物正向：5′-CAU GCCUUGAGUGUAGGACCGU-3′，反向：5′-GGUCCUACACUCAAGGCAUGUU-3′；U6扩增引物正向：5′- GGTTAGAAGTCATACG -3′，反向：5′-TGTCA TGAATGATCC-3′。反转录后以反转录产物为模板，采用q-PCR仪上间隙扩增，反应条件：85 ℃反应3 min，85 ℃反应20 s，42 ℃反应40 s，总共循环35次。采用2-ΔΔCt计算miR-483-5p和miR-532-5p的相对表达量。

1.2.3随访 按照手术后第1年每月随访1次，手术后第2年每3个月随访1次，采用电话、微信或QQ对卵巢癌患者随访2年。根据是否复发将卵巢癌患者分为复发组和无复发组。

1.2.4观察指标 比较各组血清miR-483-5p和miR-532-5p水平，观察血清miR-483-5p和miR-532-5p水平与临床指标的关系，分析miR-483-5p和miR-532-5p对卵巢癌2年内复发的预测价值。

2 结 果

2.1各组血清miR-483-5p和miR-532-5p水平比较 卵巢癌组手术前血清miR-483-5p水平高于良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05)，良性肿瘤组血清miR-483-5p高于健康对照组(P<0.05)；卵巢癌组手术前血清miR-532-5p水平低于良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05)，良性肿瘤组血清miR-532-5p低于健康对照组(P<0.05)。手术后7 d时卵巢癌组血清miR-483-5p水平较手术前降低(P<0.05)，而血清miR-532-5p水平较手术前升高(P<0.05)。见表1。

表1 各组血清miR-483-5p和miR-532-5p水平的比较

2.2卵巢癌患者血清miR-483-5p和miR-532-5p水平与临床病理特征的关系 血清miR-483-5p和miR-532-5p水平在不同肿瘤组织分化程度、临床分期及有无淋巴转移的卵巢癌患者中差异均有统计学意义(P<0.05)，在不同年龄、肿瘤最大径和组织学类型的卵巢癌患者中差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 卵巢癌患者血清miR-483-5p和miR-532-5p表达与临床病理特征的关系

2.3卵巢癌患者血清miR-483-5p水平与miR-532-5p的相关性 卵巢癌患者血清miR-483-5p水平与miR-532-5p呈负相关(r=-0.684，P<0.05)。

2.4卵巢癌手术后2年内复发组与无复发组血清miR-483-5p和miR-532-5p水平的比较 经随访2年，复发组49例，无复发组67例。卵巢癌复发组血清miR-483-5p水平高于无复发组(P<0.05)，而miR-532-5p水平低于无复发组(P<0.05)。见表3。

表3 卵巢癌手术后复发组与无复发组血清miR-483-5p和miR-532-5p水平的比较

2.5血清miR-483-5p和miR-532-5p检测对卵巢癌手术后2年内复发的预测效能 ROC曲线分析显示，血清miR-483-5p和miR-532-5p联合检测预测卵巢癌手术后2年内复发的灵敏度为77.6%，特异度为88.1%，曲线下面积(AUC)为0.907，其AUC明显高于miR-483-5p、miR-532-5p单独检测的0.819、0.828(Z=2.784、2.286，P<0.05)，而miR-483-5p、miR-532-5p单独检测的AUC差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 血清miR-483-5p和miR-532-5p检测对卵巢癌手术后2年内复发的预测效能

3 讨 论

卵巢癌发病比较隐匿，在确诊时大多数已处于晚期，患者的病死率较高，5年生存率低于30%,严重影响患者的预后。卵巢癌进展与基因的调控异常具有明显的关系，检测与卵巢癌患者血清相关的基因可为肿瘤治疗提供依据。血清学指标由于无创，患者的依从性高和可以重复检测等优势，被学者用于对肿瘤患者复发和转移的预测，为患者的治疗方案提供有价值的参考[5-6]。现已知30%的人类基因受到长链非编码miRNAs的调控，通过对mRNA的靶向降解调控，抑制靶基因蛋白的翻译，从而达到调控目的基因的目的[7]。现已知多种肿瘤细胞功能与miRNA关系密切，miRNA对肿瘤细胞的增殖、侵袭、凋亡和代谢等功能均有一定影响[8]。miRNAs是肿瘤领域新型的研究点之一，其血清的异常表达与肿瘤的发生、发展、复发和预后等多种病理生理过程有关[9]，在肿瘤领域的诊断应用具有较好的发展前景。

本研究显示，卵巢癌组血清miR-483-5p水平明显高于卵巢良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05)，并发现卵巢癌手术后血清miR-483-5p水平较治疗前明显降低(P<0.05)，说明miR-483-5p与卵巢癌关系密切，这与文献[10]报道的miR-483-5p在胃癌中高表达的结果一致。本研究还显示，血清miR-483-5p水平在不同的临床分期、肿瘤组织分化程度和有无淋巴转移的卵巢癌患者中差异有统计学意义(P<0.05)，与文献[11]报道的结果一致，说明miR-483-5p与卵巢癌的病理特征具有一定的关系，卵巢癌组织分化程度低、临床分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴转移的患者，其血清miR-483-5p水平更高，说明血清miR-483-5p能够准确地反映病情变化及疾病的发生、发展进程。现已知miR-483-5p在乳腺癌和肺癌中有促癌基因的作用，对肿瘤的发生、发展具有促进作用[12-13]。本研究发现卵巢癌手术后2年内复发组血清miR-483-5p水平明显高于无复发组(P<0.05)，当血清miR-483-5p水平>3.09时，其预测卵巢癌手术后2年内复发的灵敏度为67.3%，特异度为85.1%，AUC为0.819，说明血清miR-483-5p对卵巢癌手术后2年内复发具有较高的预测效能，可作为卵巢癌预后评估的重要指标。有研究证实，在食管癌中miR-483-5p高表达的患者生存期明显缩短，miR-483-5p是患者总体生存期和无瘤生存期的独立预后因素[14]；而在肝内胆管癌患者的研究中发现，miR-483-5p高表达患者5年生存期明显低于低表达的患者[15]，故目前认为miR-483-5p表达与肿瘤患者预后关系密切。

本研究显示，卵巢癌组血清miR-532-5p水平明显低于良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05)，卵巢癌组手术后血清miR-532-5p水平明显高于手术前(P<0.05)，说明miR-532-5p类似于抑癌基因，对卵巢具有一定的保护作用，与文献[16]报道的结果类似。现已知miR-532-5p在多种肿瘤细胞中具有生物学调节功能，研究发现胃癌组织中的miR-532-5p表达水平明显低于癌旁组织，并且在有远处转移的癌组织中其表达水平明显下调[17]。本研究还显示，卵巢癌组织分化程度低、临床分期Ⅲ～Ⅳ期及有淋巴转移的患者血清miR-532-5p水平更低(P<0.05)，说明血清miR-532-5p水平与肿瘤组织分化程度、临床分期和淋巴转移有关，可作为卵巢癌病情评估的指标。现有的诊断技术对肿瘤的临床分期很难在治疗前做到准确的判断，不利于做出最佳的治疗方案选择，结合生物学指标的诊断，才能做到个体化和精准的治疗。本研究发现卵巢癌复发组血清miR-532-5p水平明显低于无复发组(P<0.05)，当血清miR-532-5p≤1.01时，其预测卵巢癌手术后2年内复发的灵敏度为100.0%，特异度74.6%，AUC为0.828，说明血清miR-532-5p可以作为卵巢癌病情评估和预后判断的潜在选择指标，与相关研究报道的miR-532-5p可以作为结肠癌预后评价指标的结果一致[18]。

本研究还显示，血清miR-483-5p和miR-532-5p联合检测预测卵巢癌手术后2年内复发的AUC为0.907，明显高于单个指标检测预测的AUC(P<0.05)，说明两个指标之间存在某种互补性，相关性分析证实了血清miR-483-5p水平与miR-532-5p呈负相关(r=-0.684，P<0.05)。miR-483-5p类似于促癌基因，对卵巢癌的发生、发展具有促进作用，而miR-532-5p类似于抑癌基因，对卵巢具有保护作用，二者的表达平衡被打破则会导致肿瘤的发生、发展，但二者在卵巢癌中相互作用的确切机制仍需进一步研究。

综上所述，miR-483-5p和miR-532-5p与卵巢癌关系密切，对卵巢癌手术后2年内复发具有较高的预测价值。