脑震宁颗粒安神药队改善脑震荡模型小鼠学习记忆与空间认知能力的实验研究

2022-05-12 02:52王晓英裴妙荣赵艳艳
山西中医药大学学报 2022年1期
关键词:酸枣仁象限颗粒

王晓英,裴妙荣,赵艳艳

(1.山西中医药大学,山西 晋中 030619;2.桂林医学院,广西 桂林 541199)

脑震荡是常见的轻型颅脑损伤类型,有头痛、头晕及程度不一的植物神经功能失调(耳鸣、心悸、血压波动、多汗、性功能下降等)、注意力涣散、记忆力减退、情绪不稳容易激动等表现,以伤后即刻出现定向障碍或者意识障碍,伤后24 h内出现平衡功能缺失,伤后48 h内出现反应迟钝及学习能力和记忆力减退为其主要症状[1]。脑震宁颗粒由活血祛瘀药队:(当归、川芎、牡丹皮、丹参、地黄、地龙)、除烦止呕药队:(陈皮、竹茹)、安神益智药队(柏子仁、酸枣仁、茯苓)共11味中药经科学提取加工制成,共奏凉血活血、化瘀通络、益血安神、宁心定智、除烦止呕之效。临床使用脑震宁颗粒治疗脑震荡效果颇佳,我们对该方进行拆方,应用于脑震荡模型小鼠,观察各组动物空间学习记忆能力的变化,从而探求脑震宁颗粒组方的科学意义。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 动物与仪器 4周龄ICR小鼠,雄性,体质量(18~22)g,购自山西医科大学实验动物中心,许可证号:SCXK(晋)2015-0001。自制小鼠脑震荡制造仪;Morris水迷宫(BW-MWM101,上海软隆科技发展有限公司)。

1.1.2 药物与试剂 脑震宁颗粒(山西振东安特生物制药有限公司出品,批号:Z14021119,10 g/袋);0.9%氯化钠注射液(山东华鲁制药有限公司,250 mL,2.25 g/瓶,批号:C07020410);当归、川芎、茯苓、酸枣仁(炒)、地黄、地龙、陈皮、柏子仁、牡丹皮、竹茹、丹参由山西振东安特生物制药有限公司提供,与脑震宁颗粒(批号:Z14021119)原料一致,经裴香萍教授鉴定为合格品。

1.2 方 法

1.2.1 给药样品制备 脑震宁颗粒全方:脑震宁颗粒加蒸馏水配置成0.85 g/mL的灌胃液。脑震宁去酸枣仁、柏子仁、茯苓(实验1组):全方去酸枣仁、柏子仁、茯苓,按脑震宁颗粒制备方法制备颗粒剂,配置成0.59 g/mL的灌胃液。脑震宁去酸枣仁(实验2组):全方去酸枣仁,按脑震宁颗粒制备方法制备颗粒剂,配置成0.76 g/mL的灌胃液。脑震宁去柏子仁(实验3组):全方去柏子仁,按脑震宁颗粒制备方法制备颗粒剂,配置成0.76 g/mL的灌胃液。

1.2.2 造模、分组、给药 根据参考文献[2],自制小鼠脑震荡制造仪,采用振动法造模:将单只小鼠放入铁盒内,以10次/min左右的频率用力摇晃,使小鼠撞击盒子内壁造成脑震荡。造模后观察并记录小鼠恢复自主呼吸及意识障碍等各种反射的时间,同时观察造模后30 min内小鼠呼吸及运动能力等的变化。造模成功的标准:①短暂的意识障碍,30 min内恢复;②短暂的呼吸暂停或减弱,20 s内恢复;③短暂的角膜反射、痛刺激反射,3 min内恢复;④无遗留运动功能障碍;⑤肉眼及组织学观察均无脑挫伤灶[2]。50只造模成功的小鼠纳入实验,随机分为5组,每组10只,分别为模型组、全方组、实验1组、实验2组、实验3组。空白组10只不造模。各给药组按体重分别灌胃制备好的对应药液,灌胃量为0.2 mL/10 g,空白组和模型组予等体积生理盐水,每日1次,连续6 d。

1.2.3 Morris水迷宫测试 Morris水迷宫由圆形水池、可移动位置并隐藏在水下面的平台、图像自动采集处理系统组成。水迷宫直径100 cm,水深21 cm,水池内壁已做黑色喷塑处理;平台直径9 cm,表面粗糙,内壁高度20 cm,肉眼观察水面无法看清平台位置,水温21~22℃。采用Morris水迷宫定位航行和空间探索实验检测小鼠学习记忆和记忆保持能力。给药6 d,第1天到第5天为有平台测试,第6天为撤去平台的测试,均于每天给药1 h后进行。

定位航行实验:实验第1天到第5天,将小鼠放入水池中(不放平台)自由游泳2 min,使其熟悉迷宫环境。训练开始时,将平台置于第III象限,将小鼠由第I象限面向池壁放入水池。自由录像记录系统记录小鼠找到目标平台所需的时间和游泳距离,小鼠找到平台后或60 s内找不到平台(潜伏期记为60 s)由实验者将其拿上平台,在平台上体息15 s,吹干后放回笼中。

空间探索实验:实验第6天,撤除水下平台,随机选定一个入水点将小鼠均于此处面向池壁放入水中,记录小鼠在60 s内第1次跨越平台时间和穿越平台的次数。图像自动监视和处理系统自动完成数据采集及图像分析数据。

1.3 统计学处理

所有统计分析均采用SPSS12.0统计软件进行,计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间数据比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 定位航行实验

模型组小鼠平均速度、在目标象限第Ⅲ象限的路程与停留时间均较空白组降低(P<0.05)。上述指标全方组、实验2组、实验3组与空白组比较差异无统计学意义,而明显高于模型组(P<0.05,P<0.01),其中以全方组最高。实验1组的平均速度及在目标象限第Ⅲ象限的路程与空白组接近,在第Ⅲ象限的时间与模型组接近,但差异均无统计学意义。结果见表1。

表1 定位航行实验结果 (±s)

表1 定位航行实验结果 (±s)

注:与空白组比较,1)P<0.05;与模型组比较,2)P<0.05,3)P<0.01

组别平均速度(mm/s)第Ⅰ象限路程(mm)第Ⅱ象限路程(mm)第Ⅲ象限路程(mm)第Ⅲ象限时间(s)空白组229.17±39.072)3406.30±1326.09 1751.41±479.24 2651.05±763.842)15.92±4.552)模型组187.01±37.911)3579.33±1018.60 2904.41±1497.93 2032.65±327.181)10.28±4.931)全方组238.91±30.223)4356.89±1572.63 2809.36±991.21 2719.65±810.272)11.66±4.94实验1组227.84±41.83 3097.35±1503.51 2946.79±1490.56 2695.99±817.38 11.78±4.33实验2组226.07±15.423)3421.64±1320.89 2601.72±1006.82 2665.85±1572.662)11.58±7.15实验3组240.67±26.173)3723.15±747.86 2976.69±1335.17 2669.97+768.612)12.21±3.162)

2.2 空间探索实验

模型组小鼠平均速度、在目标象限第Ⅲ象限的路程与停留时间、站台穿越次数均明显低于空白组。全方组、实验2组上述指标均较模型组明显增加(P<0.05,P<0.01);实验1组站台穿越次数高于模型组(P<0.05);实验3组小鼠平均速度以及在目标象限第Ⅲ象限的路程与停留时间均较模型组增加(P<0.05)。各给药组小鼠上述指标与空白组比较,差异均无统计学意义。结果见表2。

表2 空间探索实验结果 (±s)

表2 空间探索实验结果 (±s)

注:与空白组比较,1)P<0.05;与模型组比较,2)P<0.05,3)P<0.01

组别平均速度(mm/s)第Ⅲ象限路程(mm)第Ⅲ象限时间(s)站台穿越次数(次)空白组249.49±45.142)4294.2210±928.09 13.74±6.992)1.80±0.632)模型组197.22±44.781)2982.8256±1250.84 14.99±4.401)1.21±0.921)全方组247.78±15.373)4556.4033±992.82 23.09±5.883)2.51±0.713)实验1组248.53±29.29 3471.1071±1067.24 17.64±5.56 1.92±1.29实验2组214.94±18.792)3908.3840±566.75 19.55±3.072)2.30±1.162)实验3组238.38±43.852)4131.3522±1034.90 19.66±3.062)1.51±0.53

上述结果表明振动法对小鼠造成的空间记忆、工作记忆以及空间辨别能力的损伤明显,脑震宁全方及其安神药队均能提高小鼠空间记忆、工作记忆以及空间辨别能力。

3 讨论

Morris水迷宫由英国心理学家Morris设计,并用于学习记忆脑机制的研究[3-4],是目前国际通用的较好的空间辨别学习工具。脑损伤动物在迷宫中找到隐匿平台的时间越长,表明其认知记忆缺失越明显;在空间探索实验中,如果动物有良好正常的学习记忆能力,则动物在原平台所在区域就会停留较长的时间,所以我们利用Morris水迷宫实验研究脑震宁颗粒对脑震荡小鼠模型的益智作用。

脑震宁颗粒中酸枣仁、柏子仁、茯苓皆为安神类药物,而安神类药物对记忆有一定的影响,可以增加GABA(γ-氨基丁酸)含量,对大鼠神经功能缺失症状有一定改善,具有脑保护作用[5-7]。酸枣仁为鼠李科植物酸枣(Ziziphus jujubeMill.)的干燥成熟种子[5-7],具有宁心、安神等功效,用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦等症。黄酮类成分是酸枣仁的主要活性成分之一[2],除镇静催眠外,还具有抗焦虑、抗抑郁、增强记忆力、脑神经保护、抗氧化等多种作用。柏子仁为柏科植物侧柏[Platycladus orientalis(L.)Franco]的种仁,其性平味甘,入心、肝、肾、大肠经,具有宁心安神、敛汗生津、润肠通便之功效[3-4]。茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核,具有利水渗湿、健脾宁心等作用,临床用于水肿、心悸、失眠等。茯苓能改善苯巴比妥钠所致记忆障碍小鼠的学习记忆能力,具有明显镇静催眠作用[8]。各给药组益智作用由强到弱顺序为:脑震宁全方组>实验3组(全方去柏子仁)>实验2组(全方去酸枣仁)>实验1组(全方去酸枣仁、柏子仁和茯苓)。由此可以推测脑震宁颗粒中酸枣仁、柏子仁、茯苓为改善小鼠脑震荡后记忆损伤的主要成分,其他药味也可发挥协同作用,而以全方组疗效最佳。酸枣仁、柏子仁、茯苓等安神药队及脑震宁颗粒对学习记忆影响的机制,有待深入研究。

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