HPLC法测定含乳饮料中的三聚氰胺

张淑芳 崔婷婷

摘 要：目的：利用高效液相色谱法测定含乳饮料中三聚氰胺非法添加剂的含量。方法：利用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、可变波长紫外检测器（Variable Wavelength Ultraviolet Detector，VWD），设置进样量20 μL、流速1.0 mL/ min、检测波长240 nm，以离子对试剂缓冲液-乙腈（90∶10，V/V）为流动相，采用外标法进行定量分析。结果：三聚氰胺非法添加剂可以得到很好的分离，在1.0～20.0 μg/mL具有良好的线性关系，相关系数R2均大于0.99，加标回收率为87.974%，相对标准偏差小于10%。结论：本实验中高效液相色谱法检测含乳饮料中三聚氰胺非法添加剂，结果重复性好，简单方便，适用于食品中含乳饮料的三聚氰胺非法添加剂的含量测定。

关键词：高效液相色谱;三聚氰胺;含乳饮料

Determination of Melamine in Milk Beverage by HPLC

ZHANG Shufang1， CUI Tingting2*

（1.Ulanqab Product Quality Measurement， Inspection and Testing Center， Ulanqab 012000， China; 2.Ulanqab Inspection and Testing Center， Ulanqab 012000， China）

Abstract： Objective： To determine the content of melamine illegal additive in milk beverage by HPLC. Method： Agilent ZORBAX SB-C18 column （250 mm × 4.6 mm，5 μm） variable wavelength ultraviolet detector was used. The injection volume was 20 μL， the flow rate was 1.0 mL/min， the detection wavelength was 240 nm， and the ion-pairing reagent buffer-acetonitrile （90∶10， V/V） was used as the mobile phase， and the quantitative analysis was carried out by the external standard method. Result： The illegal additives of melamine could be well separated， with a good linear relationship between 1.0 and 20.0 μg/mL， the correlation coefficients R2 were all greater than 0.99， the standard addition recovery was 87.974%， and the relative standard deviation was less than 10%. Conclusion： In this experiment， high performance liquid chromatography was used to detect illegal melamine additives in milk-containing beverages. The results were reproducible， simple and convenient， and it was suitable for the determination of melamine illegal additives in milk-containing beverages in food.

Keywords： high performance liquid chromatography; melamine; milk beverage

三聚氰胺（Melamine）是一種白色粉末状物质，是一种化工原料，用于制造三聚氰胺树脂，严禁人为添加到食品中[1]。三聚氰胺虽有低毒性，但同时摄入三聚氰胺和三聚氰酸会导致严重的肾毒性[2-3]。在传统的检验检测方法中，主要采用凯氏定氮法对待测物质进行含氮量的测定，最终确定蛋白质的含量。这种检验检测方法只能测得含氮量的多少，忽略了氮的来源和种类，一些不法商家添加三聚氰胺，从而提高含氮量，造成食品中蛋白质含量高的假象。此类不合格食品被人食用后严重影响人体健康，在社会上也造成了恶劣影响[4]。本实验中，利用高效液相色谱仪检测三聚氰胺的含量，为保障食品安全提供一定的参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

6种含乳饮料样品随机市购;三聚氰胺标准品（纯度为99.5%，坛墨质检科技股份有限公司）;甲醇（色谱纯，天津市北联精细化学品开发有限公司）;乙腈（色谱纯，天津市风船化学试剂有限公司）;柠檬酸（河北省保定化学试剂厂）;辛烷磺酸钠（色谱纯，天津市北联精细化学品开发有限公司）;试验用水为自制超纯水。

1.2 仪器与设备

Agilent 1260高效液相色谱仪系统，配有可变波长紫外检测器（Variable Wavelength Ultraviolet Detector，VWD）;电子分析天平（赛多利斯）;超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;進样量：20μL;流速1.0 mL/min;检测波长：240 nm;离子对试剂缓冲液-乙腈（90∶10，V/V）为流动相。

1.3.2 样品处理

按照《食品安全国家标准 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T 22388—2008）第一法处理样品[5]。

1.3.3 标准溶液配制

取三聚氰胺标准品用甲醇溶液稀释，得到

1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL及20.0 μg/mL的混合标准曲线溶液。

2 结果与分析

2.1 线性范围

利用上述方法进行实验，以峰面积y为纵坐标，质量浓度C（μg/mL）为横坐标x绘制标准曲线。线性方程为y=61.304 179 9x-36.316 309、相关系数为0.999 89、线性范围为1.0～20.0 μg/mL。三聚氰胺的相关系数R2大于0.99，具有良好的线性关系。

2.2 精密度试验

取三聚氰胺标准溶液，各进样6次，计算精密度，见表1。实验结果表明，1.0 μg/mL、2.5 μg/mL、

5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL相对标准偏差分别为5.15%、8.87%、4.04%、2.56%及2.53%，均小于10%，实验重现性好，精密度符合要求。

2.3 加标回收率试验

取空白样品，加入已知浓度的三聚氰胺标准溶液，测3次，结果如表2。由表2可知，三聚氰胺标准溶液的平均回收率为87.974%，准确度好。

2.4 部分市售样品检测

如图2所示，三聚氰胺的标准品保留时间为20.963 min。随机选取部分市售含乳饮料样品6种，按照上述的实验方法进行。图3是该6种市售含乳饮料样品其中一种三聚氰胺色谱图，在20.963 min时，没有任何峰出现，说明该样品不含三聚氰胺。其他5个样品图和图3相似，都没有在20.963 min出现峰。结果表明，这6种含乳饮料样品均没有非法添加剂三聚氰胺检出，符合国家标准要求。该方法简单方便，可以用于含乳饮料中非法添加剂三聚氰胺的检测。

3 结论

本文利用高效液相色谱法检测含乳饮料中非法添加剂三聚氰胺，该方法简单方便，重复性与准确度好，方便实验室检测含乳饮料中非法添加剂三聚氰胺。

参考文献

[1]王吉河，李卿沛.高效液相色谱法测定牛奶中三聚氰胺含量的不确定度评定[J].农业科技与信息，2019（20）：56-58.

[2]林晓珊，吴惠勤，黄晓兰，等.气相色谱-串联质谱法快速测定乳制品中三聚氰胺及其3种类似物[J].质谱学报，2014，35（6）：537-543.

[3]栗建辉，赵真，李玉兰，等.三聚氰胺及其同系物三聚氰酸毒性的研究概况[J].临床荟萃，2011，26（5）：457-460.

[4]朱晓晨.高效液相色谱法在乳制品三聚氰胺含量检测中的应用浅析[J].山东工业技术，2015（9）：270-271.

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.食品安全国家标准 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法：GB/T 22388—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.