XIAP、Smac、Caspase-3表达与浸润性乳腺癌分化程度及预后的关系

王晓烨，刘志英，冬国友

乳腺癌是严重威胁女性身体健康的恶性肿瘤。近年来，我国乳腺癌发病率上升，且呈逐渐年轻化趋势[1]。乳腺癌好发于40岁以上女性，具有高度异质性，其病理类型以浸润性导管癌最为常见，约占全部乳腺癌的65%[2]。目前，乳腺癌的发病机制尚未明确，认为可能与细胞凋亡抑制有关。有研究发现，X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂(Smac)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在细胞凋亡过程中发挥重要作用[3]。本研究通过检测浸润性乳腺癌患者癌组织XIAP、Smac、Caspase-3表达水平，探讨上述因子表达与浸润性乳腺癌分化程度及预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2018年9月—2019年9月我院收治的83例浸润性乳腺癌。①纳入标准：均符合浸润性乳腺癌相关诊断标准[4]；未进行放疗、化疗及生物免疫治疗者；肿瘤原发于乳腺；临床资料齐全。②排除标准：存在肝、肺等严重疾病者；存在远处转移者；二次手术者；合并其他乳腺疾病者。纳入患者均为女性；年龄24～77(42.57±4.57)岁；病理类型：浸润性导管癌62例，浸润性小叶癌21例；临床分期：Ⅰ期26例，Ⅱ期42例，Ⅲ期15例；分化程度：高分化22例，中分化25例，低分化36例。

1.2方法 患者均行局部(肿瘤+周围组织)切除术+腋下淋巴结清扫，术后给予常规放疗。取患者术后癌组织及距瘤体>5 cm的癌旁正常组织进行常规石蜡包埋，层厚5 μm连续切片。采用免疫组织化学SP法检测XIAP、Smac、Caspase-3表达情况，操作步骤严格遵循试剂盒说明书，一抗阴性对照使用PBS代替。结果判断：XIAP以细胞质染成棕黄色为阳性表达，Smac以细胞质或细胞膜染成棕黄色为阳性表达，Caspase-3以细胞核或细胞质染成棕黄色为阳性表达；按染色程度计分，0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为黄褐色；按阳性细胞数计分，每张切片取5个高倍视野，无阳性细胞为0分、阳性细胞<10%为1分、10%～50%为2分、50%～75%为3分、>75%为4分。两项积分相乘为总分，总分<3分为表达阴性[5]。

1.3观察指标 ①比较不同组织XIAP、Smac及Caspase-3表达情况。②分析XIAP、Smac及Caspase-3在不同分化程度浸润性乳腺癌患者中的表达情况。③对患者进行2年的电话随访(随访时间截至2021年9月)，分析浸润性乳腺癌不同XIAP、Smac及Caspase-3表达组2年生存率。

2 结果

2.1癌组织及癌旁正常组织XIAP、Smac及Caspase-3表达情况比较 浸润性乳腺癌组织中XIAP阳性表达率高于癌旁正常组织，Smac、Caspase-3阳性表达率均低于癌旁正常组织(P<0.05)。见表1。

表1 浸润性乳腺癌组织及癌旁正常组织两组XIAP、Smac及Caspase-3表达情况比较[例(%)]

2.2不同分化程度癌组织XIAP、Smac及Caspase-3表达情况比较 中、高分化组XIAP阳性表达率低于低分化组，Smac、Caspase-3阳性表达率均高于低分化组(P<0.05)，中分化组与高分化组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 不同分化程度浸润性乳腺癌组织XIAP、Smac及Caspase-3表达情况比较[例(%)]

2.3不同XIAP、Smac及Caspase-3表达组2年生存率比较 浸润性乳腺癌XIAP阴性组和阳性组2年生存率分别为100.00%和80.00%，Smac阴性组和阳性组分别为75.00%和96.30%，Caspase-3阴性组和阳性组分别为81.13%和96.67%。浸润性乳腺癌XIAP阴性组、Smac及Caspase-3阳性组2年生存率分别高于XIAP阳性组、Smac及Caspase-3阴性组(P<0.05)。

3 讨论

浸润性乳腺癌是发生于乳腺上皮组织的恶性肿瘤，具有较高的病死率。有研究认为，肿瘤发生发展与细胞增殖和凋亡的动态平衡严重失调存在密切联系[6]。有报道显示，XIAP、Smac及Caspase-3在细胞凋亡过程中具有调控作用[7]。

凋亡抑制蛋白家族是在结构上具有同源性的新型细胞凋亡抑制蛋白，可抑制Caspase活性使细胞凋亡受阻，同时还可调节细胞分裂、信号传导等[8]。在目前已发现的凋亡抑制蛋白家族成员中，XIAP被认为作用最强。国外研究发现，XIAP可能在细胞增殖、恶性转化过程中发挥重要作用[9]。PARK等[10]通过对比发现，癌组织XIAP表达强度显著高于正常组织。Smac是一种新型线粒体蛋白，基因位于第12条染色体长臂，当机体出现DNA受损、细胞表面死亡受体活化时，活性Smac蛋白会进入细胞质，与多种凋亡抑制蛋白结合，消除XIAP对Caspase的抑制作用，进而激活Caspase酶原，同时增加Caspase酶活性[11]。Smac小分子衍生物可通过不同机制促进凋亡抑制蛋白降解或泛素化，杀死肿瘤细胞。Caspase-3在细胞凋亡过程中居核心位置，亦是整个凋亡级联反应的关键调节点。Caspase-3活性受到抑制会诱发细胞凋亡障碍，导致细胞凋亡与增殖间动态平衡失调，促进肿瘤发生发展[12]。Caspase-3作为细胞凋亡的直接执行者在肿瘤细胞凋亡中具有积极作用，XIAP是目前最强的Caspase抑制物，通过抑制Caspase凋亡途径中的起始、效应阶段，从而抑制肿瘤细胞凋亡，而Smac亦是天然XIAP抑制剂，在细胞凋亡中发挥重要作用，Smac异常表达可促进肿瘤细胞凋亡[13]。

本研究发现，浸润性乳腺癌组织中XIAP阳性表达率高于癌旁正常组织，Smac、Caspase-3阳性表达率均低于癌旁正常组织，低分化癌组织上述因子表达与中、高分化比较差异显著。推测其原因可能是XIAP能直接或间接影响Caspase-3蛋白表达，当XIAP过度表达时，抑制Caspase-3，进而阻止细胞凋亡，促使浸润性乳腺癌细胞的恶性转化；Smac则能抑制XIAP，促进Caspase-3表达，Smac下调或表达缺损会导致乳腺癌细胞凋亡减少，生长期延长，过度增殖，从而导致浸润性乳腺癌形成[14]。经Kaplan-Meier生存曲线分析发现，浸润性乳腺癌XIAP阴性组、Smac及Caspase-3阳性组2年生存率分别高于XIAP阳性组、Smac及Caspase-3阴性组，与既往研究报道相符[15]。说明上述因子可作为评估浸润性乳腺癌患者预后的辅助指标，但其作用机制有待进一步研究。

综上所述，浸润性乳腺癌组织中XIAP、Smac及Caspase-3呈异常表达，三者在促进肿瘤细胞凋亡中起重要作用，并与患者预后相关。