36型人腺病毒E4ORF1真核表达载体的构建及其促进前脂肪细胞3T3-L1对葡萄糖利用的作用初探①

王冰丽，陈 哲，艾柯代姆·阿卜杜克热木，刘迪晖，赵炳尧，关亚群

（新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室，乌鲁木齐 830011）

肥胖症是一种与生活方式和遗传因素密切相关的代谢性疾病，是引起2 型糖尿病、高血压等疾病的重要因素之一，病原微生物感染所引起的肥胖具有其自身特点[1-2]。其中36 型人腺病毒（human adenovirus type 36，Ad36）感染导致人类及实验动物肥胖的现象已被许多国内外研究证实[3-4]。Ad36可以通过增加单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的表达介导炎症反应，引起机体的肥胖状态[5]。虽然Ad36 感染可引起肥胖，但是Ad36 感染的肥胖患者并未出现血糖、血脂等指标异常升高的现象，提示Ad36 编码的部分基因可能对血糖或血脂有一定调控作用。Ad36 早期基因4 开放读码框1（Early region 4 open reading frame 1，E4ORF1）编码少数氨基酸的蛋白质，Rogers等[6]认为，E4ORF1是Ad36基因组中促进细胞脂质积累及葡萄糖摄取的功能基因[7-8]。本研究拟通过构建Ad36 E4ORF1 的真核表达载体pcDNA3.1-E4ORF1，探究E4ORF1 在前脂肪细胞3T3-L1 中对糖代谢的调节作用，为糖尿病治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1 材料3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心；人36 型人腺病毒病毒悬液购自美国ATCC 公司；pcDNA3.1(-)质粒为本实验室保存；限制性内切酶EcoRI、BamHI购自美国Thermo 公司；T4 连接酶购自美国NEB 公司；2×Taq Mix、质粒小量提取试剂盒购自天根生化科技有限公司；DNA 凝胶回收试剂盒购自北京全式金生物；高糖培养基(DMEM)购自以色列BI 公司；胎牛血清购自美国Gibco 公司；EZ Trans II 转染试剂购自上海李记生物公司；……