日粮中铜和维生素A及其互作对肉仔鸡血清抗氧化酶活性的影响

曹威荣，孙 睿，吴小叶

（1.朔州职业技术学院，山西 朔州 036002；2.沁水县现代农业发展中心，山西 沁水 048200；3.朔州市平鲁区草牧业发展中心，山西 朔州 036800）

许多研究表明，营养素之间存在着广泛的互作效应[1]。铜和维生素A 是家禽必需的两种营养素，都参与机体的抗氧化功能。动物体内代谢产生的大量超氧阴离子自由基虽然是机体必需的，但也可间接或直接发挥强氧化剂作用，给机体造成伤害。因此需要及时清除多余的超氧阴离子，才能维持动物体良好的免疫状态，这就需要动物机体的抗氧化系统来起作用。动物体内的抗氧化系统包括抗氧化酶和抗氧化剂，抗氧化酶有谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、一氧化氮合成酶（NOS）等。铜是一些抗氧化酶的关键性组分，动物体内缺铜时，机体内发生的多种病理或生理变化与过氧化作用有密切的关系。本研究探讨了铜和维生素A及其互作效应对肉仔鸡血清GSH-Px和NOS的影响。

1 材料与方法

1.1 试验设计及日粮组成

试验采用Cu×维生素A（4×2）完全随机设计，试验分前、后两个阶段，即前期1～4 周龄和后期5～7 周龄两个阶段。除Cu和维生素A两个试验因素外，其他营养成分指标都参照我国肉仔鸡的营养标准。基础饲粮中实测的铜含量分别为23.36 mg·kg-1（1～4 周龄）和16.00 mg·kg-（15～7 周龄）；铜的添加形态为五水硫酸铜粉末，添加量为0、8、150、225 mg·kg-1，维生素A的添加形式为视黄醇乙酸酯粉剂，添加量为1 500、5 000 IU·kg-1。日粮组成和营养成分见表1。

表1 日粮组成和营养成分

1.2 试验动物及饲养管理

试验动物为山西文水大象禽业有限公司提供的448只1日龄艾维茵肉仔鸡，每个重复为14只鸡（7公7母），4个重复为1大组，共8大组。饲养方式为笼养，鸡笼喷漆避免其他金属矿物质的影响，使用塑料水槽和料槽，鸡只自由采食和饮水。试验地点为山西农业大学畜牧站，试验分两个阶段：前期1～4周龄，后期5～7周龄。

1.3 样品制备及指标测定方法

肉仔鸡分别于4 周龄和7 周龄进行心脏采血制备血清，低温保存。血清中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和一氧化氮合成酶（NOS）的测定均采用试剂盒法，试剂盒由南京建成生物工程研究所有限公司提供。

1.4 统计方法

采用 Excel 2003 和 SAS 6.12 软件中 ANOVA 程序对试验结果进行方差分析和邓肯氏多重比较，数值表示为“平均值±标准误”。P＜0.01表示差异极显著，P＜0.05表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。

2 结果与分析

测定试验鸡血清中GSH-Px和NOS的活性，结果见表2。

2.1 日粮不同水平铜和维生素A 及其互作对血清中GSH-Px活性的影响

由表2可知，日粮不同铜水平对前、后期血清中GSH-Px活性影响极显著（P＜0.01），前期（1～4周龄）Cu 0 mg·kg-1添加组酶活性最高，后期（5～7 周龄）Cu 150 mg·kg-1添加组酶活性最高；维生素A水平对前期血清GSH-Px 活性影响不显著（P＞0.05），对后期血清GSH-Px 活性影响极显著（P＜0.01），低维生素A 组酶活性较高；二者的交互作用对前期（1～4 周龄）和后期（5～7 周龄）血清GSH-Px 活性影响均极显著（P＜0.01）。

2.2 日粮不同水平铜和维生素A 及其互作对血清中NOS活性的影响

抗氧化酶活性测定结果见表2。由表2 可知，日粮不同铜水平对前期血清NOS 活性影响极显著（P＜0.01），以Cu 0 mg·kg-1添加组酶活性较高，日粮不同铜水平对后期血清NOS活性影响不显著（P＞0.05）；维生素A 水平对前期血清NOS 活性影响极显著（P＜0.01），维生素A 5 000 IU·kg-1添加组酶活性较高，维生素A 水平对后期血清NOS 活性影响不显著（P＞0.05）；二者的交互作用对前后期血清NOS活性影响显著，前期P＜0.01，后期P＜0.05。

表2 血清中GSH-Px和NOS活性 U·mL-1

3 讨 论

3.1 铜和维生素A及其互作对血清中GSH-Px活性的影响

GSH-Px 是动物体内普遍存在的一种重要的抗氧化酶，它催化过氧化氢发生分解反应，并特异性地催化还原型谷胱甘肽为过氧化氢，它可以保护细胞膜的结构和功能完整。GSH-Px 的含量和活性影响机体内的活性氧自由基水平。

本试验结果表明日粮铜的添加水平对GSH-Px活性影响极显著，前期Cu 0 mg·kg-1添加组酶活性最高，后期Cu 150 mg·kg-1添加组酶活性最高。这说明高铜会降低GSH-Px活性。马得莹等[2]报道，日粮中过高的铜会降低GSH-Px的活性，导致体内自由基的蓄积，引起脂氧化。本试验与此结果类似。

维生素A的添加水平对前期GSH-Px 活性影响不显著，但对后期GSH-Px活性影响极显著，低维生素A添加组酶活性较高。李英哲等[3]报道，维生素A 轻度或完全缺乏都可导致GSH-Px 活性的降低。本试验证明维生素A 添加量过高也会使GSHPx的活性降低。

铜与维生素A交互作用对GSH-Px 活性影响极显著，前期Cu（0 mg·kg-1）×维生素A（5 000 IU·kg-1）组GSH-Px 活性最高，为364.25 U·mL-1；后期Cu（150 IU·kg-1）×维生素A（1 500 IU·kg-1）组GSH-Px活性最高，为307.17 U·mL-1。可见铜与维生素A在对GSH-Px活性的影响上存在互补作用，但未见二者互作效应对GSH-Px活性影响的报道，有关机理还有待进一步研究。

3.2 铜和维生素A 及其互作对血清中NOS 活性的影响

NOS 是一氧化氮（NO）合成的限速酶，其活性与NO 水平直接相关。NO 在机体内起着毒理和生理的双重作用，少量的NO 可以发挥调节神经传导、调节心血管以及提高机体免疫力的作用[4]；大量的NO则会抑制线粒体呼吸、导致DNA损伤，并可与超氧阴离子发生作用，造成自身免疫性疾病、神经毒性等[5]。因此正常的NO 水平或NOS 水平是机体健康的重要保证。

本试验结果表明，日粮铜的添加水平对前期血清NOS活性影响极显著（P＜0.01），以Cu 0 mg·kg-1添加组酶活性较高，说明基础日粮中不再添加铜也能保持较高的NOS 活性，高铜反而抑制了NOS 的活性。对后期血清NOS 活性影响不显著（P＞0.05），说明铜对血清NOS 活性的影响和动物的生长发育阶段有关。目前尚未见到有关报道，其机理还有待进一步研究。

日粮维生素A 的添加水平对前期血清NOS 活性影响显著（P＜0.05），维生素A 5 000 IU·kg-1添加组酶活性较高，说明高水平的维生素A可提高血清NOS活性。日粮维生素A的添加对后期血清NOS活性影响不显著（P＞0.05），说明维生素A对血清NOS活性的影响也存在阶段性，和铜类似，都对幼龄动物有影响。铜与维生素A交互作用对前、后期血清NOS 活性影响显著，前期P＜0.01，后期P＜0.05。前期Cu（0 mg·kg-1）×维生素A（5 000 IU·kg-1）添加组酶活性最高，后期Cu（225 mg·kg-1）×维生素A（1 500 IU·kg-1）组酶活性最高。由此可见铜与维生素A之间存在一定的互补作用，但未见二者互作对血清NOS活性影响的报道，有关机理还有待进一步研究。

4 结 论

在本试验条件下，得出如下结果：（1）铜水平对GSH-Px 活性的影响规律不明显，前期血清GSH-Px活性以Cu 0 mg·kg-1添加组最高，后期血清GSH-Px 活性以Cu 150 mg·kg-1添加组最高；低铜（0 mg·kg-1、8 mg·kg-1）组NOS 活性较高。（2）血清GSH-Px 活性以维生素 A 1 500 IU·kg-1添加组较高；血清NOS活性以维生素A 5 000 IU·kg-1添加组高。（3）铜和维生素A 交互作用对前期、后期血清GSH-Px和NOS活性影响均显著。