桦木酸在酸性微环境中对PC-3细胞生物学行为及破骨细胞分化的作用

黄帅 黄国樑 令狐熙涛 谢尚延 瓦庆德 郭远清 黄彦

1广州医科大学附属第二医院骨科（广州 510260）；2遵义医科大学第二附属医院骨科（贵州遵义 563000）；3中山大学附属第五医院脊柱外科（广州 528406）

前列腺癌（prostate cancer，PCa）是男性最常见的以广泛骨转移为主要特征的恶性肿瘤之一，近年来我国PCa 发病率也呈逐渐上升趋势［1-2］。PCa患者一旦并发骨转移后可引起高钙血症、病理性骨折和骨骼剧烈疼痛等多种并发症［3-4］。PCa 的发生发展与肿瘤酸性微环境密切相关，PCa 细胞在生长与转移过程中通过掠夺和优先代谢营养物质形成独特的酸性微环境，进一步促进PCa 细胞的增殖、迁移及干细胞特性等［5-6］。因此，通过降低PCa细胞在酸性微环境中的生长和转移特性，有望成为一种新的PCa 治疗策略。桦木酸（betulinic acid，BA）是一种五环三萜类活性成分，具有显著的抗瘤活性、调节免疫和抗氧化应激等多种作用，能抑制黑色素瘤、乳腺癌、肺癌等肿瘤的生长与转移［8-9］。然而，BA 对PCa 骨转移的潜在抑制作用尚未见报道。因此，本研究旨在探索BA 在酸性条件下对PC-3 细胞的增殖、迁移、干性及破骨细胞分化的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI 1640培养基、DMEM培养基、10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素（美国Gibco 公司），桦木酸、MMP 抑制剂GM6001（美国Sigma 公司），重组人表皮生长因子EGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、B27 添加物、胰岛素（美国eBioscience公司），CD31、CD44、α-tublin、MMP-9、E-Cadherin 和RANKL 单克隆抗体（美国CST 公司），ECL 增强化学发光剂（碧云天生物科技公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人前列腺癌细胞株PC-3 和RAW264.7 细胞购于中国科学院细胞库，分别在含10%胎牛血清及1%青霉素-链霉素的1640培养基和DMEM 培养基培养，培养环境均为5% CO2、37 ℃。……