三阴乳腺癌BRCA1/2基因表达及其与临床病理特征的相关性

翁剑华，廖瑜玲，许素真 (惠州市第一人民医院乳腺外科，广东 惠州 516000)

乳腺癌属于一种异质性肿瘤，根据肿瘤疾病的免疫组化表达情况，往往将乳腺癌分成三阴性乳腺癌(TNBC)与非三阴性乳腺癌(NTNBC)，其中TNBC占到乳腺癌的15%～20%，并且TNBC也具有临床分期晚、容易复发及容易远处转移等特点[1]。相关研究表明，TNBC可显示出明显组织学与分子亚型多样性，不同亚型在结局上存在差异，并且驱动基因突变也存在差异，更好地揭示不同分子亚型基因变化有助于开发出新型靶向治疗药物[2]。乳腺癌易感基因(BRCA)是重要的抑癌基因，抑癌的机制是参加细胞内DNA修复环节，对细胞的周期调节以及诱导相关蛋白质生成，对肿瘤发生，越来越多的研究证实了BRCA1/2基因突变起到非常关键的作用，但是因为研究报道的方向不一致，使得结果间的差异性也比较大，关于具体BRCA1/2基因表达与TNBC关系的研究需进一步证实[3]。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2020年1月～2021年5月收治的89例TNBC患者为研究对象，并纳入试验组。纳入标准：①患者均经免疫组化检查证实，同时2名病理专家均被证实为TNBC；②患者均为女性，临床资料以及病理资料完整；③术前未接受相关放化疗治疗的患者；④自愿参加，本人在知情同意书上签字。排除标准：①重要的脏器功能病变患者；②病理证实合并其他恶性肿瘤疾病者；③精神类疾病者或依从性差者。TNBC患者年龄27～70岁，平均(49.12±1.56)岁；体重42～65 kg，平均(53.15±2.17)kg。同时选择同期进院诊治的90例NTNBC患者为对照组，患者临床资料完整并且认知良好，年龄26～70岁，平均(48.96±1.52)岁；体重41～65 kg，平均(52.96±2.16)kg。比较两组一般资料，差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2方法：采取二代测序技术检测BRCA1/2基因突变情况，主要是抽取每名研究对象清晨空腹阶段5ml的静脉血液，保存在4℃ 10 ml EDTA抗凝试管中，定期提取DNA。对BRCA1、BRCA2的编码区与外显子内含子拼接区做PCR扩增处理，引物序列根据条件以及要求设定。

PCR反应体系如下：100 ng基因组DNA，1.5 mmol/L MgCl2、50 mmol/L KCl，10 mmol/L Tris-HCl(pH8.3)，200 μmol/L dNTPs，0.5 μmol/L引物，0.2 μl TaqDNA聚合酶。PCR反应条件：95℃ 5 min预变性后做35个周期的循环(94℃ 30 s，55℃ 45 s，72℃ 1 min，最后一步为72℃ 5 min)。应用变性高效液相色谱法分析筛选突变BRCA1、BRCA2基因编码的外显子以及邻近内含子剪接区域，筛选出异常的DNA序列。

1.3观察指标：①观察试验组与对照组经检查BRCA1/2基因突变情况。②收集试验组患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、病理类型、TNM分期等资料，分析BRCA1/2基因表达与临床病理特征的相关性。

1.4统计学方法：使用SPSS21.0软件行t及χ2检验。

2 结果

2.1BRCA1/2基因突变：在BRCA基因突变的检测情况上，试验组BRCA1/2基因突变20例，突变率为22.47%，其中BRCA1突变13例，BRCA2突变7例。对照组BRCA1/2基因突变8例，突变率8.89%，其中BRCA1突变5例，BRCA2突变3例。试验组在BRCA1/2突变与BRCA1突变发生率上均高于对照组(P<0.05)，在BRCA2突变上比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组BRCA1/2基因突变情况比较[n(%)]

2.2BRCA1/2基因表达同临床病理特征相关性：相关性分析结果表明，年龄<35岁、无淋巴结转移及TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期的BRCA1/2基因突变率高，同未突变比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 BRCA1/2基因表达同临床病理特征相关性[n(%)]

3 讨论

乳腺癌在女性中有非常高的发生率，并且也具有高度异质性的特征，发病的过程复杂并且生物学行为特征也较特殊，一些患者虽然分期一致但也常见不同表现以及预后差异[4]。TNBC是一种特殊类型的乳腺癌，这种类型的乳腺癌的远处转移可能性较常规的乳腺癌更为强烈，在预后上较差，且治疗难度上也比较高，因此在临床中对此类疾病的诊治研究关注度也比较高[5]。

TNBC好发群体是中年妇女，尤其在绝经前后有很高的发生率，伴有BRCA基因突变是常见的情况[6]。BRCA1基因属于较为常见的基因，主要为肿瘤抑制基因，存在的部位位于正常上皮细胞核，基因的作用上在于参与细胞周期的调控，基因的转录以及细胞生长的抑制，并且还可以修复损伤的DNA，重构其功能[7]。而如果在BRCA基因出现突变的情况，同时在表达量上呈降低趋势，使得BRCA原本的作用出现逆转及丧失，参加细胞裂解的作用消失，细胞增殖随之控制，肿瘤就出现持续增长。因此BRCA基因就被作为基因组保护的成员，参与基因修复，对损伤严重的情况修复难度也高，可诱发细胞凋亡作用。在多项研究中发现，乳腺癌细胞同正常的上皮细胞比较，存在BRCA1/2基因表达水平下降的情况[8]。TNBC在BRCA1/2基因表达上也存在一些表型特征，因此检测BRCA基因表达对TNBC的治疗及预后有重要价值。

综上所述，BRCA1/2基因表达同三阴性乳腺癌患者年龄、淋巴结转移与TNM分期存在显著的相关性，存在BRCA基因突变的携带者更容易患乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌，因此需要临床中加强相关检查，为疾病早期诊治提供重要帮助。