多烯磷脂酰胆碱联合双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对慢性乙肝肝硬化患者免疫功能的影响

葛苒苒 林秀芳 杜学峰

1.浙江省台州医院感染科，浙江台州 317000；2.浙江省台州医院肝胆外科，浙江台州 317000

慢性乙肝为乙肝病毒引起的，为慢性传染性疾病，患者发生后可出现乏力、肝区疼痛及恶心等症状，且该病的发展可导致患者出现肝硬化，严重损坏患者的生命健康。肝硬化为肝衰竭或肝癌前的关键阶段，主要表现为肝脏组织坏死、形成假小叶与弥漫纤维化，超过10%的肝硬化可发展为肝癌，影响患者的生活质量，并威胁患者的生命安全。慢性乙肝肝硬化的治疗临床主要采用抗病毒感染，但此类治疗方式需长期治疗，故临床寻找新的药物较为重要。多烯磷脂酰胆碱为保护肝细胞膜的药物，具有抗炎保肝的作用。双歧杆菌乳杆菌三联活菌片可使患者体内的内毒素产生减少，保护肠黏膜完整，减少有害菌的繁殖。双歧杆菌乳杆菌三联活菌片、多烯磷脂酰胆碱在临床上的报道甚少，缺乏有效依据，故在本研究中，分析两种药物结合使用对慢性乙肝肝硬化的临床疗效，为临床诊治提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2016 年5 月～2020 年8 月在浙江省台州医院门诊进行诊治的100 例慢性乙肝肝硬化患者，分为对照组与研究组，每组各50 例。对照组男29例，女21 例；年龄33～76 岁，平均（47.17±8.25）岁；病程3～12 年，平均（6.52±1.67）年。研究组男30 例，女20 例；年龄31～75 岁，平均（46.61±7.86）岁；病程2～11年，平均（5.96±1.58）年。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义，具有可比性（P＞0.05）。本研究经浙江省台州医院医学伦理委员会批准通过，所有患者及家属均签署知情同意书。

纳入标准：①符合《慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》、《肝硬化诊治指南》中对于慢性乙型肝炎的诊治标准；②患者发生肝硬化；③患者近期未接受免疫调节治疗；④患者未接受抗病毒治疗。

排除标准：①心功能异常者；②处于肝硬化失代偿期者；③合并有其他恶性肿瘤者；④免疫系统异常者；⑤精神状态异常者。

1.2 方法

对两组患者进行养肝、护肝、抗肝纤维化等基础治疗。

对照组患者在进行基础治疗并服用双歧杆菌乳杆菌三联活菌片（内蒙古双奇药业股份有限公司，国药准字S19980004，规格，0.5 g/片），4 片/次，3 次/d，连续服用3 个月。

研究组患者在对照组的基础上口服多烯磷脂酰胆碱[赛诺菲（北京）制药有限公司，国药准字H20059010，228 mg/粒]，2 粒/次，2 次/d，连续服用3 个月。

1.3 观察指标及评价标准

1.3.1 肝功能指标、肝纤维化指标检测 收集所有患者治疗前与治疗后3 d 清晨空腹静脉血10 ml，以离心半径10 cm、转速3000 r/min 进行10 min 离心处理，分离出上层血清，保存于-80℃，待用。采用全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，BS-600）检测丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、总胆红素（total bilirubin，TBIL）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、透明质酸（hyaluronic acid，HA）、Ⅲ型前胶原（typeⅢprocollagen，PCⅢ）、层黏蛋白（laminin，LN）表达水平。

1.3.2 炎症因子水平检测 收集所有患者治疗前与治疗后3 d 清晨空腹静脉血10 ml，以离心半径10 cm、转速3000 r/min 进行10 min 离心处理，分离出上层血清，保存于-80℃，待用。采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）水平，将稀释后的碳酸盐缓冲液放入孔中，4℃下过夜，后洗净，每孔滴入1%BSA 在37℃下进行封闭处理1 h，后洗净，每孔加入0.1 ml 稀释抗血清，37℃下轻微摇晃40 min，后洗净，使用TMB 显色处理，在450 nm 波长下检测OD 值，查出IL-6、TNF-α、MMP-2 表达水平。IL-6、TNF-α、MMP-2 试剂盒由上海酶研生物科技有限公司提供，货号：EK-H10960。

1.3.3 免疫功能指标检测 收集所有患者治疗前与治疗后3 d 清晨空腹静脉血10 ml，以离心半径10 cm、转速3000 r/min 进行10 min 离心处理，分离出上层血清，保存于-80℃，待用。采用流式细胞仪（贝克曼库尔特，Cytomics FC 500）检测CD3、CD4、CD8、CD4/CD8表达水平。

1.3.4 治疗效果 对患者治疗后效果进行判定，显效：肝功能指标改善＞50%。有效：肝功能指标减轻25%～50%，无效：肝功能指标减轻＜25%。总有效率（%）=（显效+有效）例数/总例数×100%。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者治疗前后肝功能指标对比

两组的ALT、AST、TBIL 水平治疗前比较，差异无统计学意义（均P＞0.05），研究组ALT、AST、TBIL 水平治疗后低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 两组患者治疗前后肝功能指标对比（）

2.2 两组患者治疗前后肝纤维化指标对比

两组的HA、PCⅢ、LN 水平治疗前比较，差异无统计学意义（均P＞0.05），研究组HA、PCⅢ、LN 水平治疗后低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表2。

表2 两组患者治疗前后肝纤维化指标对比（ng/ml，）

2.3 两组患者治疗前后炎症因子水平对比

两组的IL-6、TNF-α、MMP-2 水平治疗前比较，差异无统计学意义（均P＞0.05），研究组IL-6、TNF-α、MMP-2 水平治疗后低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表3。

表3 两组患者治疗前后炎症因子水平对比（ng/ml，）

2.4 两组患者治疗前后免疫功能对比

两组治疗前的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8水平比较，差异无统计学意义（均P＞0.05）；治疗后，研究组CD3、CD4、CD4/CD8水平高于对照组，CD8水平低于对照组，差异有统计学意义（均P＜0.05）。见表4。

表4 两组患者治疗前后免疫功能对比（）

2.5 两组患者临床疗效对比

研究组治疗总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

表5 两组患者临床疗效对比[n（%）]

3 讨论

慢性乙肝是由乙型肝炎病毒引发的，病程时间长，且发病较为隐匿，大多患者在体检过程中发现。慢性乙肝病毒患者得病后可表现为肝功能变化、恶心呕吐、出现黄疸且食欲不佳，慢性乙肝可通过血液与日常接触传播，严重患者病情易反复发生。肝硬化是由肝病患者肝脏发生纤维化，临床治疗慢性乙肝肝硬化的主要为保肝与抗病毒，减少肝脏损伤防止病情发展。

多烯磷脂酰胆碱是从大豆中提取磷脂精制作而成的，主要成分为二亚酰磷脂胆碱，为恢复膜功能的物质，可使受损的肝细胞膜得到恢复，并提高人体内源性磷脂，补充人体所需的营养，还可使膜的流动性与稳定性增强，并维持肝脏的膜功能，调节膜活性与含量。研究表明，患者的氧化应激平衡可使用多烯磷脂酰胆碱进行调节，多烯磷脂酰胆碱还可使肝脏的炎症反应降低，改善患者的血脂代谢。长型双歧杆菌、嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌为三联微生态制剂，可组成双歧杆菌乳杆菌三联活菌片，促进肠道内厌氧菌的繁殖与抑制需氧菌的繁殖，使内毒素的产生减少，并使肠道细菌异位，保护肠黏膜屏障，产生乳酸与醋酸，使肠道酸化抑制病菌的生长，使患者的机体抗病能力增强。本文研究发现，双歧杆菌乳杆菌三联活菌片、多烯磷脂酰胆碱结合使用可保护患者肝功能，加强疗效，促进肝功能的恢复，增强患者的免疫功能。

ALT、AST、TBIL 是反映患者肝功能的实验性指标，乙型肝炎病毒在患者体内复制可使患者的肝细胞受到持续损伤，使患者体内ALT、AST、TBIL 水平升高。本研究表明，治疗后患者体内ALT、AST、TBIL 水平降低，表明两种药物共同使用可增强患者疗效，使患者的肝功能恢复加快，其原因可能为两者联合纠正肠道内微生态紊乱，并减轻肠源性内毒素血症，抑制了相关炎症的发展与免疫的损伤，加快肝功能的恢复。HA、PCⅢ、LN 为反映肝纤维化的敏感指标，其中HA为细胞外基质中蛋白多糖的组成部分，可预测肝硬化及肝细胞纤维化的敏感程度，LN 为细胞外基质中糖蛋白的组成部分，可反映出肝纤维化的程度。在纤维化的发展过程中，HA、PCⅢ、LN 含量可通过肝细胞外基质水解与合成升高，本文进一步分析显示，多烯磷脂酰胆碱、双歧杆菌乳杆菌三联活菌片结合使用可降低HA、PCⅢ、LN 含量，表明两者共同使用可逆转肝纤维化，保护患者肝功能。

研究表明，机体炎症及抗炎反应失衡可使患者的肝硬化得到持续发展，TNF-α 提高库普弗细胞活性，并使星状细胞促纤维化效应增强，促进慢性乙肝肝硬化的生理进程，IL-6 为肝细胞急性期炎症反应的诱导因子，可介导肝纤维化的发生，加快肝硬化进展，MMP-2 可调节细胞外基质胶原降解酶，提高多型胶原降解速率。本文研究表明，双歧杆菌乳杆菌三联活菌片、多烯磷脂酰胆碱结合使用可使TNF-α、MMP-2、IL-6 水平降低，使肝硬化的进程减缓，并降低肝脏炎性的损伤的程度，效果良好。T 淋巴细胞介导的免疫应答紊乱与肝硬化、肝纤维化密切相关，随着乙型肝炎病毒的增加，CD3总数逐渐减少，CD4、CD8淋巴细胞向CD8偏倚，CD4/CD8比值不断下降。本研究显示，双歧杆菌乳杆菌三联活菌片、多烯磷脂酰胆碱结合使用可提高CD4/CD8比值，表明两者共同使用可纠正T 淋巴细胞紊乱，升高CD4/CD8比值。虽然本文认为两者联合可用于慢性乙肝肝硬化患者，但目前临床上并未有研究分析两者应用效果，且本文仅分析其对患者肝功能指标、纤维化指标、炎症指标及免疫功能的影响，后续应进一步分析验证本文研究结果，以期望造福于更多的患者。

综上所述，多烯磷脂酰胆碱、双歧杆菌乳杆菌三联活菌片结合对慢性乙肝肝硬化的治疗疗效理想，并可改善患者的肝功能与免疫功能，可在临床上推广使用。