天麻钩藤加味饮对肝阳上亢型高血压大鼠的作用研究

李新，丁匀乔，袁名扬，蒋蕾，杨波※，彭海生※

（1.哈尔滨商业大学药学院，黑龙江 哈尔滨 150076；2.哈尔滨医科大学大庆校区药学院，黑龙江 大庆 163319）

高血压作为全球高发的慢性疾病，知晓率、控制率和治疗率均低[1-3]。目前高血压人数骤增，逐渐趋向年轻化，形式较为严峻。Katona Eva[4]研究表明，体内ET-1和NO水平失衡是引起血压变化的重要原因，因此均衡ET-1和NO水平是治疗高血压的关键。西医现有治疗药物包括血管紧张素转换酶抑制剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂和 受体拮抗剂以及利尿剂。但是西药治疗效果单一，而且副作用大，存在安全隐患[5]。而中药为天然成分，安全性高，治疗存在灵活性，可以根据患者症状进行药物的调试使用。

天麻钩藤加味饮是常用的民间验方，由天麻、钩藤、地龙、黄芩、石决明和川牛膝等13味饮片组成，用于肝阳上亢、肝肾阴虚、头痛目眩的治疗，在临床上广泛应用。研究证明，其主要作用于肾素 血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）控制血压，降压效果显著[6,7]。

本研究通过探讨天麻钩藤加味饮对肝阳上亢型高血压大鼠的治疗作用，确定天麻钩藤加味饮发挥作用的途径，为临床研究提供依据。

1 材料

1.1 仪器

FH2004A电子分析天平（龙腾电子科技）；DMI3000B倒置荧光生物显微镜（德国莱卡）；Synefe-1200LC多功能酶标仪（美国伯腾仪器）；BP-98A无创鼠尾动脉血压测量仪（日本软隆）。

1.2 动物

36只SPF级SD大鼠，购自长生生物技术有限公司，均为雄性，体质量200～220 g。

1.3 饮片及试剂

天麻9 g、钩藤12 g、黄芩12 g、石决明18 g、川牛膝12 g、地黄10 g、杜仲9 g、槲寄生9 g、栀子12 g、益母草10g、茯苓9 g、夜交藤10 g、地龙8 g（亳州长征中药饮片）、制附子200 g（哈尔滨普方药业饮片有限公司）。

L-NNA（上海瑞勇）；卡托普利片（常州制药厂）；NO试剂盒（伊莱瑞特生物科技）；ET-1试剂盒（伊莱瑞特生物科技）。

2 方法

2.1 造模、给药及分组

2.1.1 制备肝阳上亢型高血压大鼠模型 给SD大鼠连续28 d腹腔注射L-NNA 15 mg/（kg d）建立高血压模型[8]，然后按照生药量2 g/（kg d）灌胃28 d附子汤，以易怒程度确定肝阳上亢证模型[9]。筛选出造模后血压高于150 mmHg的大鼠作为成功模型。

2.1.2 药剂的制备 附子汤的制备：取200 g制附子，加1 000 mL水，浸泡30 min，煎煮2次，每次1.5 h，合并药液浓缩至500 mL，备用。

天麻钩藤加味饮的制备：按量称取13味饮片，加200 mL水，浸泡30 min，煎煮2次，每次煎煮1.5 h；合并药液按照给药量进行浓缩，备用。

2.1.3 分组及给药方式 大鼠适应性喂养1周后，随机分成6组，空白组、模型组、卡托普利组、TGJY低剂量组、TGJY中剂量组、TGJY高剂量组，每组6只。卡托普利组按照体重灌胃卡托普利4.5 mg/（kg d）；TGJY低、中、高剂量组按照体重灌胃天麻钩藤加味饮，按照生药比为10 g/（kg d）、20 g/（kg d）、25 g/（kg d）；空白组和模型组灌胃去离子水；每天1次，连续灌胃14 d。灌胃药量按照公式1计算。

大鼠的剂量=Xmg/kg 70 kg 0.018/0.2 kg=6.3X mg/kg（公式1）。

式中X：人的用量

2.2 饮水量的检测

每天定时给每组大鼠提供500 mL的水，第2天同一时间计算饮水量，取每周的平均值进行比较。

2.3 血压的测量

将大鼠固定，用45℃的温水浸泡鼠尾5 min。静置5 min后用血压测量仪测量血压，每只测量3次，记录大鼠的收缩压（SBP）及舒张压（DBP），计算平均值。分别在造模前后及给药后测量。

2.4 易激惹程度的评价

每天观察鼠的状态，按照表1进行评分。根据记录评分取平均值，评价大鼠的易怒情况。

表1 易怒程度评价指标Table 1 Evaluation index of the irritability

2.5 脏器系数的观察

末次给药后禁食不禁水12 h，腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，称体重，生理盐水灌流，取心、肾以及脾脏进行称重，计算脏器系数。

2.6 主动脉形态学观测

取胸主动脉和腹主动脉，4%多聚甲醛固定，脱水，透明，石蜡包埋、切片，苏木素 伊红（HE）染色，在显微镜下观察，进行主动脉形态学观测。

2.7 ELISA检测

心脏取血，在 4℃放置过夜，离心（3 000 r/min）5 min，分离血清置于 20℃下备用，根据ELISA试剂盒说明书，检测血清中NO、ET-1含量。

2.8 统计学分析

采用SPSS 26.0软件对所得数据进行统计学分析，数据结果用x±s表示，对组间样本进行单因素方差分析及显著性检验，P＜0.05具有统计学意义。

3 结果

3.1 饮水量结果

与空白组相比，造模后的大鼠饮水量显著增加（P＜0.01），与模型组大鼠比较，给药组大鼠饮水量都有所下降，TGJY高剂量组有显著性的下降（P＜0.01）。结果见图1（第1周造模前，2～5周高血压造模，6～9周肝阳上亢模型，10～11周给药）。

图1 各组大鼠饮水量变化响（±，n=6）Fig.1 Changes in water consumption of rats in each group(±,n=6)

3.2 血压测定结果

与空白组相比，造模后的大鼠血压显著增加（P＜0.01），增加值大于20 mmHg且都大于150 mmHg，成功得到高血压大鼠模型。在给药后，给药组血压对比模型组都有所下降，TGJY高剂量组有显著性的下降（P＜0.05），认为TGJY高剂量的治疗效果最好。结果见表2和表3。

表2 各组大鼠DBP变化（±，n=6）Table 2 Changes in DBP of rats in the each group(±,n=6)

表3 各组大鼠SBP变化（±，n=6）Table 3 Changes in SBP of rats in each group(±,n=6)

3.3 易激惹程度结果

造模后，大鼠出现易怒程度，得到肝阳上亢型高血压大鼠模型。给药后的大鼠易怒程度有所下降，尤其是中剂量组和高剂量组与模型组相比具有显著性（P＜0.05）；TGJY中剂量组和TGJY高剂量组相比卡托普利组显著下降（P＜0.05）。所以证明天麻钩藤加味饮对肝阳上亢型高血压有治疗效果，而且比西药的治疗效果更佳，见表4。

表4 各组大鼠易怒程度变化（±，n=6）Table 4 Changes in irritability of rats in the each group(±,n=6)

3.4 脏器系数结果

高血压对大鼠的肾脏系数具有一定的影响，对心脏有显著影响（P＜0.05）；由结果还可以得到天麻钩藤加味饮对肾脏也有一定的治疗效果，经过治疗后脏器系数逐渐趋向空白组大鼠。但是对于脾脏的治疗效果并不明显，见图2。

图2 各组大鼠脏器系数比较（±，n=6）Fig.2 Comparison of organ coefficients of rats in the each group(±,n=6)

3.5 主动脉形态学观测结果

高血压模型组大鼠血管内膜增厚，结构遭到破坏，出现紊乱。经过药物治疗后大鼠主动脉内膜趋向光滑，结构变的紧密，纤维排列也有不同程度改善。TGJY中、高剂量组改善效果尤其明显，见图3和图4。

图3 各组大鼠胸主动脉形态学比较（HE 400，n=6）Fig.3 Morphological comparison of thoracic aorta in each group(HE 400,n=6)

图4 各组大鼠腹主动脉形态学比较（HE 400，n=6）Fig.4 Morphological comparison of abdominal aorta in each group(HE 400,n=6)

3.6 ELISA结果

与模型组相比，给药组大鼠血清中ET-1浓度降低，NO浓度增加。从表5看，各给药组与模型组项目相比，均能显著性提高NO浓度，显著降低ET-1浓度（P＜0.01）。

表5 各组大鼠NO和ET-1含量比较（±，n=6）Table 5 Comparison of NO and ET-1 contents among groups of rats(±,n=6)

4 讨论

高血压是常见的心血管疾病，对脑、心脏和肾脏等靶器官都有影响，会引起网膜病变、冠心病、肾病和脑卒中等并发症[10]。而中医讲究的肝阳上亢证表现为头痛、眩晕、耳鸣、急躁易怒、口干舌燥和心悸健忘[11]。张兰娥等[12]研究表明，地龙中含有的地龙蛋白肽能显著降低原发性高血压（SHR）的血压（P＜0.05）。刘萍萍等[13]研究表明，地龙降压胶囊联合常规西药治疗可增强降压效果。

L-精氨酸是一种一氧化氮合成酶（NOS）抑制剂，能抑制NO的合成，对血管收缩压产生影响，诱导动物出现高血压[14]。短时间内体内出现大量NOS抑制剂，阻碍血管内皮细胞生成NO，损害血管结构，导致动脉血压升高，而NO的减少会使ET-1的含量增加，NO和ET-1两者相互作用，使动物出现持续性高血压[15]。鄢东红等[16]研究表明，给自发性高血压的大鼠灌胃附子汤后，大鼠出现饮水量增加，旋转时间减短，疼痛阈降低的现象，这与肝阳上亢证患者出现的眩晕、口干、头痛等临床特征相符合。实验结果表明，模型组大鼠血压和易怒程度显著高于空白组（P＜0.05），表明L-NNA结合附子汤能导致肝阳上亢型高血压的生成；主动脉HE染色的结果表明，造模结束后主动脉的结构发生变化，内膜粗糙，结构紊乱，纤维排列稀疏；ELISA检测结果显示，模型组大鼠NO水平下降，ET-1水平上升，打破了它们之间的平衡关系。经天麻钩藤加味饮治疗后，大鼠血压明显下降，饮水量下降，易怒情况减少，主动脉损伤有所恢复，NO和ET-1水平逐渐趋于平衡，缓解主动脉的压力，从而使改善大鼠致肝阳上亢型高血压症状。

天麻钩藤加味饮是民间验方，方中君药天麻平肝熄风，臣药钩藤清热平肝，其他为佐药，具有清热燥湿、泻火解毒、清热定惊功效，对降压、眩晕、头痛效果显著。本研究深入探讨了天麻钩藤加味饮的降压作用，通过检测大鼠血清中NO和ET-1的水平探索天麻钩藤加味饮降压作用。结果表明，天麻钩藤加味饮大鼠血清中NO水平上调，ET-1水平下调，表明天麻钩藤加味饮可以通过调节NO和ET-1的平衡，从而降低血管舒张因子对血管的损伤，促进血管功能恢复，也确定了天麻钩藤加味饮给药量25 g/（kg d）效果最好。

综上所述，天麻钩藤加味饮可以通过降低高血压大鼠饮水量、易怒程度、ET-1含量和增加NO含量，改善主动脉形态受损，从而起到降压的效果，以改善高血压引起的症状。