UPLC-MS/MS 同时测定饮料中5 种甜味剂

杨 颖

（建德市食品药品检验检测中心，浙江杭州 311600）

甜味剂是重要的食品添加剂，主要用于增加或改善食品甜味感、提升品质[1]。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）对饮料中添加合成甜味剂的限量和使用范围作出明确规定[2]。而现行有效检测方法包括《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》（GB/T 5009.140—2003）、《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（GB 5009.28—2016）、《食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定》（GB 5009.97—2016）、《食品安全国家标准 食品中阿斯巴甜和阿力甜的测定》（GB 5009.263—2016）这4 种方法，其中样品净化、目标物提取、仪器测定条件和流动相设置等各不相同，同时测定以上项目需要检测人员多、工作时间长，效率低[3]。质谱检测因其低检出限、高灵敏度与强抗干扰能力，成为当前检测的首选。为减少实验成本、提高工作效率，建立超高压液相色谱-串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）检测方法显得十分必要。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

饮料均购自本地超市。

甲醇、乙腈（HPLC 级，默克公司）；甲酸（HPLC级，CNW TECHNOLOGIES）；阿斯巴甜（97.4%，坛墨质检），阿力甜（98.8%，坛墨质检），糖精钠（1 000 μg/mL，坛墨质检）；甜蜜素（1 000 μg/mL，坛墨质检）；三氯蔗糖（99.6%，坛墨质检），安赛蜜（1 000 μg/mL，坛墨质检），纯水由Millipore 超纯水仪制备。

电子天平（BT125D，赛多利斯仪器有限公司）；超高效液相色谱-串联质谱联用仪（TQ-S misco、Waters）；超声仪（KQ=500 型，昆山市超声仪器有限公司）；旋涡混合器（WH-861，华利达）。

1.2 实验方法

1.2.1 标准中间液溶液

分别取单标100 μL 于10 mL 容量瓶中，用1 ∶1甲醇水溶解并定容，得到质量浓度10 mg/L 的混合标准储备液。再取10 mg/L 混合标准储备液1 mL 稀释至10 mL，得到1 mg/L 中间液。

1.2.2 标准工作溶液

移取中间液用水稀释，得到0.005 mg/L、0.010 mg/L、0.050 mg/L、0.100 mg/L、0.200 mg/L、0.400 mg/L、0.800 mg/L 和1.000 mg/L 系列标曲，现配现用。

1.2.3 样品处理

参考标准SN/T 3538—2013，取2 g 超声脱气后的样品于100 mL 容量瓶中，用水稀释定容至刻度，过0.22 μm 滤膜后供UPLC-MS/MS 分析[4]。

1.2.4 仪器条件

（1）UPLC 条件。UPLC 系统：ACQUITY UPLC I-CLASS；色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱温：35 ℃；进样量：5 μL；流动相A：0.1%甲酸水溶液；流动相B：0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.3 mL/min[5]。洗脱梯度程序见表1。

表1 流动相洗脱梯度表

（2）质谱条件。电离模式：ESI-；毛细管电压：-2.5 kV；脱溶剂温度：550 ℃；检测方式：MRM；源气体流量：溶媒挥散气体流速为1 000 L/Hr，进样锥气体流速为50 L/Hr。

2 结果与分析

2.1 质谱条件的优化

手动调谐优化锥孔电压和碰撞能量的质谱条件见表2。

表2 5 种甜味剂质谱检测条件

2.2 定量限和线性关系

实验得到5 种甜味剂标准曲线的线性回归方程、相关系数R2及方法定量限（以信噪比S/N≥10 计算），结果见表3。

表3 方法线性回归方程、线性范围及检出限

2.3 精密度和回收率的测定

空白样品加标（低、中、高3 个不同浓度，每个浓度下进行6 次平行试验），计算结果见表4，阿斯巴甜、阿力甜、糖精钠、甜蜜素和安赛蜜的加标回收率为82.6%～107.0%，相对标准偏差为0.32% ～ 4.56%。

表4 加标回收率和精密度（n=6）

2.4 实际样品测定

采用建立的方法，对市场上销售的10 种饮料进行检测，5 种人工合成甜味剂均未检出。

3 结论

超高效液相色谱-串联质谱法测定饮料中5 种人工合成甜味剂，操作快捷方便，其线性、定量限、回收率及精密度指标均能够满足日常食品检测的监管需要。