Galectin-3、VEGF-C、SFRP1在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎组织中的表达及其临床意义

刘 艳,冯 宁

西安市中心医院妇产科，陕西西安 710003

Galectin-3作为一种β-半乳糖苷结合蛋白，其相对分子质量约31×103，是半乳糖凝集素家族中唯一具有嵌合结构的成员，其不仅包含环绕于碳水化合物结合位点的Galectin家族共有的球形结构，能特异性识别并结合β-半乳糖残基，也合并12个氨基酸残疾的氨基末端结构域，可与糖复合物细胞表面结合从而发挥对应功能，同时还富含甘氨酸、脯氨酸等类α-胶原序列，是基质金属蛋白酶(MMP)底物[1]。而血管内皮生长因子C(VEGF-C)又称VEGF相关蛋白，作为VEGF家族新成员，也是迄今为止发现的唯一淋巴血管内皮细胞刺激因子；分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)则作为核心元件参与Wnt信号传导通路，在肿瘤的形成、进展中发挥重要作用[2]。近年来，有研究指出Galectin-3、VEGF-C、SFRP1皆与宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈炎等宫颈病变的发生、发展有密切关联[3]。鉴于此，现采集临床标本着重对Galectin-3、VEGF-C、SFRP1在宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎组织中的表达及其临床意义进行分析，旨在为宫颈病变的早期诊断及治疗提供理论及实验依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 采集2016年7月至2020年8月在本院手术切除并经手术病理组织学证实为宫颈鳞癌的标本57份，术前均未经放疗或化疗，年龄40～65岁，平均(50.27±6.12)岁；采集因CIN而行宫颈椎切或子宫全切的宫颈组织标本57份，年龄31～55岁，平均(40.27±3.85)岁；另选取48份慢性宫颈炎活检标本，年龄21～50岁，平均(31.66±4.27)岁。所纳入病例标本均有明确病理组织学诊断证据[4]，标本纳入前患者均未接受任何治疗，标本采集均经患者知情同意，并签署研究相关同意书。

1.2方法 Galectin-3、VEGF-C、SFRP1的表达情况均采用免疫组织化学法检测，鼠抗人Galectin-3单克隆抗体、兔抗人多克隆抗体VEGF-C、免疫组织化学ElivisonTMPlus试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒(DAB-0031)、磷酸盐缓冲液均来自福建迈新生物科技，兔抗人多克隆抗体购自北京博奥森生物科技，具体操作如下：(1)将浸泡(浸泡溶液为重铬酸钾)24 h的载玻片冲洗后60 ℃烤箱烤干后，再次置入1∶10多聚-L-赖氨酸溶液中浸泡5 s沥干，并60 ℃烤箱烤干备用；(2)标本采集后常规应用福尔马林固定，石蜡包埋，将其连续切成厚度4 μm的组织切片，并置入70 ℃热水展开，将展开处理后的洁净载玻片置于室温干燥，时间为10 min，再置于60 ℃烤箱烘烤30 min；(3)采用增强聚合物法进行免疫组织化学染色处理，先常规二甲苯脱蜡及酒精梯度脱水处理后使用磷酸盐缓冲液冲洗，重复3次，3分钟/次，再将3%H2O2滴于切片组织，每个切片1滴，室温孵育10 min后磷酸盐缓冲液冲洗，重复3次，3分钟/次，阻断内源性过氧化物酶活性后进行抗原修复，修复后除去磷酸盐缓冲液，并将每张切片加入1滴相应第一抗体，4 ℃过夜，磷酸盐缓冲液冲洗3次，3分钟/次，再次除去磷酸盐缓冲液，分别将每张切片滴加1滴聚合物增强剂，室温孵育20 min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，3分钟/次，再次除去磷酸盐缓冲液，切片滴加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温孵育30 min，磷酸盐缓冲液冲洗3次，5分钟/次，再次除去磷酸盐缓冲液，切片滴加1滴二甲联苯胺液，显微镜下观察3～10 min，若显色为阳性则终止显色，最后蒸馏水冲洗、苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经二甲苯透明，梯度浓度乙醇脱水后采用中性树胶封固，晾干后在400倍镜下观察结果。

1.3Galectin-3、VEGF-C、SFRP1阳性表达评价标准 均在显微镜(×400)下选取5个代表性区域进行观察并计数，Galectin-3阳性评价标准：细胞质内可见棕黄色颗粒均提示阳性表达，其中棕黄色颗粒占总细胞总数的百分比>75%皆为强阳性(+++)、棕黄色颗粒占总细胞总数的50%～75%为中度阳性(++)、棕黄色颗粒占总细胞总数的25%～<50%为阳性(+)、棕黄色颗粒占总细胞总数的百分比<25%则为阴性(-)；VEGF-C、SFRP1蛋白阳性评价标准：细胞质内可见淡黄色至棕黄色颗粒均提示VEGF-C阳性表达，而细胞质及细胞膜呈棕黄色颗粒则提示SFRP1阳性表达，将着色情况按强度依次分为无(0分)、弱阳性(1分)、中等阳性(2分)、强阳性(3分)，阳性细胞数占细胞总数的百分比分级为无阳性细胞(0分)、阳性细胞数占细胞总数的百分比<25%(1分)、阳性细胞数占细胞总数的25%～<50%(2分)、阳性细胞数占细胞总数的50%～75%(3分)、阳性细胞数占细胞总数的百分比>75%(4分)，以阳性细胞着色强度及阳性细胞占细胞总数的百分比综合评估阳性表达等级，0分为阴性(-)、1～2分为阳性(+)、3～4分为中阳性(++)、5～7分为强阳性(+++)。

1.4观察指标 (1)Galectin-3、VEGF-C、SFRP1蛋白在宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎组织中的表达情况；(2)不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、组织学分化程度及是否有淋巴结转移的宫颈鳞癌及不同分级的CIN组织中Galectin-3、VEGF-C、SFRP1阳性表达率。

1.5统计学处理 采用SPSS19.0软件进行数据处理及统计分析。计数资料采用频数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1Galectin-3、VEGF-C、SFRP1在宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎组织中的表达情况 Galectin-3、VEGF-C、SFRP1在宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎组织中的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)；宫颈鳞癌、CIN、宫颈炎组织中Galectin-3、VEGF-C阳性表达率依次降低(P<0.05)；宫颈鳞癌、CIN中SFRP1阳性表达率均低于宫颈炎组织(P<0.05)；宫颈鳞癌、CIN中Galectin-3、SFRP1阳性表达率差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 Galectin-3、VEGF-C、SFRP1蛋白在宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎组织中的表达情况[n(%)]

2.2Galectin-3、VEGF-C、SFRP1与宫颈鳞癌、CIN的临床病理特征的关系 Galectin-3阳性表达率随FIGO分级增加而上升(P<0.05)，低分化组织阳性表达率高于中分化及高分化组织(P<0.05)，且随CIN分期增加而上升(P<0.05)，但淋巴结转移的宫颈鳞癌组织与无淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中Galectin-3阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF-C阳性表达率随FIGO分期增加而上升(P<0.05)，且低分化组织阳性表达率高于中分化及高分化组织(P<0.05)，淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中VEGF-C阳性表达率高于无淋巴结转移的宫颈鳞癌组织(P<0.05)，虽然不同分级的CIN组织中VEGF-C阳性表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，但CINⅢ级阳性表达率明显高于Ⅰ级、Ⅱ级(P<0.05)；SFRP1在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率随FIGO分期增加而下降(P<0.05)，且低分化组织阳性表达率低于中分化及高分化组织(P<0.05)，有淋巴结转移组织低于无淋巴结转移组织(P<0.05)，CINⅢ级组织中SFRP1阳性表达率低于Ⅰ级、Ⅱ级(P<0.05)。见表2。

表2 Galectin-3、VEGF-C、SFRP1蛋白与宫颈鳞癌、CIN的临床病理特征的关系分析[n(%)]

续表2 Galectin-3、VEGF-C、SFRP1蛋白与宫颈鳞癌、CIN的临床病理特征的关系分析[n(%)]

3 讨 论

Galectin-3存在于胃黏膜、乳腺上皮、单核细胞等多种人体正常组织及胃癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中，可通过与细胞内糖蛋白、细胞表面分子、细胞外基质蛋白的作用参与至细胞的增殖、黏附、凋亡，并诱导血管新生、信使RNA前提剪接等，在肿瘤的发生、发生、浸润、转移中发挥重要作用[5]。本研究中，宫颈鳞癌组织中Galectin-3阳性表达率明显高于CIN、宫颈炎组织，且Galectin-3阳性表达率随FIGO分期的进展而上升，低分化宫颈鳞癌中Galectin-3阳性表达率也明显高于中分化、高分化宫颈鳞癌组织，且随CIN分级增加而上升(P<0.05)，但淋巴细胞转移的宫颈鳞癌组织中Galectin-3阳性表达率与无淋巴细胞转移组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。陈立江等[6]应用免疫组织化学法检测Galectin-3阳性表达后也指出，Galectin-3在宫颈癌组织中的阳性表达率明显高于CIN组织及正常宫颈组织，且其阳性表达率与病理分级呈正相关，但该研究中，有淋巴结转移组织中Galectin-3阳性表达率高于无淋巴结转移组织，这与本研究结果略有差异。DIETLMEIER等[7]发现，宫颈癌组织中Galectin-3阳性表达率亦高于正常宫颈组织，且在不同分级的CIN组织中表达无明显差异，Galectin-3阳性表达与FIGO分期、组织分级、淋巴结转移有密切关联，且无淋巴结转移宫颈鳞癌组织中Galectin-3阳性表达高于有淋巴结转移组织，分析不同研究结果的差异可能与标本取样差异有关，但由此可见，Galectin-3阳性表达与淋巴结转移的关系研究仍需进一步探讨。

本研究中，VEGF-C在宫颈鳞癌、CIN、宫颈炎组织中的阳性表达率逐渐增加，且VEGF-C阳性表达率随FIGO分期的增加而上升，低分化宫颈鳞癌组织中Galectin-3阳性表达率明显高于中分化及高分化组织，有淋巴结转移的宫颈鳞癌组织中Galectin-3阳性表达率高于无淋巴结转移宫颈鳞癌组织(P<0.05)。研究证明，VEGF-C在促进肿瘤血管形成中扮演着重要角色，并直接参与宫颈鳞癌血管的形成，VEGF-C的高阳性表达为肿瘤生长提供了有利条件[8]；而吉洁等[9]证实，宫颈癌组织中VEGF-C阳性表达率明显高于CIN组织，但VEGF-C在宫颈慢性炎症组织中未见阳性表达，且VEGF-C阳性表达率随宫颈癌临床分期、病理组织学分期的进展而升高，有淋巴结转移组织中VEGF-C阳性表达率高于无淋巴结转移组织，CINⅢ级组织中VEGF-C阳性表达率高于CINⅠ、Ⅱ级，这与本研究结果相符，均提示VEGF-C高表达与宫颈鳞癌组织学分化程度、淋巴结转移情况等密切相关，分析VEGF-C可通过对宫颈鳞癌组织周围及内部淋巴管的生成促进肿瘤细胞淋巴结转移，受人乳头瘤病毒持续感染的宫颈上皮高表达VEGF-C，最终诱导淋巴管新生，与其他致癌危险因素共同加速CIN进展至宫颈癌，并发生转移[10-12]。

有研究表明，Wnt信号通道参与宫颈癌的发生、发展，而SFRP1属于分泌型糖蛋白家族，与卷曲蛋白(FZ)具有较高的同源性，可直接作用于Wnt信号通道并组织Wnt与FZ结合，抑制Wnt信号通道激活，通过对SFRP1启动子的甲基化后可抑制SFRP1的表达，从而导致肿瘤的发生，故认为SFRP1在肿瘤的发生中发挥一定的调节作用[13-15]。而本研究中，宫颈鳞癌及CIN组织中SFRP1阳性表达率明显低于宫颈炎组织，但SFRP1阳性表达率在宫颈鳞癌及CIN组织中差异无统计学意义(P>0.05)。YANG等[16]针对肺腺癌患者的研究也指出，SFRP1在肺腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织，其与肺腺癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移密切相关，且组织分化程度越低，SFRP1表达率越低，有淋巴结转移组织SFRP1阳性表达率明显低于无淋巴结转移组织，这与本研究结果一致。有研究结果表明，胃癌组织中SFRP1阳性表达率较低，且临床分期越高，分化程度越低，SFRP1阳性表达率越低，这与本研究结果一致，但该研究指出，有淋巴结转移的胃癌组织中SFRP1蛋白阳性表达率低于无淋巴结转移组织，这与本研究结果有差异[17]。另有研究发现，外泌体miR-196a-1高表达水平与胃癌低生存率明显相关。高侵袭性胃癌细胞分泌含有miR-196a-1的外泌体，异位表达的miR-196a-1通过靶向SFRP1促进低侵袭性胃癌细胞的侵袭[18-20]。

Galectin-3、VEGF-C、SFRP1或与宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎等宫颈病变的发生、发展有密切关联，但至今尚未完全明了，仍有极大深入探究的空间，需大量科学、严谨的临床试验予以进一步补充、论证及完善，为宫颈鳞癌、CIN的诊断、评估及治疗提供新思路。

综上所述，Galectin-3、VEGF-C、SFRP1在宫颈病变的发生、发展中发挥重要作用，Galectin-3、VEGF-C、SFRP1与宫颈鳞癌、CIN及宫颈炎等宫颈病变的关系仍需更严谨、更大样本量的研究予以深入探究。