气相色谱－质谱法测定灵芝9种农药残留含量

文 冯凯 段苏然 商春锋 济宁市食品药品检验检测中心

灵芝是多孔菌科真菌赤芝（Leyss.ex Fr.）Karst.或紫芝Zhao，Xu et Zhang 的干燥子实体。灵芝具有多种药理作用，使用广泛，可以抑制肿瘤生长，改善机体代谢。目前，农药滥用情况严重，造成农药高残留现象突出，已影响到食品安全。灵芝对人体健康有益，农药残留成为安全食用的隐患，对灵芝中农药残留的情况进行监测是有必要的。

现在，农药残留的检测方法主要有离子色谱法（IC）、气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱法（GCMS）、高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）及气相色谱-三重四极杆质谱法（GC-MS/MS）等。气相色谱-质谱法对特征离子进行定性、定量分析，准确性高，基质效应影响小，灵敏度和选择性较高。本研究采用气相色谱-质谱法对灵芝中的农药残留进行含量测定，为真菌类食品中农药残留分析提供参考。

1. 实验内容

1.1 仪器设备

8890B-7000D型气相色谱/串联四级杆质谱联用仪（安捷伦科技有限公司）；HP-5MS UI色谱柱（30m×0.250mm，0.25μm，Agilent Technologies, Inc.）；MS7-H550-pro型数控旋转混匀仪（大龙兴创实验仪器（北京）股份公司）；XSE104型电子分析天平（梅特勒-托利多国际贸易（中国）有限公司）；SB-1500DT超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；TGL-16M高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。

1.2 标准品、试剂与材料

敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯溶液标准样品（农业部环境保护科研监测所）；乙腈、正己烷（色谱纯，fisher chemical）；萃取盐包（WondaPak QuEChERS）；固相萃取柱（SinCHERS）；微孔滤膜（0.22μm，天津市津腾实验设备有限公司）。

1.3 样品

市售灵芝。

1.4 实验方法

1.4.1 标准溶液的制备

精密量取敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯标准溶液适量，用正己烷制成含有敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯浓度为0.005、0.01、0.05、0.1、0.5μg/mL的不同浓度水平的混合标准溶液。

1.4.2 样品的制备

取样品适量，粉碎，精密称定1g，置50mL离心管内，加20mL乙腈，混匀，旋转混匀3分钟，加入盐包，旋转混匀5分钟，超声提取20分钟，4200r/min离心10分钟，插入固相萃取柱，按压净化，精密量取3mL，氮吹吹干，用1.5mL正己烷稀释，经0.22μm滤膜过滤，用于测定。

1.4.3 仪器条件

色谱条件：柱温：40℃保持1分钟，再以40℃/min升温至120℃，再以5℃/min升温至240℃，再以12℃/min升温至300℃，保持6分钟；载气：氦气（纯度≥99.999%），流速1mL/min；进样口温度：280℃；进样量：1μL；进样方式：不分流进样。

质谱条件：电子轰击源70eV；离子源温度：280℃；传输线温度：280℃；溶剂延迟：3分钟；多反应监测模式：选择定量离子和定性离子。

1.4.4 样品的测定

操作仪器前，通过调谐，使仪器的指标达到测定要求。精密量取1μL标准溶液及样品溶液，注入气相色谱-质谱联用仪，根据标准曲线得到样品溶液中敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯的质量浓度。

2. 结果

2.1 精密度实验

精密量取浓度为0.1μg/mL的混合标准溶液1μL，注入气相色谱/串联四级杆质谱联用仪，连续进样6次，测定峰面积。结果显示，敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯的RSD均小于5%，表明仪器精密度良好。

2.2 回收率实验

在样品11中加入高、中、低3种浓度水平标准溶液，每种浓度制备3份样品溶液测定，敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯回收率范围分别为96.1%-103.3%、97.6%-101.3%、94.0%-100.9%、96.2%-103.9%、94.5%-101.3%、97.4%-103.3%、95.0%-101.3%、96.3%-100.0%、95.9%-100.9%，可以满足实验条件。

2.3 重复性实验

精密称取6份样品11，按1.4.2样品的制备项下方法处理样品，精密量取1μL注入气相色谱/串联四级杆质谱联用仪，测定峰面积，得到敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯的RSD均不大于5%，说明重复性良好。

2.4 线性和范围

精密量取1μL混合标准溶液注入气相色谱/串联四级杆质谱联用仪，测定待测成分的信号响应值，以待测成分的浓度为横坐标，待测成分的响应信号值为纵坐标，绘制标准曲线。从结果可以看出，敌敌畏、乐果、马拉硫磷、毒死蜱、对硫磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、高效氯氟氰菊酯、氯氰菊酯在0.005-0.5μg/mL的范围内，相关系数不低于0.997，具有良好的线性关系。

2.5 检出限和定量限实验

方法检出限（MDL）和定量限（MQL）分别以3倍和10倍的信噪比计算出结果，敌敌畏的检出限为：0.0319mg/kg，定量限为：0.106mg/kg；乐果的检出限为：0.265mg/kg，定量限为：0.0882mg/kg；马拉硫磷的检出限为：0.0178mg/kg，定量限为：0.164mg/kg；毒死蜱的检出限为：0.110mg/kg，定量限为：0.298mg/kg；对硫磷的检出限为：0.0130mg/kg，定量限为：0.114mg/kg；水胺硫磷的检出限为：0.107mg/kg，定量限为：0.357mg/kg；甲基异柳磷的检出限为：0.00298mg/kg，定量限为：0.0158mg/kg；高效氯氟氰菊酯的检出限为：0.0269mg/kg，定量限为：0.0898mg/kg；氯氰菊酯的检出限为：0.229mg/kg，定量限为：0.763mg/kg。方法的检出限和定量限较低，可以达到分析条件，表明检测灵敏度较高。

2.6 样品分析结果

将2份试样溶液分别注入电感耦合等离子体质谱仪中，测定待测元素的信号响应值，根据标准曲线得到消解液中待测元素的浓度，计算出含量。结果见表1。

表1 灵芝中9种农药残留的结果

结论

GB 2763-2019《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》规定，真菌类食品中不得使用。根据测定结果，敌敌畏、乐果、毒死蜱、水胺硫磷、高效氯氟氰菊酯有检出，其他未检出。因此，需加强监管灵芝中的农药残留。

运用气相色谱质谱法测定灵芝中的农药残留，前处理简单，准确度高，可采用外标法定量，所需样品、试剂较少。通过对精密度实验、回收率实验、重复性实验、线性、方法检出限和定量限的测定。结果表明，气相色谱质谱法测定灵芝中的农药残留是一种较为有效的方法，为真菌类食品中农药残留的测定提供技术支持。