复方苦参注射液配伍稳定性研究

段秀梅，王鹏飞，张亚锰，毕小凤，秦文杰，海丽娜

(北京振东光明药物研究院，北京100085)

复方苦参注射液是由苦参、白土苓经过提取精制而成的中药注射液，具有清热利湿、凉血解毒、散结止痛的功效，用于癌肿疼痛、出血，是山西振东制药股份有限公司的独家产品。现代药理学研究表明，其具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、提高机体免疫力等多种药理作用[1-2]，临床应用广泛，包括非小细胞肺癌[3]、原发性肝癌[4]、胃癌[5]、结直肠癌[6]等重症疾病的辅助治疗。

研究表明，复方苦参注射液与参麦注射液配伍后治疗晚期恶性肿瘤疗效显著，可有效改善患者免疫功能，值得临床推广应用[7]，与肿瘤科常用药物配伍后，稳定性较好[8]。随着复方苦参注射液在临床上的广泛应用，其配伍也逐渐引起了人们的重视。目前复方苦参注射液配伍研究中稀释剂的选择，除了说明书中已经明确的0.9%氯化钠注射液外，文献报道的还有复方苦参注射液与氯化钠及葡萄糖注射液的配伍稳定性研究[9-12]，其配伍稳定性监测项目主要有外观性状、pH值、不溶性微粒数量，有效成分含量测定较少。本研究在室温条件下，除配伍液外观、pH值、不溶性微粒数外，还增加了渗透压、生物碱、黄酮、番石榴酸的含量变化、指纹图谱等指标，分别考察了复方苦参注射液与0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液和10%葡萄糖注射液配伍后的稳定性，确定临床配伍后使用时是否存在理化方面的变化，以期为临床合理用药提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

Waterse2695型高效液相色谱仪-紫外检测器；电子天平(梅特勒-托利多上海科技有限公司)；pH计(梅特勒-托利多上海科技有限公司)；微粒检测仪(GWJ-16，天大天发科技有限公司)；澄明度检测仪(YB-2，天大天发科技有限公司)；全自动冰点渗透压计(FM-8P，上海医大仪器有限公司)。甲醇(FEPRUE)，色谱级；磷酸(北京化工厂)，优级纯；磷酸二氢钾(北京迈瑞达科技有限公司)，分析纯。

1.2 对照品及样品

苦参碱(批号：10805-201709，纯度98.7%)，氧化槐果碱(批号：111651-200301，纯度100%)，槐定碱(批号：110784-201706，纯度98.8%)，均购自中国食品药品检定研究院；氧化苦参碱(批号：Y-013-171216，纯度99.24%)，槐果碱(批号：H-031-171226，纯度96.95%)，均购自成都瑞芬斯生物科技有限公司；甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、番石榴酸、三叶豆紫檀苷(自制，经面积归一化法，纯度>99%)。样品信息见表1。

2 方法与结果

2.1 配伍方法

复方苦参注射液标准中的[用法与用量]为静脉滴注，一次20 mL，用氯化钠注射液200 mL稀释后应用，一日1次。但通常临床使用时，常用氯化钠注射液250 mL进行稀释。临床输液一般滴速控制在40～60滴/min。结合滴速，可计算出最长滴注时间为2.25 h，最短滴注时间为1.5 h。综上，本研究分别取20 mL复方苦参注射液与250 mL稀释液(0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液)配伍，配伍后在室温下静置8 h，分别在0、1、2、4、8 h观察配伍液的性状，测定配伍液的pH值、不溶性微粒、含量及指纹图谱等。

表1 样品信息

2.2 溶液配制

取复方苦参注射液4 支(5 mL/支)，分别加入0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液中，混匀，常温放置，备用。

2.3 性状、溶液颜色、可见异物、澄清度考察

分别于配制后0、1、2、4、8 h考察配伍液的性状、溶液颜色、可见异物、澄清度，结果显示，复方苦参注射液与各稀释液配伍后8 h内性状、颜色无明显变化，始终保持澄清透明，且无可见异物产生。(参照2020年版《中华人民共和国药典》(四部)的“溶液颜色检查法”“澄清度检查法”“可见异物检查法”)

2.4 pH值

分别于配制后0、1、2、4、8 h考察配伍液的pH值；复方苦参注射液与各稀释液配伍后，8 h内pH值均无显著变化(RSD<2.00%)，详见表2。(参照2020年版《中华人民共和国药典》(四部)的“pH值测定法”)

2.5 不溶性微粒测定

参照2020版《中华人民共和国药典》(四部)通则中“不溶性微粒检测法(光阻法)”，分别于配制0、1、2、4、8 h后取样检查，结果见表3。结果显示，复方苦参注射液与各稀释液配伍8 h内，不溶性微粒数量略有波动，但均符合2020版《中华人民共和国药典》(四部)对于注射液的相关规定(标示装量为100 mL或100 mL以上的静脉用注射液，除另有规定外，每1 mL中含10 μm及10 μm以上的微粒数不得过25粒，含25 μm及25 μm以上的微粒数不得过3粒)，推测可能配制过程中注射液与稀释液混匀产生的微小气泡“假粒”的干扰，导致不溶性微粒数据不稳定。

2.6 含量测定

2.6.1 色谱条件 采用Waters XSelect CSHTMC18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；流动相甲醇(A)-0.2%磷酸二氢钾(磷酸调pH=3.0)(B)，梯度洗脱(0～10 min，3%甲醇；10～15 min，3%→5%甲醇；15～24 min，5%→15%甲醇；24～30 min，15%甲醇；30～55 min，15%→85%甲醇；55～60 min，85%甲醇)。检测波长211 nm，柱温30 ℃，流速0.6 min/mL，进样量10 μL。

2.6.2 空白溶液制备 0.2%磷酸二氢钾溶液-甲醇=85∶15混合溶液，过滤即得。

2.6.3 对照品溶液制备 精密称取苦参碱对照品，氧化苦参碱对照品，氧化槐果碱对照品适量，加空白溶液制成每1 mL含苦参碱0.3 mg，氧化苦参碱0.9 mg，氧化槐果碱0.3 mg的混合对照品溶液Ⅰ，摇匀，即得；精密称取槐果碱对照品，槐定碱对照品，甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷对照品适量，加空白溶液制成每1 mL含槐果碱0.1 mg，槐定碱0.1 mg，甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷0.1 mg的混合对照品溶液Ⅱ，摇匀，即得。分别精密量取混合对照品溶液Ⅰ、Ⅱ 2 mL，置10 mL量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液1。精密称取番石榴酸及三叶豆紫檀苷对照品适量，加空白溶液制成每1 mL含番石榴酸0.05 mg、三叶豆紫檀苷0.03 mg的混合对照品溶液2。

表3 8 h内各配伍液不溶性微粒数量测定结果

2.6.4 供试品溶液 分别精密量取“2.1”项下配制0、1、2、4、8 h后的溶液各2 mL，置10 mL量瓶中，加空白溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。色谱见图1。

注：a.空白溶液；b.对照品1；c.对照品2；d.复方苦参注射液样品。峰1：甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷；峰2：苦参碱；峰3：槐果碱；峰4：槐定碱；峰5：氧化槐果碱；峰6：氧化苦参碱；峰7：番石榴酸；峰8：三叶豆紫檀苷。

2.6.5 含量测定 精密量取“2.6.3”项下制备的对照品溶液和“2.6.4”项下制备的供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标法计算甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱、番石榴酸、三叶豆紫檀苷的含量，以0 h的含量为100%，计算各时间点的相对百分含量。结果见表4、表5、表6，8 h内各配伍液中检测组分含量百分比无显著变化。

表4 8 h内各配伍液含量测定结果(一)(以0 h含量为100计)

表5 8 h内各配伍液含量测定结果(二)(以0 h含量为100计)

表6 8 h内各配伍液含量测定结果(三)(以0 h含量为100计)

2.6.6 指纹图谱相似度分析 参照“2.1”项下色谱条件，按“2.6.4”项下方法制备供试品溶液，记录色谱图。使用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723版)”进行数据处理，通过与对照指纹图谱比对，计算相似度，结果见表7。各配伍液的相似度均在0.98以上，说明各样品在0～8 h内比较稳定。

表7 8 h内各配伍液相似度结果

3 讨论

关于复方苦参注射液的配伍稳定性，相关文献中也有报道。温虹[13]发现复方苦参注射液与5%葡萄糖注射液配伍30 min时开始出现颗粒状乳黄色沉淀，4 h时颗粒状乳黄色沉淀更多，但是另几篇报道中未出现该情况，此次实验也未出现此情况。

虽然实验结果显示复方苦参注射液与0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液配伍均无明显变化，但是本实验中检测3批5%葡萄糖注射液的pH 值为4.31～4.84，3批10%葡萄糖注射液的pH值为3.95～4.17，而复方苦参注射液中含大量生物碱类成分，因此建议临床最好选择0.9%氯化钠注射液配伍使用。