气相色谱法测定胃痛片中4种化学成分含量*

古炳明，邬伟魁，刘佳

（广东省梅州市食品药品监督检验所，广东 梅州 514011）

胃痛片是由苍术、厚朴、香附、高良姜、陈皮、碳酸氢钠等制成的中西药复方制剂，具有芳香行气、和中止痛功效，用于胃酸过多、胃痛及脘闷、呕吐等属气滞证的治疗［1］。现行质量标准《国家食品药品监督管理总局国家药品标准胃痛片质量标准》WS-11084（ZD-1084）-2002-2012Z［2］仅对方中厚朴、碳酸氢钠的含量进行测定，含量控制标准单一且未对方中君药苍术进行定量分析，不符合多组分、多靶点的现代中药质量控制要求。苍术为君药，具有燥湿健脾、祛风散寒功效，主要活性成分苍术素含量高低常用作评价苍术的质量［3-4］。香附为臣药，有调经止痛、理气解郁功效，主要活性成分为α-香附酮［5］。本研究中建立了测定胃痛片中苍术素、厚朴酚、厚朴酚和α-香附酮含量的气相色谱法，可为其质量标准提升提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AB204-N型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度为万分之一）；BP 211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司，精度为十万分之一）；8890型气相色谱仪（安捷伦公司）；KQ-250DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率为300 W，频率为50 kHz）。

1.2 试药

苍术素对照品（批号为111924-201806，含量以99.5%计），α-香附酮对照品（批号为110748-202016，含量以99.4%计），厚朴酚对照品（批号为110729-202015，含量以99.0%计），和厚朴酚对照品（批号为110730-201915，含量以99.8%计），均购于中国食品药品检定研究院；胃痛片（广东嘉应制药股份有限公司，批号分别为20180202，20190501，20200302）；乙酸乙酯（广州市番禺力强化工厂，批号为633379-05653）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HP-5毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25µm），（5%）-二苯基（95%）-二甲基聚硅氧烷为固定相；程序升温：初始温度为50℃、保持4 min，以10℃/min的速率升至120℃、保持10 min，以10℃/min的速率升至220℃、保持10 min，以10℃的速率升至250℃、保持4 min；进样口温度：280℃；火焰离子化检测器（FID）温度：300℃；载气：氮气；流速：2.0 mL/min；进样量：1 µL；分流比：1∶1。

2.2 溶液制备

取苍术素对照品5.18 mg，α-香附酮对照品7.54 mg，分别置20 mL棕色容量瓶中，以乙酸乙酯溶解并定容；取厚朴酚对照品26.33 mg、和厚朴酚对照品25.81 mg，分别置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，制成各对照品贮备液。分别取各对照品贮备液1 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀释并定容，即得混合对照品溶液。取样品，避光条件下操作，研细，取细粉2.0 g，精密称定，置棕色容量瓶中，精密加入乙酸乙酯15 mL，称定质量，超声处理1 h，放冷后再次称定质量，以乙酸乙酯补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。根据处方工艺分别制备缺苍术、香附、厚朴的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下供试品溶液、混合对照品溶液及阴性对照品溶液各适量，按2.1项下色谱条件分别进样测定，记录色谱图。供试品溶液中苍术素、α-香附酮、厚朴酚、和厚朴酚色谱与混合对照品溶液色谱保留时间一致，各色谱峰分离良好，且阴性对照无干扰。色谱图见图1。

线性关系考察：分别精密吸取2.2项下各对照品贮备液0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀释并定容，按2.1项下色谱条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标、各成分的质量浓度（X，µg/mL）为横坐标进行线性回归。结果见表1。

表1 线性关系考察结果（n=6）Tab.1 Results of the linear relation test（n=6）

精密度试验：取2.2项下混合对照品溶液适量，按2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录色谱图。结果苍术素、α-香附酮、厚朴酚、和厚朴酚峰面积的RSD分别为0.32%，0.35%，0.52%，0.65%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取样品（批号为20180202）适量，共6份，依法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样测定，记录色谱图。根据回归方程计算得苍术素、α-香附酮、厚朴酚、和厚朴酚的质量分数的RSD分别为1.08%，0.75%，0.81%，0.96%（n=6），表明方法重复性良好。

1.苍术素2.α-香附酮3.厚朴酚4.和厚朴酚A.供试品溶液B.混合对照品溶液C-E.阴性对照品溶液（分别缺苍术、香附、厚朴）图1气相色谱图1.Atractylodin 2.α-Cyperone 3.Magnolol 4.HonokiolA.Test solution B.Mixed reference solution C-E.Negative reference solution（lacking Atractylodis Rhizoma，Cyperi Rhizoma and Magnoliae Officinalis Cortex，respectively）Fig.1 GC chromatograms

稳定性试验：取样品（批号为20180202）适量，按2.2项下方法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，24 h时按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果苍术素、α-香附酮、厚朴酚、和厚朴酚峰面积的RSD分别为1.25%，1.09%，1.13%，1.06%（n=5），表明供试品溶液24 h内稳定性良好。

加样回收试验：取样品（批号为20180202）1.0 g，共6份，精密称定，分别精密加入2.2项下混合对照品溶液5.0 mL，制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.4 样品含量测定

取样品（批号分别为20180202，20190501，20200302）适量，依法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，根据回归方程计算苍术素、α-香附酮、厚朴酚、和厚朴酚的含量，结果见表3。可见，各批样品中成分含量存在差异，特别是未作规定的苍术素和α-香附酮差异较大。

表3 胃痛片中4种成分含量测定结果（mg/g，n=6）Tab.3 Results of content determination of four constituents in Weitong Tablets（mg/g，n=6）

3 讨论

3.1 色谱条件选择

本研究中考察多种程序升温的气相色谱分离条件［6-8］，预试验中，最初程序升温条件均设置进样口温度和检测器温度为300℃；程序升温，以100℃保持7 min，再以20℃/min的速率升至250℃，保持10 min，分流比为20∶1。但在该条件下部分化学成分未能出峰，同时升温速率过快导致主成分色谱峰过于集中，分离度差。更改条件后，进样口温度为280℃；检测器温度为300℃；程序升温，初始温度为50℃，保持4 min；以10℃/min的速率升至120℃，保持10 min；再以1.0℃/min的速率升至250℃，保持4 min；分流比为20∶1。但发现在该条件下色谱峰的响应值较低，调整分流比，1∶1时响应值在合理范围内且各色谱峰峰形对称，分离度符合要求，结果稳定，故选择分流比为1∶1。

3.2 溶液制备操作

试验初期，混合对照品溶液的部分色谱峰出峰时间和峰面积都不太稳定，特别是稳定性试验中，放置时间越长，苍术素和α-香附酮的色谱峰面积越小。查阅文献［9-11］，发现α-香附酮、苍术素均为热不稳定物质，且对光敏感、易氧化，故在对照品配置及供试品提取过程中，α-香附酮、苍术素对照品及样品均需避光保存。本研究中，供试品提取时间较长，为避免有效成分的分解失效导致检测数据的不准确，超声处理过程保持室温，也可用冰袋控制温度。

3.3 提取条件选择

在制备供试品溶液和混合对照品溶液时，曾考察提取方法（超声提取、超声后离心提取）、提取溶剂种类（甲醇、乙醇、乙酸乙酯）、料液比及提取时间，发现以甲醇、乙醇作提取溶剂时，苍术素和α-香附酮的色谱峰分离度很小，且受进样时间长的影响，其他色谱峰不稳定，推测甲醇、乙醇的挥发性较大，导致目标成分浓度出现波动，采用乙酸乙酯为溶剂后解决了上述问题［12-14］。曾选择α-蒎烯作为高良姜的定量指标，但后续研究发现无高良姜的阴性对照品中出现了α-蒎烯的干扰峰，查证文献后得知香附挥发油中提取分离的单萜化合物有α-蒎烯、β-蒎烯、桉叶素、柠檬烯、γ-聚散花素和α-紫罗兰酮等［15］。

3.4 方法评价

本研究中建立的方法操作简便易行，精密度、重复性和准确度均良好，可为胃痛片的多成分含量测定和质量控制提供参考。