液氮冷冻疗法在老龄犬体表增生的临床应用

李岳奇，张 毅，赵国春，费思菡，王菊梅

（新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052）

犬肿瘤类疾病是临床上宠物高发的一类疾病，引起犬肿瘤的病因与犬品种、性别、年龄、机体免疫力以及遗传等因素有关，老龄犬肿瘤发病率是幼龄和成年的3 倍［1］。动物临床上主要通过病理组织学方法进行诊断，治疗方面根据肿瘤性质及生长部位多采用外科手术切除、放疗、化疗等方法。液氮冷冻法是指通过-196 ℃的液氮对患病的组织进行反复冷冻，促使冷冻部位的皮肤或组织长期处于冰晶状态，导致组织内细胞蛋白质变性，组织结构破坏，诱发组织细胞逐渐死亡后萎缩或坏死而被机体清除。液氮冷冻治疗有疗效良好、不良反应轻微、易于操作和价格低廉等优势，有广泛的临床应用报道。液氮冷冻疗法也广泛应用于临床治疗人类各类疾病，如面部广泛性扁平疣、传染性软疣、跖疣、斑秃、雀斑、外耳道乳头状瘤、婴儿皮肤草莓状血管瘤以及牙髓炎等疾病均有相关报道［2-9］。因液氮具有一定的挥发性，且需要在专门的容器中保存，需要相应的液氮冷冻仪器治疗，在宠物临床上应用较少。2022 年7月，新疆农业大学动物中心医院接诊1 例13 岁老龄犬，该犬体表有多处大小不一的增生物，肩胛处增生物发生溃烂，破溃处流出新鲜血液，该犬有心脏疾病，全身麻醉风险较大，为解决体表增生物问题，综合评估，选择了液氮冷冻方法进行治疗，取得了较好的临床效果。

1 基本信息及病史

13 岁土种犬，已绝育，10.6 kg，定期免疫及驱虫，中等强度运动后有张嘴喘气现象。2021 年7 月，该犬肩胛部发现黄豆样大增生物，未到医院治疗。2022 年5 月发现增生物在不断变大，且在腰部皮肤发现3 处黄豆样大小增生物，到医院进行治疗。经医院初步诊断为肿瘤，但考虑到该犬年龄大，听诊心音异常，增生物生长较为缓慢，且不影响正常吃喝，建议宠物主人继续观察，未进行任何治疗。2022 年7 月12 日，该犬肩胛部位肿块及皮肤部近期增生物均生长较快，且肩胛部肿块发生了破溃，流鲜红血液，遂来医院就诊。

2 临床检查

2.1 体格检查

患犬体温38.3 ℃，呼吸32 次/min，心跳120 次/min。精神状态良好，无脱水，肩胛周围有鲜红色血液污染，肩胛处可见突出于体表4 cm×3 cm×3 cm 肿块，边缘有破溃。背部有3 处2 cm×2 cm×1 cm 肿块，触诊所有肿块均在皮肤及皮下，未见深部生长迹象。听诊心音有杂音，可视黏膜淡粉色，其余未见明显异常。

2.2 实验室检查

2.2.1 血常规及C-反应蛋白检查 结果显示血常规结果在正常范围内（表1）。C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）检测结果为154.9 mg/L（参考值0～10 mg/L，＜10 mg/L 为正常，10～35 mg/L 为偏高或轻度炎症，＞35 mg/L 明显炎症）。

表1 血液常规检查结果

2.2.2 血生化检查 血液生化检查结果未见明显异常（表2）。

表2 血液生化检查结果

2.2.3 X 光检查 X 光检查显示椎膈区肺纹理增粗，心脏影像增大，胸腔、腹腔未见明显类似肿瘤类影像，其余未见明显异常。

3 诊断

根据体表多处增生，判断为犬体表增生物引起，因宠物主人不同意进行病理切片检查及犬身体等原因，无法进一步诊断。

4 治疗

按宠物主人意愿，不进行全身麻醉，以止血、控制肿块为根本原则进行治疗。

在宠物主人安抚情况下对肩胛部及背部剃毛，在所有肿块周围用盐酸利多卡因局部封闭，动物趴卧于手术台上，肿块周围由外向内碘伏消毒3 次，后用75%乙醇脱碘。增生物周围皮肤用脱脂棉和灭菌纱布隔离，露出增生物，术者带上棉手套，将液氮冷冻治疗仪中注满液氮，将液氮喷出口对准增生物正中心，可见增生处变白，结冰，待冷冻处周围1 mm结冰变白时，暂停冷冻，有解冻迹象时再次冷冻，持续时间2 min 左右。等完全解冻5 min 后再次按照上述程序进行冷冻，共进行3 次冷冻后结束治疗。

术后2 d 冷冻组织周围用1.0 g 头孢曲松钠、5 mg 地塞米松磷酸钠注射液、4 mL 盐酸普鲁卡因及灭菌用水封闭治疗，2 mL 酚磺乙胺注射液颈部皮下注射，45 mg 卡洛夫注射液皮下注射。1 次/d，连续3 d。匹莫苯丹5 mg 口服，2 次/d。佩戴伊莉莎脖圈，用碘伏消毒冷冻处，2 次/d。

5 转归及预后

治疗第二天，患犬冷冻组织周围出现水泡，碘伏消毒后干燥，大小未见明显变化，冷冻增生物表面发黑，较大冷冻肿块周围有少量粉红色渗出液。第三天冷冻组织周围缩小约1/3，表面干燥，发黑。第七天，小的冷冻组织周围痂皮脱落。第九天，较大冷冻组织脱落萎缩，形成新的瘢痕，逐渐愈合。15 d 后回访，冷冻部位皮肤恢复正常，原肿块周围有类似瘢痕组织样凸起。5 个月后回访，该犬原冷冻部位恢复良好，冷冻组织周围及全身皮肤无新发的增生物，冷冻治疗效果良好。

6 讨论

肿瘤类疾病已经成为世界各地引发犬死亡的重要原因，其中位于皮肤的肿瘤发生率达40%～50%，乳腺类肿瘤、血管瘤、骨瘤等肿瘤也可在软组织、造血组织、淋巴组织、消化器官、骨骼等［10］处发生。该病例从最初肩胛部发现小增生物到腰荐部逐渐出现多个增生物，且存在逐渐变大的现象，虽没有进行病理学检查，无法确诊，但由于一处增生物增大发生破溃出血后不得不进行治疗，该犬心脏功能不好，宠物主人不同意进行麻醉手术切除，选择液氮冷冻方法进行治疗具有现实意义，能为类似病例的治疗提供一种新的治疗思路。

液氮冷冻疗法在人类医学上应用较为广泛。自19 世纪以来，低温冷冻技术就开始应用于如肺癌、肝癌等各类良性和恶性肿瘤的治疗［11］。王莉娜［12］报道超低温冷冻对低位直肠癌安全有效，尤其是对中晚期患者，不愿接受传统手术和不耐受手术的患者，能很好地减轻患者痛苦，提高患者生命质量。超低温冷冻消融技术可作为肉瘤患者无法再次手术的有效治疗手段。姜淑敏等［13］报道采用液氮冷冻术治疗眼部肿瘤良性31 例（32 只眼），恶性3 例（3 只眼）。患者伤口愈合好，观察6～12 个月恶性肿瘤均无复发及转移，总有效率为100%。采用液氮治疗时，因液氮温度低至-196 ℃，且在一般情况下很容易挥发，需要进行多次操作，持续时间较长。本次治疗使用的是人用500 mL 液氮冷冻治疗仪，根据冷冻直径可选择1.0、1.8、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mm 的冷冻枪头，能保证最佳冷冻范围。

冷冻消融技术不仅可以对肿瘤组织进行反复冻融循环造成局部损伤，而且可引起机体的抗肿瘤免疫反应，在治疗中发挥着越来越重要的作用［14］。对肿瘤组织进行低温冷冻，可以促进肿瘤释放大量抗原，有效激活T 细胞对肿瘤的识别；利用冷冻消融除了可以控制原发肿瘤，还可增强全身抗肿瘤免疫反应，在机体内产生原位肿瘤疫苗，进而抑制残留肿瘤的转移和复发［15］。该病例虽然未能确定是否与皮肤类肿瘤发病相关，但采用液氮冷冻治疗，增生物脱落，6 个月后回访未出扩散，恢复良好，为宠物临床上部分恶行肿瘤提供一个辅助治疗的思路，对肿瘤进行冷冻或对切除肿瘤部位进行浅冷冻，有效激活T 细胞，增强全身抗肿瘤免疫反应。

翟翊然等［16］报道用液氮冷冻辅助治疗皮肤鳞状细胞癌时，会出现水肿、疼痛、局部溃疡等不良反应。超低温冷冻治疗后可能出现的并发症有冷休克、出血、多器官衰竭及冷冻临近器官组织损伤等［17］。本次治疗过程中，无论从冷冻时间和冷冻次数来看都相对较长、较多，但该病例第2 天冷冻部位均较为干燥，且随着时间推移，冷冻组织逐渐萎缩变小，可能因为术后连续3 d 在冷冻组织周围用头孢曲松钠、地塞米松、盐酸普鲁卡因进行封闭治疗，并用碘伏消毒，2 次/d，局部封闭消炎后，控制冷冻组织周围的炎症，防止冷冻部位出现水泡。