miR-153-3p靶向KLF7基因调控IL-6/STAT3通路抑制食管癌细胞的增殖和转移的机制研究

赵亚培 张向苗 王秋冬

食管癌是消化道常见恶性肿瘤,手术、放射治疗和化疗是目前主要治疗手段,然而其临床疗效均不甚理想[1]。有研究报道miR-153可显著促进食管癌KYSE450细胞和乳腺癌MCF-7细胞自噬[2]。KLF7在人口腔鳞状细胞癌中的过度表达促进细胞迁移和上皮-间质转化[3];KLF7高表达与胃癌预后不良相关,敲低KLF7抑制胃癌细胞迁移[4]。肠道富集的Kruppel样因子在食管鳞状细胞癌中下调表达,与其进展和转移相关[5]。然而miR-153-3p与KLF7调控对食管癌细胞研究机制不清楚,本实验通过miR-153-3p和KLF7的相关表达载体研究其对食管癌细胞的增殖和转移的影响、其靶向调控关系以及可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人正常食管上皮细胞株HEEC和人食管癌细胞EC9706、Eca-109、EC-1、TE-1购自上海弘顺生物科技有限公司。胎牛血清(FBS)、RPMI-1640培养基购自赛默飞世尔科技中国有限公司;LipofectamineTM2000转染试剂、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)试剂盒购自美国Invitrogen公司;凋亡试剂盒购自碧云天生物;兔抗人KLF7多克隆抗体、兔抗人p-STAT3多克隆抗体、兔抗人STAT3多克隆抗体、兔抗人β-actin多克隆抗体和山羊抗兔IgG购自上海煊翎生物;白细胞介素IL-6试剂盒购自上海联科生物;载体质粒购自北京普瑞金科技有限公司;双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自艾博抗(上海)贸易有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞活化 食管癌细胞(EC9706、Eca-109、EC-1、TE-1)、正常食管上皮细胞株HEEC培养于RPMI-1640培养基(含10%FBS)置于细胞培养箱中。

1.2.2 细胞转染、分组 取对数生长期细胞EC9706,用anti-miR-con、anti-miR-153-3p、miR-con、miR-153-3p、si-con、si-KLF7转染细胞,分别为anti-miR-con组、anti-miR-153-3p组、miR-con组、miR-153-3p组、si-con组、si-KLF7组;将miR-153-3p与pcDNA、miR-153-3p与pcDNA-KLF7共转染细胞,记为miR-153-3p+pcDNA组、miR-153-3p+pcDNA-KLF7组。

1.2.3 RT-qPCR检测KLF7 mRNA和 miR-153-3p水平 总RNA提取提取后,反转录cDNA,根据试剂盒说明书进行PCR。……