银黄二陈合剂黄芩苷提取转移率工艺研究

张传津　牛华星　张志民　魏茂莲　宫玲玲　王尚明

摘要 通过考察黄芩苷转移率，改进和完善银黄二陈合剂提取工艺，进一步提高银黄二陈合剂中黄芩苷的含量。结果显示，在提取溶媒中加入不同量的pH调节剂枸椽酸钠，可以有效增加黄芩苷在水中的溶解度，其中添加0.20%枸椽酸钠效果较好，可以提高黄芩苷的转移率10%以上，为含黄芩制剂产品的质量控制提供了可靠的研究基础。

关键词 银黄二陈合剂；黄芩苷；转移率；提取工艺

中圖分类号 R284.2 文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2023）06-0170-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.06.041

Study on the Extraction and Transfer Rate of Baicalin from Yinhuang Erchen Compound

ZHANG Chuan－jin，NIU Hua－xing，ZHANG Zhi－min et al

（Institute of Feed Veterinary Drug Control of Shandong Province，Jinan，Shandong 250010）

Abstract By investigating the transfer rate of baicalin，the extraction process of Yinhuang erchen compound was improved and perfected，and the content of baicalin in Yinhuang erchen compound was further increased. The results showed that adding different amounts of pH regulator sodium citrate could effectively increase the solubility of baicalin in water，and adding 0.20% sodium citrate was the best，which could improve the transfer rate of baicalin by more than 10%，providing a reliable research basis for the quality control of baicalin preparation products.

Key words Yinhuang erchen compound;Baicalin;Transfer rate;Extraction process

银黄二陈合剂是由黄芩、金银花、姜半夏等药味组方而成的纯中药口服制剂，具有清热解毒、燥湿化痰、理气和中的作用，临床用于治疗温热咳嗽；方中黄芩泻肺热而平喘，金银花清解疫毒，共为主药，其中黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干燥根，现代医药学研究证明，其有效成分主要有黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等黄酮类化合物［1-2］，其中黄芩苷是黄芩药材以及含黄芩制剂常用质控指标成分。

黄芩中的黄芩苷在植物中以镁盐形式存在，可以被沸水溶出。综合考虑溶媒的毒性、成本、生产安全性，在系列提取溶媒、提取工艺摸索的试验基础上，银黄二陈合剂最终的工艺制法中，黄芩是经水煮提取，浓缩澄清后入药的［3］。但在制备及长期稳定性考察中发现，黄芩苷含量较初提取液有所降低，由于黄芩苷在冷水中难溶，精制过程中黄芩苷可能存在析出而损失［4-5］。该试验主要考察提取液的pH对黄芩苷转移率的影响，以期为银黄二陈合剂提取工艺提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试材。黄芩药材，批号202109011，购自禹神中药材专业合作社；金银花药材，批号202110305，购自临沂尚润中药材有限公司;黄芩提取物（黄芩苷含量85%），批号2021090801，山东迅达康兽药有限公司提供。

1.1.2 试剂。乙醇、PEG400、甘油、丙二醇、乙酸乙酯、聚山梨酯80、无水亚硫酸钠、氢氧化钠，均为国药集团化学试剂有限公司生产；黄芩苷对照品（批号Z0271910，纯度96.1%），中国兽医药品监察所；甲醇（色谱纯，Merck公司）；磷酸二氢钾（分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司）。

1.1.3 仪器。Agilent 1260 高效液相色谱仪，配DAD检测器（安捷伦，美国）；BP211D分析天平，感量0.000 01 g（赛多利斯，德国）；PB-10酸度计（赛多利斯，德国）；Milli-Q Advantage A10超纯水系统（密理博，美国）。

1.2 试验方法

1.2.1 pH对黄芩苷溶解性的影响。黄芩苷为淡黄色至棕黄色针晶，几乎不溶于水，易溶于氢氧化钠等碱性溶液中，但当 pH过高时，黄芩苷含量随时间的延长显著降低［3］，因此，该研究采用黄芩提取物添加不同量的氢氧化钠考察pH对黄芩苷溶解及含量的影响［6-7］。

1.2.2 pH调节剂对黄芩苷提取转移率的影响。

黄芩苷易溶于碱性溶液中，但当 pH过高时，黄芩苷含量随时间的延长显著降低，故需要筛选出最适宜的pH调节剂来保证黄芩苷的含量及稳定性。经过小试筛选了系列pH调节剂（硼酸盐、磷酸盐、枸椽酸钠和氢氧化钠），发现枸椽酸钠碱性温和，具有一定的缓冲和稳定溶液pH作用，并且不会导致黄芩苷水解，由于方中还含有共为主药的金银花，所以同时要兼顾pH对绿原酸的影响［6-7］。

1.2.3 黄芩苷转移率的计算。其计算公式：转移率=制剂中黄芩苷含量/黄芩药材含量×100%。

1.2.4 黄芩苷含量测定。

1.2.4.1 黄芩药材的黄芩苷含量测定。按照《中华人民共和国兽药典》2020年版二部“黄芩”项下含量测定方法检测。

1.2.4.2 制剂中黄芩苷的含量测定。

（1）色谱条件与系统适用性试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸（50∶50∶1）为流动相；检测波长为274 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1 500。

（2）对照品溶液的制备。取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成0.16 mg/mL的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备。精密量取本品1 mL，置于50 mL 容量瓶中，加50%甲醇适量，超声20 min，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

（4）含量测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2 结果与分析

2.1 pH对黄芩苷溶解性的影响

为了细化不同pH对黄芩苷溶解性的影响，该研究分别用0.45%、0.46%、0.47%、0.48%、0.49%、0.50%、0.51%和0.52%的氢氧化钠在80 ℃温度下溶解黄芩提取物，并测定不同氢氧化钠加入量对药液pH和性状的影响。试验结果表明（表1），按0.45%和0.46%的量加入氢氧化钠，黄芩提取物不溶解；氢氧化钠加入量为0.47%～0.52%，黄芩提取物溶解完全，而且随着氢氧化钠加入量的增加药液的颜色逐渐加深。当pH为5.56～5.83时药液的颜色为浅棕黄色，当pH为6.47～7.04时药液的颜色为棕黄色，当pH达到7.60时，药液变成棕红色。且通过检测不同pH条件下的黄芩苷含量发现，当pH在5.56～5.83时黄芩苷含量较高，pH为6.47～7.04时黄芩苷含量变化不明显，但当pH为7.60时黄芩苷含量降低显著，说明黄芩苷已发生水解氧化。由此可以确定黄芩苷在碱性溶液中不稳定，但是pH太低时黄芩提取物又不能全部溶解，因此根据此试验结果确定溶解黄芩苷适宜的药液pH为5.56～7.04。

2.2 pH调节剂对黄芩苷提取转移率的影响

分别在不同提取水中添加0.20%、0.30%、0.50%的枸橼酸钠，按银黄二

陈合剂工艺流程提取、浓缩后检测，结果显示，在提取水中添加0.20%～0.50%的枸橼酸钠，对黄芩苷、绿原酸的转移率有不同的影响。添加0.20%～0.50%枸橼酸钠，黄芩苷转移率较空白提取水均有所提高；而不同添加水平的枸橼酸钠导致绿原酸的转移率也发生变化，0.20%枸橼酸钠添加量较好，随着枸橼酸钠添加量增加至0.30%、0.50%时，转移率则下降，由于绿原酸分子结构中有酯键、不饱和双键和多元酚3个不稳定部分［6-8］，对pH也非常敏感，随着枸橼酸钠量的增加，pH升高，导致绿原酸发生降解；添加0.30%的枸橼酸钠，药液pH为5.61，黄芩苷转移率最高，可达59.19%，但绿原酸转移率仅为31.11%。综合考虑绿原酸的转移率，0.20%枸橼酸钠添加量较好，黄芩苷、绿原酸的转移率分别为56.39%、53.11%。

3 讨论与结论

按《中华人民共和国兽药典》2020年版规定，黄芩药材中黄芩苷（C21H18O11）含量不得低于9.0%，金银花中绿原酸（C16H18O9）含量不得低于1.5%［9］。以最低规定计算，以黄芩苷转移率50%、绿原酸转移率49%计算，银黄二陈合剂中黄芩苷含量理论值应不低于10.77 mg/mL，绿原酸含量理论值应不低于2.43 mg/mL。以上是实验室小试的结果，最终的含量限度应以中试试验结果为依据。

银黄二陈合剂是山东迅达康兽药有限公司等单位研发的纯中药复方新制剂，其中黄芩苷、绿原酸分别是黄芩、金银花的主要质控指标成分［10-11］，研究结果表明，枸椽酸钠对黄芩苷的溶解有极大的促溶作用，可有效防止黄芩苷的析出，提高药液黄芩苷的含量；由于绿原酸转移率随着枸橼酸钠添加量增大而下降明显，综合考量，选择枸橼酸钠添加量0.20%效果最理想。

参考文献

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基金项目 国家重点研发计划重点专项“防治畜禽免疫系统疫病的现代中兽药产品创制” （2017YFD0501505）。

作者简介 张传津（1967—），男，山东莒南人，研究员，从事中兽药质量控制及新制剂的研发工作。

收稿日期 2022-03-31