毛细管电泳法测定解酒类保健液中葛根素的含量

刘芳 赵晓冬 李宁 袁昕蓉

【摘要】应用毛细管电泳法快速测定解酒类保健液中葛根素的含量。采用毛细管电泳法，以20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氢钠溶液（pH8.5）-10%甲醇为缓冲液，未涂层的熔融石英毛细管柱（56 cm×50μm），检测波长254 nm，电压20 kV，柱温20℃，进样压力30 mbar，进样时间6 s。葛根素在10～300μg/mL的浓度范围内与峰面积线性关系良好（R=0.9952）。本方法简便快速、准确、经济性好，可用于测定解酒类保健液中葛根素的含量。

【关键词】毛细管电泳法；解酒类保健液；葛根素

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.04.020

Determination of Puerarin in Anti-alcohol Health Liquid by Capillary Electrophoresis

LIU Fang， ZHAO Xiaodong， LI Ning， YUAN Xinrong

（Shenyang Institute for Food and Drug Control， Shenyang 110122， China）

Abstract： To establish a rapid method for the determination of puerarin in anti-alcohol health liquid by capillary electrophoresis. The separation was performed on a uncoated fused silica capillary column （56 cm×50μm）， the detection wavelength was 254 nm， the separation voltages were 20 kV， the column temperature was 20℃， the injection pressure was 30 mbar， injection time was 6 s， and 20 mmol/L sodium borate-20 mmol/L sodium dihydrogen phosphate （pH8.5）-10% methanol was selected as the running buffer. Puerarin had a good linear relationship within the concentration ranges of 10～300μg/mL （R=0.9952）. This method is simple， rapid， accurate and very economical， and can be used for the determination of puerarin in anti-alcohol health liquid.

Key words： capillary electrophoresis； anti-alcohol health liquid； puerarin

毛细管电泳（Capillary Electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE），是20世纪80年代后期迅速发展起来的一项新型液相分离技术。CE把经典电泳技术与现代微柱分离技术完美结合，是分析领域继HPLC之后的又一重大进展[1]。

葛根有解肌退热、生津止渴、解酒毒等功效[2]，葛根素是葛根中的主要成分。葛根及葛根素在临床中被广泛应用。葛根素常用于治疗糖尿病、心脑血管疾病、动脉粥样硬化、心肌缺血、腹泻、发热等，还可对抗乙醇中毒的各种并发症。在解酒类保健品中葛根素也有着广泛的应用[3-6]。

本文采用毛细管电泳法测定解酒类保健食品中葛根素的含量。与HPLC相比，CE实验成本低、缓冲液用量小、出峰快、效率高，是一种高效环保的分析方法。

1材料与方法

1.1仪器与试药

毛细管电泳仪（Agilent，G7100A）；未涂层的熔融石英毛细管柱（Agilent，56 cm×50μm）；电子天平（Sartorius，MSA125P）；pH计（Mettler，S210-K）。

葛根素（中国食品药品檢定研究院，批号：110752-201816，含量：95.4%）；福禄寿三喜牌克劳克液（沈阳永大制药，批号：20210803）；力克保健液（辽宁力克制药，批号：20211122）。

1.2实验方法

1.2.1电泳条件

未涂层的熔融石英毛细管柱（56 cm×50μm）；缓冲液为20 mmol/L硼砂-20 mmol/L磷酸二氢钾溶液（pH8.5）-10%甲醇；检测波长为254 nm；电压为20 kV；温度为20℃；进样压力为30 mbar，进样时间6 s。每次测定前用缓冲液冲洗2 min。

1.2.2溶液配制

1）对照品溶液

精密称取葛根素对照品10.0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。葛根素浓度为1.0 mg/mL。

2）样品溶液

取样品5 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，超声提取5 min，摇匀静置，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤备用。

2结果与分析

2.1专属性

取上述对照品溶液和供试品溶液以及溶剂，分别在上述条件下测定，记录色谱图（见图1）。样品中葛根素与相邻峰分离度均大于1.5，说明本方法专属性良好。

2.2校准曲线

精密量取对照品溶液，用80%甲醇稀释制得标准系列溶液，使葛根素浓度为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/ mL、200μg/mL、300μg/mL，按本文1.2.1规定的电泳条件进样。以浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=1.2598X+77.864，R=0.9952。结果表明：在10～300μg/mL浓度范围内，线性关系良好。

2.3精密度

取浓度为100μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，响应值RSD为1.53%。

2.4检测限与定量限

将标准曲线最低点的溶液继续稀释，以信噪比=3计算检测限，以信噪比=10计算定量限，测得葛根素的检测限为0.5μg/mL，定量限为1.3μg/mL。

2.5重复性试验

取同一批次克劳克液，按本文1.2.2给出的样品溶液制备方法，平行制备6份溶液，按上述电泳条件进样，计算得到葛根素的含量为0.2013 mg/mL，RSD为1.8%，表明本法重复性良好。

2.6回收率试验

精密量取2种样品各6份，每份5 mL，每种样品分别加入葛根素对照品储备液0.5 mL、1 mL、1.5 mL，每个浓度2份，用甲醇稀释至25 mL，超声提取5 min，摇匀静置，取上清液经0.45μm微孔滤膜滤过，按上述电泳条件进样，计算回收率。葛根素在高中低3个浓度的平均回收率及RSD见表1。

2.7样品含量测定

取克劳克液及力克保健液，按本文1.2.2给出的样品溶液制备方法制备样品溶液，每批平行制备2份，按上述电泳条件进样，计算2批样品平均含量（见表1）。

3结论与讨论

磷酸盐与硼砂是常用的缓冲溶液[7]，仅用磷酸盐与硼砂作为缓冲液，样品峰无法达到很好的分离效果。有机溶剂作为增溶剂可以调整电渗流（Electro-Osmotic Flow，EOF）大小，一般会引起迁移时间的延长。在缓冲液中加入10%甲醇后，葛根素与相邻峰的分离度达到2.5，可以较好分离。

本试验考察了不同浓度缓冲液对结果的影响，增大浓度可以改善葛根素与样品中其他峰的分离度，但浓度过大会延长迁移时间且峰型变差，最终确定缓冲液浓度为20 mmol/L。缓冲液的pH值是影响迁移时间和分离度的另一个重要因素。pH值的改变会影响电渗流，从而改变迁移时间[8-9]。本试验考察了不同pH值缓冲液（pH值7.0～9.0）对结果的影响，发现迁移时间随pH值增大而减小，在pH值为8.5时，有较好的峰型与分离效果。

CE法与HPLC相比，节约了时间与试剂用量，毛细管柱也比昂贵的液相色谱柱要经济得多。唯一的不足之处在于毛细管系统的稳定性相较于液相系统差，这主要是毛细管电泳的分析机理所致[10-13]。为克服这个问题，本试验在每5～6针样品之间用0.1 mol/L氢氧化钠溶液、纯水和运行缓冲液分别冲洗3 min，迁移时间和响应值都可以达到较好的重复性。因此本方法采用外标法而未采用常用于CE分析的内标法。

利用二极管阵列检测器全光谱扫描功能（190～600 nm）分别采集标准溶液和样品溶液的光谱图。保留时间定性，通过比较标准溶液中葛根素的光谱图（见图2）与样品溶液中可疑色谱峰光谱图的重合性，进一步定性确证样品中可疑色谱峰是否为葛根素。

该方法采用保留时间和光谱图信息两方面进行综合定性分析，可有效避免在检测工作中因定性失误而出现假阳性样品[14-15]。在光谱库中添加葛根素对照品的光谱为参比光谱，将样品峰的光谱进行比对，可以在缺少对照品的情况下快速定性样品中是否含葛根素。本方法可以定性定量分析力克保健液中葛根素的含量，为解酒类保健品功效成分的检测提供了新思路。

【参考文献】

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【作者简介】

刘芳，1983年出生，女，主管药师，学士，研究方向为药品及保健食品质量分析。

赵晓冬，1979年出生，男，主任药师，硕士，研究方向为药品及保健食品质量分析。

（编辑：李加鹏）