滨州地区男性人乳头瘤病毒感染基因分型研究

李钰儒,徐 彦,孙长华△

滨州医学院附属医院:1.检验科;2.妇产科,山东滨州 256600

人乳头瘤病毒(HPV)是一种小型无包膜二十面体嗜上皮样环状DNA病毒,大小约为8 000个核苷酸碱基对,由蛋白衣壳包裹[1],大多数编码8种蛋白质,6种位于早期区域 (E1、E2、E4、E5、E6、E7),两种位于晚期区域 (L1、L2)[2]。基于L1基因的核苷酸序列将HPV分为α、β、γ、μ和ν 5个系统发育属[3]。根据HPV致病性不同,分为高危型、中危型和低危型[4]。HPV流行基因型在不同人群和地域中的分布存在一定差异,了解不同地区的HPV流行特点具有重要意义。目前,对滨州地区男性HPV感染的相关研究相对较少,本研究采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术,对滨州地区就诊的男性患者HPV感染情况、基因分型情况进行研究,为本地区HPV感染的临床防治和流行病学调查提供参考依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2021年5月至2022年10月在滨州医学院附属医院就诊的820例HPV男性受检者为研究对象,年龄18～70岁,平均(34.45±10.27)岁。按不同年龄段分为6组,其中<20岁组47例,20～<30岁组261例,30～<40岁组314例,40～<50岁组134例,50～<60岁组49例,≥60岁组15例。

1.2仪器与试剂 PCR扩增仪为上海宏石SLAN-96P荧光定量PCR仪,HPV核酸提取和分型鉴定试剂由江苏硕世生物科技股份有限公司提供。

1.3方法

1.3.1标本采集 临床医生佩戴无菌手套,用无菌棉拭子采集患者包皮、冠状沟、尿道口或肛周等处的皮损部位脱落细胞或组织,并放入专用保存液中,标本采集后及时检测,或2～8 ℃保存3 d内完成检测,(-20±5)℃保存不超过12个月。标本避免反复冻融,冻融次数不能超过5次,采用冰袋低温运输不能超过3 d。

1.3.2检测方法 采用实时荧光PCR技术检测21种HPV亚型,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82、73、6、11、81型。检测过程包括试剂配制、核酸提取、PCR扩增、杂交检测、结果分析,操作严格按照试剂说明书进行。

1.4统计学处理 采用SPSS25.0统计软件进行数据处理及统计分析。计数资料以例数或百分率表示,多组间比较采用χ2检验或Fisher精确概率法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV各亚型分布情况 820例男性受检者中共检出239例阳性,阳性率为29.15%,阳性率居前5位的HPV亚型分别为HPV6、11、16、51、53型。低危型中阳性率最高的HPV亚型为HPV6、11型,分别为12.20%、5.61%;中危型中阳性率最高的HPV亚型为HPV53型,为2.07%;高危型中阳性率最高的HPV亚型为HPV16、51型,分别为4.27%、2.20%。见表1。

表1 HPV各亚型分布情况

2.2HPV感染类型分布 239例HPV阳性者中单一感染176例(21.46%),多重感染63例(7.69%),其中双重感染35例,三重感染14例,四重感染7例,五重感染4例,六重感染3例,单一感染率明显高于多重感染率,差异有统计学意义(P<0.05)。单一低危型99例,占41.42%,单一中危型9例,占3.77%,单一高危型68例,占28.45%;多重低危型4例,占1.67%,多重高危型7例,占2.93%,多重中危型0例,多重混合型(高-中、高-低、中-低、高-中-低)52例,占21.76%。见表2。

表2 HPV感染类型分布

2.3HPV感染年龄分布特征 在不同年龄组中,以50～<60岁年龄组男性HPV阳性率最高,阳性率为44.90%(22/49),其次为<20岁年龄组,阳性率为36.17%(17/47)。20～<30岁、30～<40岁、40～<50岁、≥60岁年龄组男性HPV阳性率分别为24.52%(64/261)、27.71%(87/314)、32.84%(44/134)、33.33%(5/15)。不同年龄组HPV阳性率比较,差异无统计学意义(χ2=10.974,P>0.05)。

3 讨 论

HPV是男性和女性最常见的性传播感染病毒,高危型HPV感染与女性宫颈、外阴、阴道癌症,男性阴茎、肛门和口咽癌症发生有密切关系。全世界大约88%的肛门癌与HPV感染有关,HPV16(75%～80%)和HPV18(约3.5%)是最常见的亚型[5],HPV16也是引起阴茎癌最常见的HPV亚型[4]。宫颈癌是全球女性中第四大常见癌症,同样是女性癌症死亡的第四大原因[6],与HPV感染密切相关,其中HPV16和HPV18是最常见的亚型,并且HPV阳性率随着宫颈病变严重程度的增加而增加[7-8]。此外,男性高危型HPV的感染在女性宫颈病变中起到一定的作用,有研究表明女性宫颈HPV感染者其男性配偶外生殖器HPV感染率偏高,男女双方在容易引起宫颈高级别病变的亚型感染上具有较高的吻合率[9],说明男性感染HPV可能是其配偶患宫颈癌的潜在危险因素。临床上要提高对男性HPV感染的重视,男女共同防治才能达到更好的效果。值得注意的是,在美国,与HPV相关的头颈部癌的发病率已经超过HPV相关宫颈癌的发病率[10]。同时,研究发现HPV阳性的口咽癌患者比HPV阴性的口咽癌患者有更好的预后和治疗反应,检测口咽癌患者HPV对其预后和治疗具有重要意义[11]。

持续存在的低危型HPV6、11可以导致大多数肛门生殖器疣和呼吸道乳头瘤病。尖锐湿疣是一种良性疣状增生,呈外生性生长,如果不及时治疗,多个皮损融合可形成巨大尖锐湿疣,30%～56%的巨大尖锐湿疣可能进展为鳞状细胞癌[12]。复发性呼吸道乳头瘤病(RRP)是HPV通过逃逸先天和适应性免疫引起反复发作的黏膜乳头状瘤,预防性接种疫苗可以降低 RRP的发病率[13]。HPV异体接种主要发生在家庭成员之间[14],因此HPV感染的男性患者家族成员也应该检测是否存在HPV感染,并及时接种疫苗。本地区阳性率最高的HPV亚型是HPV6、11型,虽然大多情况下不会导致恶性肿瘤的发生,但是也应该对感染低危型HPV的患者定期进行随访,警惕HPV感染持续存在而引起的相关病变,采取行之有效的办法及时清除病毒。

本研究820例研究对象中,HPV阳性239例,总阳性率为29.15%。广州地区就诊男性HPV阳性率为30.75%[15],长春地区就诊男性HPV阳性率为28.10%[16],与本研究的结果相近;郑州地区就诊男性HPV阳性率为42.91%[17],怀化地区就诊男性HPV阳性率为50.67%[18],高于本研究结果。造成这些差异的原因可能与标本采集方式、病例来源,以及各地区经济条件、生活方式、文化多样性、教育水平、遗传变异与HPV疫苗接种意识的不同有关。本研究共检测20种HPV亚型,阳性率居前5位的HPV亚型分别为HPV6、11、16、51、53型,阳性率分别为12.20%、5.61%、4.27%、2.20%、2.07%,与各地区报道不完全一致[19-21]。耿见忠[19]报道贵州地区检出率居前5位的HPV亚型分别为HPV6、11、52、16、55型,吕家庆等[20]报道海南地区常见的HPV亚型主要为HPV6、11、16、42、43型,季泽益等[21]报道杭州地区HPV阳性率较高的亚型依次为HPV6、11、52、16、81型。本研究发现不在九价疫苗范围内的HPV51、53型在滨州地区的阳性率较高,因此,对某一地区HPV流行病学调查的深入研究可为该地区HPV预防性疫苗接种及研究提供依据。

本研究结果显示,滨州地区239例HPV阳性感染者以单一感染为主,占73.64%,多重感染占26.36%,其中以双重感染为主;单一感染中低危型占比高于中危型、高危型占比,多重感染中以多重混合型感染为主,多重感染呈现出复杂性特点,所以在检测时不能只单一检测高危型、中危型或低危型HPV,避免造成漏诊。

本研究结果表明,滨州地区男性HPV阳性率在不同年龄组中比较,差异无统计学意义(P>0.05),这与于功奇等[22]报道山东地区男性HPV阳性率与年龄的关系结果基本一致,但各年龄段就诊人数差异较大,20～<40岁就诊人数较多,可能与此年龄段性生活活跃有关。50～<60岁人群阳性率最高,可能与该年龄段人群免疫力低下而导致HPV的易感染性增加有关。<20岁的人群HPV阳性率位居第2位,此年龄段正处于青少年,缺乏健康意识,也是宣教过程中不可忽视的人群。>60岁人群由于就诊人数较少,统计结果可能存在偏倚,参考性不高,需扩大样本量进一步研究。

综上所述,滨州地区男性HPV感染主要以HPV6、11、16、51、53型为主,单一感染多于多重感染,单一感染以低危型感染最常见,多重感染以多重混合感染为主,年龄与患病率无关。本研究通过对滨州地区男性HPV感染流行病学的研究,为滨州地区男性HPV感染早期筛查、预防、诊断提供了重要的依据。