气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中残留溶剂

李素华，吴绍锋

（1.广东省中医院药学部，广东 广州 510006；2.广州中医药大学基础医学院实验教学中心，广东 广州 510006）

硫酸氢氯吡格雷[1-2]是血小板聚集抑制剂，主要用于患者预防动脉粥样硬化血栓的形成。目前已有报道测定本品残留溶剂，但是，由于生产工艺不同，所用到的残留溶剂也各有差异，本品在生产过程中用到的4 种残留溶剂，分别为甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯。目前未见报道同时测定上述4 种残留溶剂[3-5]。参照《中国药典》2015 年版与人用药品注册技术规范国际协调会（ICH）相关要求，建立适合生产工艺的顶空气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4 种残留溶剂方法。本法灵敏、准确，可用于有效检测硫酸氢氯吡格雷中有机残留溶剂。

1 仪器、样品与试剂

仪器：7890B 气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID）；Agilent 7694E 顶空进样器。

硫酸氢氯吡格雷，北京药物研究院化药部提供；甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，色谱纯，迈瑞达；N,N-二甲基甲酰胺（DMF），HS-GC，CNW。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-624（6%氰丙基苯基-94%甲基聚硅氧烷，30 m×0.53 mm×3.0 μm）毛细管色谱柱；检测器：FID；检测器温度：250 ℃；氮气为载气，流速为3.0 mL/min，分流进样，分流比为3∶1；程序升温：起始温度为40 ℃，维持6 min，以10 ℃/min 的速率升温至200 ℃，维持8 min；顶空平衡温度为80 ℃，平衡时间为30 min；进样量：1 mL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品贮备溶液

精密称取甲醇615.20 mg、乙醇1 002.12 mg、丙酮1 000.25 mg、乙酸乙酯1 020.19 mg，置于同一20 mL量瓶中，加DMF 溶解并稀释至刻度，精密量取1 mL置于50 mL 量瓶中，加DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

2.2.2 对照品溶液

精密称取对照品贮备液5.0 mL 置于10 mL 量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，混匀，即得对照品溶液。精密量取2 mL 置于顶空瓶中，轧盖，密封。

2.2.3 供试品溶液

精密称取本品0.20 g 于顶空瓶中，加入DMF 2.0 mL，轧盖密封，溶解，作为供试品溶液。

2.3 系统适用性实验

取空白溶剂DMF、对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”中色谱条件进样分析，记录色谱图。结果表明，空白溶剂DMF 无干扰，上述4 种溶剂峰型良好，出峰顺序分别为甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯，分离度均大于2.0。

2.4 线性关系考察

精密量取对照品贮备溶液1.0、2.5、4.0、5.0、9.0 mL置10 mL 量瓶中，用DMF 稀释至刻度，混匀，得到对照品系列溶液Ⅰ-Ⅵ。分别量取对照品系列溶液2.0 mL 置顶空瓶中，密闭，按上述“2.1”中色谱条件进样分析。以峰面积（A）为纵坐标，质量浓度（ρ）为横坐标，进行线性回归，结果表明甲醇质量浓度在61.52～615.20 μg/mL 范围内、乙醇质量浓度在100.21～10 002.12 μg/mL 范围内、丙酮质量浓度在100.03～1 000.25 μg/mL范围内、乙酸乙酯质量浓度在102.02～1 020.19μg/mL 范围内，线性关系良好（见图1）。

图1 甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯线性图

2.5 进样精密度实验

精密量取对照品溶液2.0mL 置顶空瓶中，轧盖，密封，平行6 份，按“2.1”中色谱条件进样分析，计算甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的RSD，结果见表1。

表1 进样精密度结果

由表1 可知：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯RSD 均不大于40%，表明仪器进样精密度良好。

2.6 定量限和检测限

将“2.2.2”项下对照品溶液用DMF 逐级稀释进样，当信噪比（S/N）=10 时，为检测限浓度，当信噪比（S/N）=3 时为检测限浓度，结果见表2。

表2 灵敏度结果

由表2 可知，该法灵敏度高，供试品浓度满足本品中残留溶剂检测。

2.7 重复性

同一批样品平行测定6 次，按外标法计算供试品中待测溶剂的残留量，并对6 次测定结果进行比较，来评价方法的重复性。结果见表3。

表3 残留溶剂-重复性结果

由表3 可知，同一批样品6 次结果测定值基本一致，表明方法重复性好。

2.8 加样回收率

精密称取9 份20191212 批样品0.20 g 于顶空瓶中，分别加入Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ对照品系列溶液2.0 mL，各3 份，密闭，使溶解。按“2.1”中色谱条件进样分析结果见表4～表7。

表4 甲醇加样回收实验结果（n=9）

表5 乙醇加样回收实验结果（n=9）

表6 丙酮加样回收实验结果（n=9）

表7 乙酸乙酯加样回收实验结果（n=9）

由表4～表7 可知，甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的平均回收率均在90%～110%，RSD%均小于5，说明供试品对残留溶剂的检测无干扰，本方法准确度高。

2.9 样品测定

取硫酸氢氯吡格雷四批样品（批号：20191213、20191215、20191217、20191219）按“2.2”中溶液配制方法，按“2.1”中色谱条件进样分析，按外标法计算4 种有机溶剂残留量，结果见表8。

表8 样品测定结果（n=3）

3 结论

该法选用DB-624 色谱柱是考虑到4 种溶剂的极性为中等偏高极性，且为实验室常用的气相色谱柱。方法验证过程中对进样口温度±2 ℃，氮气流速±0.2 mL/min，分流比±1，顶空平衡温度±5 ℃，平衡时间±5 min 作了耐用性考察，结果显示耐用性良好。综上所述，本方法适用于同时分析硫酸氢氯吡格雷中4 种残留溶剂，方法灵敏、准确，可用于有效检测硫酸氢氯吡格雷中有机残留溶剂的检测。