采精频率对嘉黎牦牛精液品质的影响

王耀梅，袁 越，赵彦玲

（西藏农牧学院 动物科学学院，西藏 林芝 860000）

牦牛精液品质受多种因素影响，其中采精频率是一个非常重要的因素[1]。研究最佳采精频率对充分合理地利用牦牛种公牛具有重要意义。在精液采集过程中需要根据不同的牛种、年龄、身体状况、繁殖目的等因素合理设定采精频率[2]。采精频率对于保障公牛的生殖健康和精液品质非常重要，如果采精频率过低，将导致公牛射精不充分、精子老化、精液积聚过多等，影响精液的质量和产量；如果采精频率过高，就会导致公牛体力不足、精液质量下降，影响精子的品质和数量，甚至还会影响公牛的身体健康[3-5]。原因是采精频率过低，会使附睾内储存的精液时间过长，导致精子密度偏低，精子长时间停留在附睾内会降低精子的活力和受孕能力，增加精子死亡率；而采精频率过高，精液在附睾内储存的时间短，会导致精子成熟率降低或数量减少，生产效率显著下降[6]。因此，本研究利用计算机辅助精液分析仪对不同采精频率的嘉黎牦牛的精液品质进行测定，以探索最佳采精频率，为嘉黎牦牛种公牛的合理应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选用拉萨市当雄县当雄牦牛冻精站中体况、年龄相近的12头健康成年嘉黎牦牛作为试验动物。

1.2 试验方法

按照不同的采精频率将牦牛分为A、B、C、D 4个组，每组3头。A组采精2次/周、B组采精3次/周、C组采精4次/周、D组采精5次/周。试验采用假阴道法采精，采精时间为早晨9：00左右，试验期为1周，每次采精完成后立即送往实验室进行精液品质检测。

1.3 测定指标及测定方法

用计算机辅助精液分析系统（casa）检测精子浓度、活力和运动参数等指标。把采集的精液放在37 ℃水浴锅中孵育10 min后，将3 μL精液滴在预热（37 ℃）的makler精子计数板上，待精液静止稳定后，放置到显微镜下，采用精子图像分析仪检测精子的浓度、活力和运动参数等相关指标。

用改良巴氏染色方法检测精子畸形率和顶体完整率。考马斯亮蓝染色液在37 ℃水浴中预热10 min，将精子涂片浸泡在染色液中5～7 min后冲洗干净并晾干，干燥后密封，用改良巴氏染色法染色，在显微镜下观察精子畸形率和顶体完整率。

1.4 统计分析

数据均以“平均值±标准差”表示，精子的各项指标数据用SPSS 19.0软件进行分析，均值比较采用单因素方差分析，用邓肯多重比较进行显著性分析，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 采精频率对嘉黎牦牛精液品质的影响

从表1可以看出，嘉黎牦牛采精频率为3次/周时，精液品质达到最高。其中，采精频率为3次/周的精子密度显著高于2次/周与5次/周的精子密度（P＜0.05），而与4次/周的精子密度差异不显著（P＞0.05）；采精频率为3次/周的精子活力也显著高于其他组（P＜0.05）；采精频率2次/周、3次/周、4次/周时的精液量各组间差异不显著（P＞0.05），但均与5次/周组差异显著（P＜0.05），精液量随着采精频率的增加而逐渐减少；采精频率为2次/周、3次/周时精子畸形率差异不显著（P＞0.05），但均与采精频率为4次/周、5次/周的精子畸形率差异显著（P＜0.05）；采精频率为5次/周时精液的顶体完整率显著低于其他组（P＜0.05）。

表1 采精频率对嘉黎牦牛精液品质的影响

2.2 采精频率对嘉黎牦牛精子运动速度的影响

由表2可知，精子的曲线运动速率（VCL）、平均路径速度（VAP）、直线速率（VSL）均在采精频率为3次/周时达到最高值，与4次/周差异不显著，与2次/周和5次/周差异显著（P＜0.05）。

表2 采精频率对嘉黎牦牛精子运动速度的影响

精液的数量和质量易受环境、天气和遗传因素影响[7]，公牦牛精液质量的好坏直接影响牦牛的受孕率，其中采精频率是一个重要的影响因素。本试验结果显示，精子的密度和活力指标均在采精频率为3次/周时达到峰值；精液量在采精频率为2次/周时最多，当采精频率增加到5次/周时，精液量最少；精子的VCL、VAP、VSL均在3次/周时达到最高值，与4次/周差异不显著，与2次/周和5次/周差异显著。Meding[8]的研究表明，采集精液频率过高的公猪精液品质相对较差。Audet等[9]和胡国娟[10]的研究结果均表明，成年种公猪每隔5～6天采精1次，其精液品质最佳。谢静静等[11]的研究结果表明，猪采精间隔为3～5 d时综合性能最佳。易宗容等[12]研究发现，采精频率为3次/周时精液品质最佳，精子顶体完整率随着采精频率的增加而出现显著下降趋势。阳文攀等[13]的研究结果表明，猪的采精间隔时间越长，其精液量、精子活力、精液密度指标越好，采精间隔为5 d时综合性能最佳，但长时间不采精会导致精子活力降低，这表明采精频率对精液质量有较大影响。也有研究发现，精子活力高说明精子的运动性能较强，相关的运动参数也会相应提高。在本试验中，精子的VCL、VAP、VSL随着采精频率的增加呈现先增加后下降的趋势，在3次/周时，VCL、VAP、VSL指标达到峰值。李碧波等[14]的研究表明，高频率的采精会给公羊带来过度刺激，导致其阴茎难以恢复，出现疲惫、精神不佳和性欲下降等情况，同时会影响公羊的正常活动和繁殖能力。张佳慧等[15]的研究结果表明，湖羊的采精量及精子密度会随着采精频率的增加而下降。Bunaciu等[16]和赵辉玲等[17]的研究结果表明，兔的精子密度和采精量均会随着采精频率的增加而出现下降趋势。精子密度和射精量随着采精频率的增加而降低，动物由于品种不同，其合适的采精频率也有所差异。李雪贤等[18]研究发现，种公驴采精频率为3 d/次时最佳，梅军四等[19]研究结果表明，长白种公猪精子的畸形率、精液密度和采精量随着采精频率的增加出现明显下降趋势。本试验结果表明，除射精量在采精频率为2次/周时较高外，精子密度、精子活率、精子的曲线运动速率、平均路径速度、直线速率均在采精频率为3次/周时最佳。

3 结论

嘉黎牦牛采精频率为3次/周时，精子的密度、活力高于2次/周、4次/周、5次/周；精液量和精子顶体完整率在采精频率为2次/周时达到最高；精子畸形率在采精频率为3次/周时最低，呈现出随采精频率的增加而升高的趋势。精子曲线运动速率、平均路径速度、直线速率均在3次/周时达到最高值。综上所述，嘉黎牦牛的最佳采精频率为2～3次/周。