肺癌患者bFGF、miR-1233、D-二聚体及Fib水平变化与肺栓塞发生的关系

解宝泉,王立民,王袁

肺癌是发病率较高的恶性肿瘤[1]。肺栓塞(pulmonary embolism,PE)是因血栓堵塞肺动脉系统所致的一种呼吸系统危急重症,其是肺癌患者的主要并发症之一[2-3]。研究显示,肺栓塞患者临床症状的特异性较差,仅通过临床症状诊断的难度较大[4]。寻找无创且灵敏的指标预测肺癌合并肺栓塞的发生对于改善此类患者的预后具有重要意义[5-6]。微小核糖核酸-1233(microRNA-1233,miR-1233)在基因表达及红细胞分化的调节中有重要作用,其指标水平变化可用于心血管疾病及恶性肿瘤的诊断[7]。D-二聚体(D-dimer,D-D)水平能够反映机体高凝状态及血栓形成状况[8]。纤维蛋白原(fibrinogen,Fib)是由肝脏合成的一种糖蛋白,其可反映凝血系统活化程度[9]。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)主要发挥调节血管生成的作用。有关bFGF与肺栓塞的关系极少有研究报道[10]。本研究探讨上述指标对肺癌患者合并肺栓塞的预测价值,以期为临床提供依据,报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年6月—2021年6月华北理工大学附属医院呼吸内科确诊的肺癌合并肺栓塞患者110例作为栓塞组,另外选取医院同期收治的肺癌但未合并肺栓塞患者110例作为非栓塞组。本研究已经获得医院伦理委员会批准(伦审批[2017]-11),患者及家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准:①肺癌的诊断标准参考《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》中的标准[11],以肺部CT、MR及纤维支气管镜检查结果确诊;②肺栓塞以彩色多普勒超声结果进行诊断,显示静脉管腔增宽、血流信号减弱或消失;③患者年龄范围50～79岁。(2)排除标准:①患者合并精神疾病或老年痴呆等;②患者伴有血液系统感染;③患者合并肺结核、支气管扩张、肺纤维化等其他基础肺部疾病;④资料缺失,无法完成统计的患者。

1.3 观测指标与方法

1.3.1 凝血功能指标检测:采集患者入院时空腹肘静脉血3 ml,离心留取血清待测。上述血清采用ELISA法检测bFGF水平,凝固终点法检测Fib水平,胶乳增强免疫比浊法测定D-D水平。并应用STARMax全自动血细胞凝集分析仪(法国Stago公司)检测Fib、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)。INR=(患者PT/正常对照PT)ISI。上述指标检测试剂盒购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。

1.3.2 miR-1233表达水平检测:常规进行提取miRNA、逆转录、定量分析逆转录产物、产物扩增等步骤。 miR-1233引物序列:5’-GGAGACATGAGAGCTGCCAAC-3’;5’-CCAGCAGCATGTCGAAGATCA-3’。使用的仪器为济南欧莱博科学仪器有限公司生产的MA6000型实时荧光定量PCR仪。扩增条件: 50℃ 100 s,94℃ 10 min,95℃ 10 s,60℃ 1 min,共计42个循环。U6作为内参仪器自动获取阈值循环数(Ct),利用2-△△Ct法计算miR-1233表达。 试剂盒购自赛默飞世尔科技有限公司。

2 结 果

2.1 2组临床资料比较 2组患者的性别、年龄、BMI、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、血脂异常率、慢性阻塞性肺疾病率、肺部感染率、TNM分期、病灶直径、病理学类型、淋巴结转移情况及WBC、Hb、PLT比较,差异均无统计学意义(P>0.05);肺栓塞组患者的房颤率、NYHA分级≤Ⅱ级患者占比均高于非栓塞组(P<0.01),见表1。

表1 非栓塞组和栓塞组患者临床资料比较Tab.1 Comparison of Clinical Data between Non Embolized and Embolized Patients

2.2 2组血清bFGF、miR-1233、D-D、Fib水平比较 栓塞组患者的bFGF、miR-1233、D-D、Fib水平均高于非栓塞组(P<0.01),见表2。

表2 非栓塞组和栓塞组患者bFGF、miR-1233、D-D、Fib水平比较Tab.2 Comparison of bFGF, miR-1233, D-D, and Fib levels between non thrombotic and thrombotic patients

2.3 2组患者凝血功能比较 肺栓塞组患者的PT、 APTT、INR测定值低于非栓塞组,差异均有统计学意义(P<0.01),见表3。

表3 非栓塞组和栓塞组患者凝血功能指标比较Tab.3 Comparison of coagulation function indicators between non thrombotic and thrombotic patients

2.4 bFGF、miR-1233、D-D、Fib预测患者发生肺栓塞的价值 绘制bFGF、miR-1233、D-D、Fib预测患者发生肺栓塞的价值ROC曲线,并计算曲线下面积(AUC),结果显示,bFGF、miR-1233、D-D、Fib预测肺癌患者发生肺栓塞的AUC值分别为0.687、0.821、0.947、0.766, 以D-D 的AUC最大(Z/P=5.102/<0.001、4.910/<0.001、3.776/<0.001),见表4、图1。

图1 bFGF、miR-1233、D-D、Fib预测肺癌患者发生肺栓塞的ROC曲线Fig.1 ROC curve of bFGF, miR-1233, D-D, and Fib predicting pulmonary embolism in lung cancer patients

表4 bFGF、miR-1233、D-D、Fib预测肺癌患者发生肺栓塞的价值比较Tab.4 Comparison of the predictive values of bFGF, miR-1233, D-D, and Fib for pulmonary embolism in lung cancer patients

2.5 肺癌患者发生肺栓塞的多因素Logistic回归模型分析 以肺癌患者是否发生肺栓塞作为因变量,以上述结果中具有统计学意义的指标作为自变量,建立Logistic回归模型分析,结果显示,合并房颤,bFGF、miR-1233、D-D、Fib均升高是肺癌患者发生肺部栓塞的独立危险因素(P<0.05),PT、APTT、INR升高为保护因素(P<0.05),见表5。

表5 肺癌患者发生肺栓塞的多因素Logistic回归模型分析Tab.5 Multivariate logistic regression model analysis of pulmonary embolism in lung cancer patients

3 讨 论

肺栓塞起病隐匿,早期无明显症状。若肺癌患者伴有该疾病则会增加患者死亡率,针对此类患者的诊断较为困难[12]。临床需要寻找能够特异性诊断肺癌合并肺栓塞的指标,以期为指导临床治疗及预后评估提供依据。

本研究结果显示,栓塞组患者的bFGF、miR-1233、D-D、Fib水平均显著高于非栓塞组,差异均具有统计学意义。上述指标均能够很好地预测肺癌患者合并肺栓塞,其中D-D的预测价值最好。已有研究显示[13],bFGF参与新生血管生成,其在预测肿瘤的发生发展中有较好的效果。目前,有关该指标与肺栓塞的关系仅有少量文献报道。分析本研究结果,当机体癌变后,该因子扮演着致癌的作用,可增加肿瘤组织血供,促进大量新生血管生成,最终为栓塞的形成提供有利条件。研究显示[14],miR-1233在炎性反应的发生及基因表达调控方面发挥重要作用。结合本研究结果,肺癌患者炎性反应加剧,在此情况下,miR-1233水平升高会对血管内皮细胞造成严重损伤,使机体较多胶原蛋白暴露出来,血小板聚集,进而促进肺栓塞的发生。Fib与 D-D均是反映凝血及血栓状态的指标,在栓塞的发生及发展中发挥了重要作用。Fib与血小板一同作用可保护循环血液中的循环肿瘤细胞,肿瘤细胞会激活血小板,进而促进凝血的发生,导致肺栓塞的发生[15]。反过来,肺栓塞发生时,也会诱导纤维蛋白原纤维大量产生。本研究发现血清D-D、Fib水平增加与肺癌患者并发肺栓塞存在密切联系。

凝血功能的衡量指标包含PT、INR、APTT、Fib、D-D等。凝血途径有外源性及内源性2种,APTT是内源性指标,PT则是外源性指标。INR的值越低,血栓形成率就越高[16-17]。本研究结果显示,肺栓塞组患者的PT、APTT、INR水平显著较非栓塞组低。血小板激活后会促进凝血途径的放大,活化的血小板会与凝血因子复合物相结合产生凝血酶,促进纤维蛋白原水解。在上述情况下,大量纤维蛋白原凝结成网,为血栓的形成提供条件,这也是APTT、PT、INR测定值可预测肺栓塞发生的主要原因。另有研究发现[18-19],在肺部、口腔等恶性肿瘤中,APTT与PT往往会显著延长,且其还可预测患者预后情况。有研究报道[20],INR值的降低可作为肺癌合并静脉血栓栓塞的危险因素,本研究结果表明APTT、PT的延长是肺癌合并肺栓塞的影响因素,这与以往的文献报道一致。

本研究Logistic回归模型显示,bFGF、miR-1233、D-D、Fib升高,合并房颤是肺癌患者发生肺栓塞的独立危险因素(P<0.05),PT、APTT、INR升高是保护因素(P<0.05)。上述血清指标对于肺癌合并肺栓塞均有一定的预测价值。本研究在以往研究的基础上纳入多种指标以期提高临床对肺癌合并肺栓塞的风险评估水平。临床上可依据上述指标在肺癌患者中的异常变化来预测肺栓塞的发生情况,以指导临床尽快开展治疗,降低死亡率。但是本试验样本量有限,尚需继续收集数据扩大样本量,以验证本研究结果。

综上所述,血清bFGF、miR-1233、血浆D-D、Fib升高会增大肺癌患者发生肺栓塞的风险,检测上述指标,尤其是D-D水平,对于预测患者发生肺栓塞具有重要的价值。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

解宝泉:设计实验,实施研究,采集数据,分析解释数据,文章撰写,统计分析;王立民:设计实验;实施研究;王袁:采集数据,分析解释数据,统计分析