急性胰腺炎患者外周血CD66b+、CD177+中性粒细胞表达及意义*

郭慧敏 尚金金 褚菲菲 王丽红 李琨琨 吴慧丽

郑州大学附属郑州中心医院消化内科河南省结直肠癌诊治医学重点实验室 郑州市结直肠癌诊治与研究重点实验室,河南省郑州市 450000

急性胰腺炎(AP)是消化科常见急性炎症性疾病,该病起病急、病情进展迅速,临床普遍将其根据病情严重程度分为轻症AP(MAP)、中度重症AP(MSAP)及重症AP(SAP)三类,其中SAP患者可出现持续性器官衰竭,病程较长且死亡风险高[1]。早期正确识别AP类型有助于延缓患者病情进展,减少胰腺炎症对患者造成的损伤,故采取有效手段对AP患者病情进行准确预测十分重要[2]。中性粒细胞(NEUT)是机体固有性免疫应答系统重要组成部分,局部组织发生炎症反应时,NEUT会先被募集到炎症组织而发挥免疫作用,CD66b+、CD177+是NEUT特异性组成部分,二者均表达于NEUT细胞膜表面,参与免疫细胞应答与调节功能[3]。研究发现,CD66b+与CD177+NEUT在自身免疫性疾病、血管炎或肿瘤患者外周血中可明显升高,但二者在AP患者外周血中的表达与功能尚不明确[4]。基于此,本研究通过分析不同分类AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表达差异,探究二者在AP病情进展中的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取我院2020年8月—2022年9月收治的104例AP患者。纳入标准:(1)符合《中国急性胰腺炎多学科诊治共识意见》中AP相关诊断标准[5]:血清淀粉酶及脂肪酶水平≥3倍正常上限值;(2)发病时间在48h内;(3)临床病历资料无缺失;(4)患者及家属知情同意。排除标准:(1)慢性胰腺炎;(2)因肿瘤导致的胰腺炎症;(3)以往存在器官衰竭史;(4)中断治疗转院者。

1.2 AP分类 分类标准[6]:无局部或全身性并发症,无脏器衰竭,临床症状可在1～2周内恢复为MAP;伴有局部或全身性并发症,存在一过性脏器衰竭且48h内可恢复为MSAP;出现持续性1个或多个脏器衰竭且持续时间>48h为SAP。根据上述标准将入组患者分为MAP组、MSAP组及SAP组。三组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

表1 三组患者一般资料比较

1.3 病情严重程度评分 采用急性胰腺炎严重程度床边指数(BISAP)[7]评估入组患者入院24h内疾病严重程度,评估标准为:(1)年龄>60岁计为1分,≤60岁计0分;(2)血尿素氮>8.9mmol/L为1分,≤8.9mmol/L计0分;(3)全身炎症反应,满足体温>38℃或<36℃、心率>90次/min、呼吸>20次/min、白细胞计数>12.0×109/L或<4.0×109/L中的2项以上者计1分,不满足计0分;(4)精神状态Glasgow评分[8]<15分计1分,≥15分计0分;(5)有胸腔积液计1分,无则计0分。

1.4 实验室指标检测 采集AP患者入院时外周血10ml,存于1支抗凝管中,加入红细胞裂解液,室温下静置10min后再次裂解,10min后离心去除残留裂解液,经PBS清洗离心后沉淀,去除上清,调整细胞浓度为1×106细胞。后各取全血100μl于2支流式管中,分别加入藻红蛋白标记抗人CD66b单抗、异硫氰酸荧光素标记抗人CD177抗体各10μl充分混匀,室温避光孵育15min后加500μl红细胞溶血剂(美国Beckman Coulter公司),振荡混匀,室温避光孵育15min,加入500μl鞘液混匀,室温避光孵育5min,再加入100μl充分混匀的Flow-count绝对计数微球,上机,采用DxFLEX 流式细胞仪(美国Beckman公司)检测标本中CD66b+、CD177+NEUT百分比。

2 结果

2.1 三组实验室指标及病情评分比较 SAP组患者CD66b+、CD177+NEUT比例及BISAP评分均高于MAP组及MSAP组(P<0.05),且MSAP组高于MAP组(P<0.05),见表2。

表2 三组实验室指标及病情评分比较

2.2 AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表达与BISAP评分相关性分析 AP患者的CD66b+、CD177+NEUT表达均与BISAP评分呈正相关(r=0.382、0.464,P<0.05)。

2.3 外周血CD66b+、CD177+NEUT表达对AP患者病情严重程度预测价值分析 外周血CD66b+、CD177+NEUT及二者联合预测AP患者病情严重程度的AUC分别为0.785、0.805、0.855,敏感度分别为78.95%、94.74%、73.68%,特异度分别为71.76%、57.65%、87.07%,见表3及图1。

图1 外周血CD66b+、CD177+ NEUT表达预测AP患者病情严重程度的ROC曲线

表3 外周血CD66b+、CD177+ NEUT表达对AP患者病情严重程度预测价值

3 讨论

AP是因胰酶大量分泌而导致胰腺自身消化、出血及坏死的炎性疾病,而AP患者炎症反应发生及加重与胰腺组织炎症因子与胰蛋白酶过度释放密切相关[9]。由于AP病情变化快,其中SAP起病凶险,病程较长,伴有严重感染及持续性脏器衰竭,是AP患者死亡的主要原因,故临床将早期准确识别SAP作为治疗重点,这将有助于选择合适的治疗方案及预后评估[10]。有研究发现,除临床症状评估及影像学检查外,生物学标志物也能用于判断AP病情进展,如降钙素原、动脉血气分析等[11]。因此寻找一种准确、灵敏的生物学标志物对AP患者病情进行早期预测十分必要。

CD66b+、CD177+是NEUT效应细胞重要亚群之一,参与消化系统组织中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的病理免疫过程,NETs是NEUT杀灭病原体的新型免疫机制,有研究表明,NETs是AP病情进展的重要因素[12]。本研究检测了不同病情AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表达情况,结果发现AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表达随病情严重程度呈明显增高趋势,提示CD66b+、CD177+NEUT与AP病情进展密切相关,表明CD66b+、CD177+NEUT可能在AP患者炎症反应过程中发挥作用。分析原因可能为,CD66b+是NEUT特异性颗粒上的成分,可在NEUT脱颗粒过程中通过特异性颗粒与细胞膜融合从而转移至胞膜表面上,其过表达提示NEUT发生脱颗粒现象,此现象能够导致NEUT胞质内充满含组胺、趋化因子等的粗大分泌颗粒,当NEUT所在的局部组织受到炎症或过敏原刺激时,将以胞吐的方式释放大量颗粒内物质如溶酶体酶类,进一步加重周围组织及血管损伤[13]。CD177+作为糖基化磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白,主要表达于NEUT胞膜表面,能够与胞膜上蛋白酶结合,形成的复合体可使NEUT与血小板内皮细胞表面黏附分子-1结合,促进NEUT向外周循环系统组织及炎症部位迁移,从而加重炎症反应及其范围,造成循环损伤甚至衰竭[14]。由此可以看出,CD66b+、CD177+NEUT参与了AP疾病进展过程,二者在外周血中的过表达状态可能说明患者胰腺及周围组织损伤严重。

BISAP评分是目前临床针对AP患者研发的病情评估系统,该评价方法简单,所需指标不烦琐且易于获得,可对AP患者并发症、脏器衰竭、病死率等进行较为准确的评估[15]。本研究结果显示:CD66b+、CD177+NEUT与BISAP评分呈正相关,进一步提示CD66b+、CD177+NEUT表达可在一定程度上反映AP严重程度。本研究通过ROC曲线分析得出外周血CD66b+、CD177+NEUT及二者联合预测SAP的AUC分别为0.785、0.805、0.855,表示二者对AP患者病情严重程度的预测价值较高,二者在外周血的表达可考虑作为评估AP病情的临床指标。俞秋兴等人[16]研究发现采用流式细胞术检测脓毒症患者外周血中被CD66b+识别的NETs表达在诊断疾病中有重要临床价值。张艳婷等人[17]研究也表明,CD177+NEUT在肠炎患者外周血中表达明显增高,且与疾病活动程度密切相关,CD177+NEUT可能通过固有性免疫应答效应而参与肠黏膜炎症中的免疫调节,促使NEUT向周围组织内浸润,发挥免疫病理损伤作用。

综上所述,AP患者外周血CD66b+、CD177+NEUT表达随病情严重程度呈明显增高趋势,二者联合检测对患者疾病进展有较高的预测价值。