猪大肠杆菌病的诊断与防治

吕玉兰

（金安区农业综合行政执法大队 237000）

猪大肠杆菌病是一种高致病性的肠道传染病，多发于仔猪群体，以脱水、下痢、水样稀粪为典型发病症状，但是以上发病症状与其他病毒性疾病和寄生虫性疾病具有一定相似性。因此要想做最终确诊，需要对病猪组织样本或粪便进行进一步诊断与检测，才能做出最终确诊，进而给出针对性防控措施，以此降低大肠杆菌病的蔓延与扩散。

1 猪大肠杆菌病病原学

大肠杆菌属于大肠埃希氏菌属，该病菌首次发现于1885 年，属革兰氏阴性菌，病菌无苞芽，两头钝圆，且大部分大肠杆菌有鞭毛，其中产肠毒素大肠杆菌是猪只腹泻最常见的致病性菌株。该类菌株毒性主要由肠毒素和粘附素性菌毛而决定，在不同外在环境下，该类病菌致命程度有所不同，猪群一旦感染，将导致体细胞迅速增加，同时产生内毒素，进而引起猪只炎症，引发病猪腹泻、脏器衰竭或败血症等症状。同时，致病性大肠杆菌常规情况下为动物体共生细菌，可调节肠道内菌群，但如果宿主免疫系统低下，将导致大肠杆菌毒力明显增强，威胁猪群公共安全。

2 诊断

2.1 临床症状诊断

从临床症状上看，病猪一旦感染大肠杆菌病，其主要临床症状可以分为三种类型，分别是仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿，其中仔猪黄痢，主要临床症状为排稀粪，大便失禁，且病猪肛门、阴门处为红色或暗红色，这一症状多发于出生3～10 d 左右的仔猪，常伴有精神颓废，食欲不振，心率较快，呼吸急促等症状，在发病后期可能出现猪体消瘦、意志消沉、呼吸困难等病症，最终死亡。

仔猪白痢主要发生在刚出生10 d 左右的猪群，病猪粪便呈白色或乳白色，临床症状为突发性腹泻，颜色为黄色、黄绿色，有特殊腥味或臭味，疾病初发时，腹泻次数较少，之后随着病程的逐渐增加，腹泻次数最高可达到8～20 次/d，大便稀薄，有气泡，部分粪便黏着在肛门处，发出腥臭味。如果是成年猪患病，皮毛粗糙，无光泽，身体消瘦，食欲不振，精神欠佳，畏寒，在发病后期，心音较弱，口鼻干燥且卧地不起，最终因身体极度虚弱而死。

如果是猪水肿，其主要临床症状为病猪四肢不协调，精神萎靡，粪便颜色为青白色或青灰色，眼睑增厚，身体水肿明显，之后在发病中后期，病猪容易受到应激，即使在外界微弱的刺激下也会吓坏病猪，严重时猪除易受惊之外，面部也出现水肿，且站立不稳，转圈，或者出现结膜炎水肿，通常在几天内死亡。该类病症多发于体格健壮、生长速度较快的断乳仔猪，一般得过黄痢的仔猪不感染猪水肿[1]。

2.2 实验室诊断

通常情况下，对于猪大肠杆菌病，其实验室诊断和鉴定方法分为两种，分别是传统表型鉴定法，比如血清学鉴定、菌体形态学观察、菌落形态学观察等，其次是新型分子生物学鉴定法，利用核酸扩增技术和高通量测序技术，做出最后诊断。一般情况下，基层畜牧兽医单位仍然选择传统表型鉴定法，先将在无菌环境下收集到的病料在麦康凯平板培养基中进行分离培养，染色后完成镜检，该种方法操作简单且不需要特殊检测仪器，但是检测时间较长，需要一周左右，故该种方法在大面积、大规模病料检测中，使用效率较低，因此可以利用免疫血清学检测方法，基于抗原抗体特异性反应进行定量和定性检测。诊断步骤为：（1）无菌采集患病猪淋巴结、粪便等病料组织，37℃环境下培养10～15 h，对分离株进行PCR 扩增，95℃预变性5 min，57℃退火1 min；（2）PCR 反应条件为：72℃1 min 30 s，最后72℃延伸10 min，95℃预变性4 min，35 个循环，PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测，其中，10 PCR 扩增体系为：Premix Ex TaqTM DNA 聚合酶，25 μL，菌液2 μL，ddH2O 共21 μL，10 pmol/μL 上游引物F1 μL，10 pmol/μL 下游引物R1 μL，总计50 μL。（3）第一，单菌落挑取：把LB 培养基倒入排枪槽中，然后用排枪加400 μL LB 培养基到48 孔深孔板，用镊子拿已灭菌的小白枪头挑取平板上的单菌落并放到48 孔深孔板中，同时在48 孔深孔板和相应的表单上做好记录，注意对于蓝白斑筛选的板子要挑的是白斑。挑好的48 孔深孔板用封口膜盖好并做好相应标记（日期、板号等），用针头在封口膜打孔，把它放在37℃摇床上摇一个小时。第二，菌落PCR 反应：配置好PCR 反应的反应体系，把配好的反应液加到96 孔反应板中，用排枪加2.5 μL 的菌液到其中，注意在96 孔反应板上做好标记。把96 孔反应板放在PCR 仪器上盖好橡胶垫，按照PCR 反应条件设置反应程序，注意一定要把PCR 仪器的盖子盖紧。第三，琼脂糖凝胶电泳：一般先配置1.0%～1.2%琼脂糖凝胶（即称1.2 g 的琼脂糖加100 mL 的TAE），在96 孔反应板每个管中加0.5 μL 的溴酚蓝，震荡均匀，然后点样，电泳好的琼脂糖凝胶拍照，命名保存。第四，判断阳性克隆并测序：根据琼脂糖凝胶电泳图条带来判断阳性克隆，把阳性克隆的菌液进行扩大培养，进行测序验证，看看是否有完全正确的序列[2]。

3 猪大肠杆菌病的防治

3.1 猪大肠杆菌病预防

3.1.1 仔猪方面

从上文研究中，发现如果大肠杆菌病宿主免疫系统低下，将导致大肠杆菌毒力明显增强，最终导致疾病大规模暴发和流行，因此在今后工作中，养殖技术人员必须重视仔猪机体抗病性能的提高，不断提升机体免疫力，主要预防措施可体现在以下几个方面：（1）刚出生的仔猪必须在出生后2 h 内哺足初乳，以此获得被动免疫；（2）注重仔猪猪舍或保育舍的温湿度控制，始终遵循“小猪怕冷，大猪怕热，大猪小猪都怕湿”的原则，严格控制舍内温湿度，通常情况下，仔猪猪舍在寒冷季节，温度不能低于18℃，如果是刚出生2～3 周龄的仔猪，对温度要求更高，约维持在26℃即可，如果仔猪刚出生1 周龄以内，猪舍内部环境不能低于30℃，成年猪猪舍气温最高不能高于28℃，最低不能低于15℃，湿度始终维持在65%～80%左右即可。（3）强化仔猪营养补给，科学调配饲料配方，比如：对于断奶后仔猪，饲料配方可设置为：7%豆粕，10%麦麸皮，55%玉米，15%高粱粉，5%进口鱼粉，4%维生素添加剂，2%微量元素添加剂，0.5%食盐，1.5%骨粉，对于35 kg 以上的生长猪，可将配方设置为55%玉米，10%麦麸皮，5%进口鱼粉，6%豆粕，2%骨粉，0.7%食盐，1.3%氢氧化钠，5%高粱粉，5%维生素添加剂，10%进口鱼粉，以此补充仔猪和生长猪的蛋白质、维生素以及矿物质，从而提高机体抗病性。

3.1.2 母猪方面

大肠杆菌病的传播方式与途径多种多样，其中最常见的传播途径为母猪与仔猪接触传染[3]。比如，仔猪在出生之后，通过吃母乳来获得被动免疫，如果母猪在生产之前未能及时接种疫苗，可能导致仔猪机体能量低，抗病性差。其次，在母猪哺乳时，养殖技术人员不能对母猪乳房、乳头进行消毒，在仔猪吃母乳过程中，通过乳房、乳头传播病菌。因此，在今后工作中，要想最大化抑制仔猪感染大肠杆菌病，技术人员应该在母猪产前及时接种疫苗，同时控制饲料中蛋白质水平，适当增加青饲料喂养量，严禁饲喂发霉变质饲料，始终保持饲料营养供给的相对稳定性。其次，在母猪产仔后，每次哺乳之前需要利用0.1%高锰酸钾水溶液对母猪乳房和乳头进行消毒，通过擦洗，降低胸腹部病菌含量，之后逐个乳头挤掉几滴奶水，接着再让仔猪吃乳，以此最大化降低仔猪与大肠杆菌的接触几率，抑制仔猪出现大肠杆菌病。

3.1.3 环境方面

大肠杆菌病可以通过食槽、水槽直接接触传播，或者通过其他呼吸道及消化道途径感染致病菌，因此养殖技术人员要想最大化降低大肠杆菌病暴发率，必须把好环境关，对养殖场附近和猪舍内部经常消毒消杀，确保环境清洁。主要体现在以下几个方面：（1）对产房进行彻底冲洗与清扫，比如首先利用高压水枪冲洗地面产床，之后利用2%烧碱水进行地面消毒，同时将黏着在地面和栏杆上的粪便清除干净，等到清理完毕之后，利用福尔马林溶液和高锰酸钾溶液进行产房熏蒸，确保门窗环境密闭，保证产房封闭、不透气，在熏蒸5～8 h 后开窗通风，之后铺上干净垫草；（2）对保育舍和育肥猪舍，可将漂白粉配制成10%混悬液，对用具、地面和污水、粪便等进行消毒，现配现用，但是应该注意该种消毒方式具有较强腐蚀性，喷雾器使用后应立即清洗干净；也可以利用25%石灰乳，对栏舍、墙壁、顶棚进行消毒，可有效清除病原体、细菌和病毒，以此及时消灭大肠杆菌传染源。（3）人员进场时，利用1∶1000 新洁尔灭溶液浸泡洗手，对工作服、工作靴、利用福尔马林熏蒸20 min，利用3%氢氧化钠溶液对金属用具进行消毒。（4）打造物理隔离空间。如果猪群中出现大肠杆菌病，为避免同群健康猪感染，应该将脱水、腹泻严重猪单独隔离，一则可以切断传染源，二则避免脱水严重猪被同群猪踩踏。

3.1.4 免疫方面

养殖技术人员还应该加强猪群免疫，在母猪产前15 d 和40 d 接种大肠杆菌疫苗[4]。比如：肌肉注射仔猪大肠杆菌病基因工程灭活疫苗（GE-3 株），由辽宁益康生物股份有限公司生产，兽药字号060131112，或者注射仔猪大肠杆菌病K88+K99+987p 和产气荚膜梭菌病C 型2 联灭活疫苗，由国家集团动物保健股份有限公司生产，兽药字号170261126，严格按照疫苗使用说明书要求，控制注射时间、注射剂量以及注射方法，以此实现前置预防，降低后续猪群中出现大规模大肠杆菌病。

3.2 猪大肠杆菌病治疗

当仔猪或成年猪已经出现大肠杆菌病，养殖技术人员首先应该调整饲料配比，增加麦麸、麸糠等易消化饲料供给，降低蛋白质饲料供给，降低饲喂量，约为日常饲喂量的3/4 左右即可，保证病猪少食多饮水，水中加电解质，避免脱水。其次，利用中药治疗法和西药治疗法，给予针对性治疗。

3.2.1 中药治疗法

利用乌梅10 g、黄芩15 g、黄连12 g、葛根15 g、霍香10 g、厚朴15 g、陈皮20 g、生姜15 g、党参25 g、茯苓15 g、炒山药10 g、炙甘草20 g、麦芽15 g、神曲15 g，按照1∶1000 比例加入纯净水煮沸，30 min 之后，畏火10 min，弃渣取汤给猪灌服，每头猪灌服100 mL 左右，每日早晚2 次，连续服用7 d，可有效缓解病猪腹泻、脱水等症状。也可以利用混合型饲料添加剂低聚壳聚糖，每500 g 药剂拌料50 kg，保证每头猪每天喂药10 g 即可，据湖北农夫旺生物科技有限公司试验研究显示：将壳聚糖拌料之后5 d 可发现猪群采食量明显增加10%左右，可补充普通蛋白饲料营养缺陷，调节肠道机能，保障整体猪群生长均匀，增重快，提高饲料吸收与消化率，并降低粪便中氨气臭气，在使用7 d 之后，猪群皮肤发亮，健康活泼，呕吐、腹泻、精神萎靡症状基本消失，在使用30～40 d 左右，能够有效改善猪群体型，提高猪体瘦肉率，使得猪群收腹，臀大，背部增宽，生长速度加快，抗病性能更强，长期添加与其他猪群相比，可以尽早出栏，出栏时间可提前16 d 左右。

3.2.2 西药治疗法

养殖技术人员还可以利用西药抗生素治疗方法[5]。按照每次肌肉注射2～4 mg/kg 剂量，使用庆大霉素（由重庆方通动物药业有限公司生产，兽药字号230031506），每日1 次，连续使用3 d，同时按照15～25 mg/kg 体重口服硫酸新霉素（由绿康生化股份有限公司生产，兽药字号130011519），每日早晚各1 次，连续服用3～5 d；或者取头孢氨苄注射液（由哈尔滨银山科技畜牧有限责任公司生产，兽药字号080206634），每日1次，注射10 mL，结合磺胺脒0.5 g（由黑龙江齐泰动物保健品有限公司生产，兽药字号080602705），将二者研制成粉末，按照5～10 mg/kg 体重给病猪拌料喂服，每日早晚各1 次，连续使用5～7 d，均可起到良好效果，能有效调解病猪肠道内菌群平衡，防止仔猪持续性脱水、下痢等问题。对于部分病重猪可以利用10%葡萄糖溶液补液，在焦巢穴采取激光治疗，可有效抑制仔猪黄痢、仔猪白痢和猪水肿等症状。

4 结语

综上所述，当前在生猪产业发展过程中，大肠杆菌病俨然成为关键性制约因素，不仅影响生猪安全生产，同时威胁人类生命健康。为稳定生猪市场，降低因大肠杆菌病而引起的生猪死亡发生数量，维护畜禽养殖业经济秩序，养殖场（户）应该在基层畜牧兽医人员和相关部门指导下，做好疫病防控，根据畜禽具体养殖情况，给予合适饲料，选择科学疫病防控体制机制，将中西医治疗方法相结合，以此提高机体抗病性，降低猪群大肠杆菌病感染几率。