益气活血软坚解毒方对荷瘤小鼠抑瘤作用及对生存期影响研究*

李东涛，吴志奎，吕新霞，陈玉英，裴迎霞，祁 鑫，孙桂芝

（1.济南军区青岛第一疗养院中医科，青岛 266071；2.中国中医科学院广安门医院肿瘤科，北京 100053）

益气活血软坚解毒方对荷瘤小鼠抑瘤作用及对生存期影响研究*

李东涛1，吴志奎2，吕新霞2，陈玉英2，裴迎霞2，祁 鑫2，孙桂芝2

（1.济南军区青岛第一疗养院中医科，青岛 266071；2.中国中医科学院广安门医院肿瘤科，北京 100053）

［目的］研究益气活血软坚解毒（YHRJ）方对荷瘤小鼠生存期的影响。［方法］抑瘤作用观察：荷S180腹水瘤昆明鼠、荷H22昆明鼠与615小鼠，造模后随机分成对照组、CTX（环磷酰胺）组、YHRJ等效剂量组、YHRJ高剂量组、YHRJ等效剂量组+CTX或顺铂（DDP）组、YHRJ高剂量组+CTX（或DDP）组，第2天开始用药，于第13天拉颈处死动物，取出瘤组织，称质量。生存期观察：荷H22昆明鼠，截尾期为对照组出现第1只动物死亡为止，记录小鼠存活时间。［结果］1）对荷S180昆明鼠：各用药组肿瘤明显缩小，YHRJ高剂量抑制率为64.22%，与生理盐水及YHRJ等效剂量组相比，差异显著；YHRJ高剂量+CTX组抑制率为80.10%，高于YHRJ等效剂量组及CTX组。2）对荷H22昆明鼠：除YHRJ等效剂量组外，其余各组抑瘤率均超过30%，抑瘤作用明显（P<0.05），YHRJ高剂量组抑瘤率为51.36%。优于其他各组。3）对荷H22615小鼠肿瘤：YHRJ等效剂量抑瘤率为47.15%，YHRJ高剂量+DDP组抑瘤率为80.60%，说明中药对DDP有增效作用。4）对荷H22昆明鼠生存率影响：YHRJ高剂量组及各加DDP组荷瘤小鼠生存期及中位生存天数明显延长，生存率明显提高有统计学意义。［结论］益气活血软坚解毒方对小鼠S180腹水瘤、H22肝细胞癌肿瘤生长有抑制作用，并明显延长荷H22昆明鼠生存期。

益气活血软坚解毒方；肝癌；抑瘤率；生存期；实验研究

肝癌的治疗历来是中医学研究的重点与难点。孙桂芝教授经过数十年的潜心研究，根据传统中医理论，从中医整体观出发，针对肝癌的病因病机拟订了益气活血软坚解毒(抗癌)方，注重调动机体的抗病能力，调理气血，培补脏器，协同化疗，增效减毒，长期服用，有稳定瘤体及减少肿瘤转移和复发作用。为了深入研究其作用机制，本课题从体内抑瘤实验及对生存期影响两个方面研究其作用效果。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明鼠120只，雄性，体质量（20±1）g，二级动物，购自中国医学科学院实验动物研究所。615小鼠 60 只，雄性，体质量（18±2）g，购自中国药物及生制品检定所，清洁级。

1.2 瘤株 小鼠S180腹水瘤株与H22肝癌瘤株，由广安门医院肿瘤实验室提供。

1.3 药物 益气活血软坚解毒（YHRJ）方水煎剂：组方为生黄芪、炒白术、三七、水红花子、藤梨根、凌霄花、炮山甲、白花蛇舌草等，常规水提取，生药浓度3.4 kg/L，4℃保存备用。

阳性对照药环磷酰胺（CTX）：南通精华制药有限公司产品，用生理盐水配成4 g/L的溶液，遮光保存。

阳性对照药顺铂（DDP）：山东齐鲁制药厂产品，用生理盐水配成0.1 g/L的溶液，遮光保存。

1.4 动物模型制备 S180腹水瘤：取生长状态良好接种第7天的荷S180腹水瘤源小鼠，拉颈处死，在严格无菌条件下吸出腹水，生理盐水洗涤，配成1×1010个/L单细胞悬液，在每只昆明鼠右腋部皮下接种0.2mL。H22肝癌：取生长状态良好接种第7天的荷H22肝癌源小鼠，拉颈处死，在严格无菌条件下取出瘤组织，除去血块及坏死组织，用机械剪碎法做成1×1010/L单细胞悬液，在每只昆明鼠或615小鼠右腋部皮下接种0.2mL。

1.5 分组及用药 对荷S180昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察分组及用药方法：造模后随机分成6组，每组10只。1）对照组：每日灌服生理盐水0.2mL。2）CTX组：按照80mg/kg剂量给小鼠腹腔注射，分2次，1周用完，以下各加用CTX者用法与此同。3）YHRJ等效剂量组（29.67 g/k g，约为人用量的10倍剂量）。4）YHRJ高剂量组（约为人用量的20倍剂量）。5）YHRJ等效剂量组+CTX组。6）YHRJ高剂量组+CTX组。

对荷H22昆明鼠与615小鼠肿瘤生长抑制作用观察分组与用药方法：造模后随机分成6组，每组10 只。1）对照组：每日灌服生理盐水 0.2mL。2）DDP组：按照lmg/kg剂量给小鼠腹腔注射0.2mLDDP，1 次/d，连用7 d。3）YHRJ等效剂量组（29.67 g/k g，约为人用量的10倍剂量）。4）YHRJ高剂量组（人用量的20倍剂量）。5）YHRJ等效剂量组+DDP组。6）YHRJ高剂量组+DDP组。

对生存期影响分组与用药方法：与荷H22昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察同。

1.6 实验周期 抑瘤率观察：造模第2天开始用药，于第13天拉颈处死动物，取出瘤组织，称质量。

生存期观察：造模第2天开始用药，模型组和YHRJ组给药直至对照组出现第一只动物死亡为止。记录小鼠存活时间，计算各组平均生存时间和中位生存时间，按下列公式计算生命延长率：生命延长率=（治疗组平均生存天数-模型组平均生存天数）/模型组平均生存天数×100%

1.7 统计方法 抑瘤率统计用SPSS10.0软件对不同组别的数据进行多组之间比较方差分析。生存期统计用SPSS10.0进行Kaplan-Meier生存分析。

2 结果

2.1 益气活血软坚解毒方对荷S180昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察 见表1。

表1 益气活血软坚解毒方对荷S180昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察(±s)Tab.1 Inhibitory effecton tumor grow th in S180-bearingm ice(S180)(±s)

表1 益气活血软坚解毒方对荷S180昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察(±s)Tab.1 Inhibitory effecton tumor grow th in S180-bearingm ice(S180)(±s)

注：与生理盐水组比较，*P<0.001;与YHRJ等效剂量组比较，▲P<0.05，#P<0.001。

组别生理盐水组YHRJ等效剂量组YHRJ高剂量组YHRJ等效剂量+CTX组YHRJ高剂量+CTX组CTX组n 抑瘤率(%)42.31 64.22 79.82 80.10 71.75 10 10 10 10 10 10瘤质量（g）2.421±0.923 1.397±0.457*0.865±0.542*▲0.489±0.185*#0.482±0.186*#0.682±0.294*▲

结果显示，与生理盐水组比较，各用药组肿瘤明显缩小，YHRJ高剂量抑制率为64.22%，与生理盐水及YHRJ等效剂量组相比，差异显著YHRJ高剂量+CTX组抑制率为80.10%，高于YHRJ等效剂量组及CTX组。说明益气活血软坚解毒方有抑制荷S180昆明鼠肿瘤生长作用。

2.2 益气活血软坚解毒方对荷H22昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察 见表2。

表2 益气活血软坚解毒方对荷H22昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察(±s)Tab.2 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22)(±s)

表2 益气活血软坚解毒方对荷H22昆明鼠肿瘤生长抑制作用观察(±s)Tab.2 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22)(±s)

注：与对照组比较，*P＜0.05；＃P＜0.01。

组别生理盐水组YHRJ等效剂量组YHRJ等效剂量组+DDP组YHRJ高剂量组YHRJ高剂量组+DDP组DDP组n 抑瘤率(%)13.83 34.34 51.36 38.19 41.86 10 10 10 10 10 10瘤质量（g）1.063±0.394 0.916±0.442 0.698±0.371*0.571±0.340#0.724±0.393*0.685±0.375*

结果显示，除YHRJ等效剂量组外，其余各组抑瘤率均超过30%，抑瘤作用明显，差显显著（P<0.05），YHRJ高剂量组抑瘤率为51.36%，优于其他各组。说明益气活血软坚解毒中药有抑制荷H22昆明鼠肿瘤生长抑制作用。

2.3 益气活血软坚解毒方对荷H22615小鼠肿瘤生长抑制作用观察 见表3。

表3 益气活血软坚解毒方对荷H22 615小鼠肿瘤生长抑制作用观察(±s)Tab.3 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22615)(±s)

表3 益气活血软坚解毒方对荷H22 615小鼠肿瘤生长抑制作用观察(±s)Tab.3 Inhibitory effecton tumor grow th in H22-bearingm ice(H22615)(±s)

注：与对照组比较，*P<0.001。

组别NS组YHRJ等效剂量组YHRJ等效剂量组+DDP组YHRJ高剂量组YHRJ高剂量组+DDP组DDP组n 抑瘤率(%)42.31 64.22 79.82 80.10 71.75 10 10 10 10 10 10瘤质量（g）1.035±0.221 0.547±0.311*0.355±0.250*▲0.596±0.235*#0.237±0.206*#0.413±0.202*▲

结果显示：与对照组比较，各用药组均有明显抑制肿瘤生长作用，差异显著（P<0.001），YHRJ等效剂量抑瘤率为47.15%，YHRJ高剂量+DDP组抑瘤率80.60%，说明中药对DDP有增效作用。

2.4 益气活血软坚解毒方对荷H22昆明鼠生存期影响 见表4。结果显示，与对照组相比，YHRJ高剂量组与各加DDP组荷瘤小鼠生存期及中位生存天数明显延长，生存率明显提高，以YHRJ高剂量+DDP组效果最为明显，经统计分析具有显著差异。

3 讨论

中药复方研究是中药药理研究的难点。但中药复方的整体协同作用优势又是单体所无法替代的。孙桂芝教授临床常用益气活血软坚解毒方为主治疗肝癌，药物组成主要有黄芪、白术、三七、水红花子、炮山甲、藤梨根、白花蛇舌草等。其中黄芪、白术健脾益气。黄芪多糖促进免疫细胞数量增长活性增强的药理作用已为众多研究实验所证实[1]。白术可提高巨噬细胞的活性，调节淋巴细胞增殖功能，增强人体非特异性免疫功能,抑制癌细胞的生长，促进胃肠运动等作用[2-3]。田三七、水红花子、炮山甲活血软坚能降低血液黏度与止痛，对肝癌患者伴有的肝硬化也有较好调理作用[4-7]。藤梨根、白花舌蛇草解毒抗癌[8]。白花蛇舌草体外诱导人肝癌HEPG2细胞凋亡的作用[9]。通过实验证明，以上述药物组成的益气活血软坚解毒方对小鼠S180腹水瘤、H22肝细胞癌肿瘤生长有一定的抑制作用，与化疗结合有增效作用，并具有明显延长荷H22昆明鼠生存期作用。从实验数据看，虽然中药杀灭肿瘤的效力不及化疗药物，但其多靶点的综合作用，保证了药物长时间的持续发挥效力，延长带瘤生存时间，改善了生存质量。从而证实了益气活血软坚解毒法在肝癌治疗中的正确性与肝癌治疗中坚持综合治疗的价值所在。

表4 益气活血软坚解毒方对荷H22昆明鼠生存率影响观察Tab.4 Observation on the influence on survivalperiod

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Effectof YiqiHuoxue Ruanjian and Jiedu prescriptionson inhibition of tumor grow th and survivalperiod in tumor-bearingm ice

LIDong-tao1,Wu Zhi-kui1,LV Xin-xia2,etal
（1.Departmentof TraditionalChineseMedicine， Qingdao FirstSanatorium of Jinan Military Region， Qingdao 266071， China；2.Guanganmen HospitalofChinese Science Academy of TCM，Beijing100053 ，China）

[Objective]To study the inhibitory effecton growth of tumorand observe the influence on survivalperiod by using the decoction of YiqiHuoxue Ruanjian Jiedu(YHRJdecoction)in treating the transplanted carcinoma(S180and H22)inmice.[Methods]Themice transplanted with carcinoma(S180or H22)were random ly divided into six groups,including NScontrolgroup,CTX or DDPgroup,YHRJequivalent-dose group,YHRJhigh-dose group,YHRJequivalent-dose plus CTX(orDDP)group,YHRJhigh-dose plus CTX(or DDP)group.All themice in each group were administered from second day,and killed on the thirteenth day.At the same time the carcinomawas cut down and weighed.Observation of the survival time on KunmingMicewhich was transplanted with H22 carcinomawasended tillany one mice died in controlgroup.[Results]In the kunmingmodelmice(S180)theweightofcarcinoma in allmedication groupswas lower comparedwith NScontrolgroup.The inhibition rateof YHRJhigh-dosegroupwas64.22%,and therewasa significantdifferencewhen comparingwith NScontrolgroup and YHRJequivalent-dose group.The inhibition rate of YHRJhigh-dose plus CTX group was80.10%,better than YHRJequivalent-dose group and CTX(or DDP)group.In kunmingmodelmice(H22)the inhibition rate in allmedications groups washigher than 30%except for YHRJequivalent-dose group.The inhibition rate of YHRJhigh-dose group was 51.36%,whichwashigher than othergroups.In themodelmice(H22615)the inhibition rate of YHRJequivalent-dose group was 47.15%and thatof YHRJhighdose plusDDPgroup was80.60%.It indicated thatChinese herb could reinforce the curative effect.Observation of the influence on survivalperiod showed that the survival time and themean survival time in YHRJhigh-dose group and the groups added by DDPwere prolonged.The survival ratewasenhanced.[Conclusion]Itwasproved that the YHRJdecoction could inhibit the growth of transplanted carcinoma(S180orH22)inmice,and could prolong the survival time ofkunmingmodelmice.

YHRJdecoction;hepatocellular;carcinoma;survival time;experimental research

R285.5

A

1672-1519(2010)02-0141-03

国家科技计划资助项目（C03050402）。

李东涛（1966－），男，博士后，副主任医师，主要研究方向为中医肿瘤临床与基础。

2009-11-13）