内蒙古野生银白离褶伞子实体组织分离试验

冯晓宇，邹 莉，王志英，臧丹丹

（东北林业大学林学院，黑龙江 哈尔滨 150040）

银白离褶伞Lyophyllum connatum(Schum.:Fr.)Sing.又叫做合生杯伞、真姬菇 （日本）、从生杯伞。同物异名：Clitocybe connata(Schum.:Fr.)Gill.隶属伞菌目Agaricales、白蘑科Tricholomataceae、离褶伞属Lyophyllum。银白离褶伞子实体一般较小或中等大小，呈石膏样白色。菌盖直径3 cm~8 cm，扁平球形至近平展，中部稍突或平，表面白色，后期近灰白色，近边缘有皱条纹。菌肉白色。菌褶后期似带粉黄色，直生又延生，稠密，不等长。菌柄细长，白色，下部弯曲，常有许多柄丛生一起，内部实心至松软[1]。可食用，有特殊的香气味[1]。

1 材料和方法

1.1 供试种菇

从内蒙古图里河地区采集的野生银白离褶伞，选择朵型正常，无病害、虫孔、破损的子实体作为供试种菇。

1.2 培养基配方

马铃薯葡萄糖琼脂 （PDA）培养基：去皮马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂15 g~20 g，水1 000 mL，自然pH。121℃高压蒸气灭菌20 min。

1.3 试验方法

1.3.1 孢子印观察

选取形状规则八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的滤纸吸干表面水分。在无菌室内，把种菇菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。静置12 h~20 h，菌褶上孢子就会散落在培养皿内，形成孢子印。

1.3.2 菌丝体形态观察

在载玻片上滴加1滴蒸馏水，用解剖针从生长有银白离褶伞的PDA平板中挑取少量菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。盖上盖玻片，勿产生气泡，且不要移动盖玻片。先用低倍镜，再转换高倍镜镜检并记录观察结果。

1.3.3 子实体的组织分离

在超净工作台上，将子实体用75%的医用酒精擦拭表面2遍~3遍；先用解剖刀沿银白离褶伞纵向轻轻划开小口，再用手掰开；切取菌盖处、菌褶和菌柄交界处、菌柄处的组织块，分别接种于PDA培养基平板上。每皿接4块子实体，设置4组重复，置于25℃恒温无光培养。每隔1 d观察并记录菌丝生长情况。

1.3.4 新鲜子实体与阴干3 d子实体的对比分离

组织分离法分别分离新鲜的子实体和经过阴干3 d后的子实体，各接4块子实体于PDA平板上，设置4组重复，置于25℃无光条件下恒温培养。每隔1 d观察并记录菌丝生长情况。

1.3.5 污染率

每隔1 d观察菌丝体的生长情况，对发生污染的培养皿及时进行转皿培养，并做好记录。

2 结果与分析

2.1 孢子印的观察

观察到的孢子印与菌褶排列一致，孢子印白色，粉末状或放射状。

2.2 菌丝体形态的观察

经过24 h培养后，可见组织块上面长出放射状的菌丝，再经过1 d菌丝开始蔓延到平板培养基上。大约25 d～30 d菌丝可长满整个培养皿，结果见图1、图2。

图1 菌丝体形态

图2 菌丝体显微结构

从图1可以看出菌丝洁白、粗壮、颜色一致；菌落呈规则圆形、边缘整齐；无菌丝分泌物，并且具特殊的香味。从图2可以看出，显微镜下的菌丝较纤细，粗细均匀，菌丝细胞呈狭长状。

2.3 子实体不同分离部位的菌丝生长对比

子实体不同分离部位的菌丝生长对比情况见表1。

表1 子实体不同部位分离结果

从表1可以看出，菌褶和菌柄交界处的组织块为最佳组织培养部位，萌发快，菌丝生长速度快，菌丝洁白细密。菌盖处和菌柄处次之。

2.4 菌丝体污染率

新鲜子实体的菌丝体污染情况见表2。

从表2可以看出，新鲜子实体的菌丝体，菌盖处的平均污染率为31.25%，菌褶和菌柄交界处的平均污染率为18.75%，菌柄处的平均污染率为31.25%。可见，菌褶和菌柄交界处的污染率最低，菌柄处和菌盖处的污染率相同，均较高。阴干3 d子实体的菌丝体污染情况见表3。

从表3可以看出，经阴干3 d后的子实体生长的菌丝体，菌盖处的平均污染率为25.00%，菌褶和菌柄交界处的平均污染率为12.50%，菌柄处的平均污染率为18.75%。可见菌褶和菌柄交界处的污染率最低，菌柄处略高，菌盖处的污染率最高。

3 结论

内蒙古野生银白离褶伞子实体各部位经组织分离均能萌发，菌褶和菌柄交界处菌丝生长势相对最旺且菌丝生长最快，污染率相对最低，为最佳组织分离部位；新鲜子实体的分离污染率相较于阴干3 d后的子实体分离污染率高，选择阴干子实体的组织进行分离，可得更高的分离率。

表2 新鲜子实体的菌丝体污染率

表3 阴干3 d子实体的菌丝体污染率

目前世界有记录的离褶伞属有200余种，其中许多种既是美味的可食菌类，又是很好的药用真菌，还有抑制癌细胞的效果[2]。但国内外研究最多的是荷叶离褶伞，墨染离褶伞和榆生离褶伞也有研究[2]。

银白离褶伞作为一种待开发的珍稀野生食用菌，其生物学特性、遗传育种、驯化栽培研究以及营养和药用价值等在国内外均未见报道，本文首次对银白离褶伞进行生物学特性研究，对其进行的试验可为其价值和栽培的继续研究提供支持和参考，以便于将来深入研究和开发利用这一珍贵的种质资源。

[1]卯晓岚.中国大型真菌[M].河南：河南科学技术出版社，2000.

[2]李永红，柴红梅，李树红，等.离褶伞研究进展[J].中国食用菌，2008， 27(2)： 10－12.