高效液相色谱法测定金蚧片中马钱苷含量

(广东省云浮市药品检验所，广东 云浮 527300)

金蚧片由人金樱子、蛤蚧、淫羊藿、韭菜子、山茱萸等5味中药制成，具有补肾壮阳、固精的功效，用于肾阳虚引起的性欲减退、阳痿、遗精、早泄、夜尿、小便余沥、白带过多、腰膝酸软[1]。由于原标准中无马钱苷含量测定项，为有效控制制剂质量，笔者采用高效液相色谱法测定山茱萸中马钱苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Shimadzu LC－10ATVP型高效液相色谱仪。马钱苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111604－200604);样品1(吉林大峻药业股份有限公司，批号为20091201);样品2(吉林大峻药业股份有限公司，批号为20100302);样品3(山西天星制药有限公司，批号为091208);乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈－ 水(15 ∶85);检测波长:236 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:40 ℃;进样量:10 μL。理论板数按马钱苷峰计达4 000以上。

2.2 溶液制备

精密称取马钱苷对照品适量，置量瓶中，用50%甲醇溶解并制成每1 mL含40 μg的溶液，即得对照品溶液。取样品20片，除去糖衣，称定总质量，研细，混匀，精密称取0.4 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇100 mL，密塞，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过;精密量取续滤液 10 mL，加在中性氧化铝柱(100～200 目，4 g，内径 1 cm)上，用40%甲醇50 mL洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，转移至10 mL量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例及工艺制备不含山茱萸的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，未出现与马钱苷对照品保留时间相同的色谱峰，表明阴性样品对测定无干扰(图 1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取质量浓度为40 μg/mL的对照品溶液 1，2，5，8，15，25 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积(Y)为纵坐标、马钱苷对照品进样量(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=75.307 X+0.123 2，r=0.999 9(n=6)。结果表明，马钱苷进样量在 0.04 ～1.00 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，记录色谱图，计算峰面积。结果的 RSD=0.35%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一批供试品溶液，分别在0，1，2，4，8，18，24 h时测定。结果峰面积的 RSD为0.7%(n=7)，表明待测溶液至少在24 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品6份，依法测定。结果的 RSD为0.56%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入马钱苷对照品适量，依法测定其含量，计算加样回收率。结果见表1。

表1 马钱苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算。结果批号为20091201，20100302，091208 的 3 批样品中，马钱苷的含量分别为 1.62，1.75，1.92 mg/片。

3 讨论

笔者考察了甲醇、70%乙醇溶液、50%甲醇溶液3种提取溶剂和乙腈－水(15∶85)、乙腈－0.05%磷酸溶液(9∶91)两种流动相，结果以50%甲醇溶液为提取溶剂，乙腈－水(15∶85)为流动相的效果较好，色谱分离、线性关系、重现性及回收率均符合要求，可用于金蚧片中马钱苷的质量控制。

[1]WS3－B－2724－97，卫生部药品标准·中药成方制剂(第十四册)[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:20.