nm23-H1蛋白在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中的表达及临床意义

孟亚丽 张霞 郑燕 王立芹 朱振龙 张红真

肿瘤转移抑制基因(nm23)的低表达或突变与肿瘤转移作用日益受到重视，被认为在肿瘤转移过程中起到负性作用［1］，研究表明转移抑制基因nm23-H1蛋白的低表达与多种肿瘤的转移和不良预后有关［1］，但研究nm23-H1蛋白在不同宫颈组织中的表达情况，国内报道较少，本文对nm23-H1蛋白在不同宫颈组织表达及临床意义进行研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2005年10月至2008年10月各项临床资料完整的宫颈鳞癌蜡块60例，试验组患者年龄26～73岁，平均年龄(46±10)岁;术前均未进行放、化疗。根据国际妇产科联盟(FIGO)2000年的标准对宫颈鳞癌进行临床分期，Ⅰ期19例，Ⅱ期36例;Ⅲ期5例;组织学分级:高分化鳞癌12例，中分化鳞癌38例，低分化鳞癌10例;其中伴淋巴结转移14例，无淋巴结转移46例。另取同期病理科存档的宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ及CINⅢ标本各20例和正常宫颈鳞状上皮标本20例(对照组)。

1.2 试剂与方法 石蜡包埋组织做5 μm连续切片，常规HE染色和免疫组化SP法染色。鼠抗人nm23-H1抗体及SP试剂盒(即用型)购自北京中杉金桥公司，以已知阳性切片作阳性对照，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。严格按SP试剂盒说明书操作，二氨基联苯胺(DAB)显色。

1.3 结果判断 nm23-H1蛋白阳性染色为肿瘤细胞质内出现明显棕黄色细颗粒。每例随机选出10个不重复、不重叠的高倍镜视野(10×40)，计数阳性细胞数及所有细胞数，计算阳性细胞率=∑阳性细胞数/∑细胞数×100%。根据阳性细胞率进行分级，PINCH和nm23-H1阳性细胞率≤10%为阴性，阳性细胞率＞10%为阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验及线性趋势χ2检验，率的多重比较采用Bonfferoni校正检验水准法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 nm23-H1蛋白在不同宫颈组织中的表达 随癌组织病变程度的升高nm23-H1蛋白阳性率有降低的趋势。宫颈鳞癌与正常宫颈组织、CINⅠ和CINⅡ比较差异有统计学意义(P＜0.05);与CINⅢ比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1 nm23-H1蛋白在不同宫颈组织中的表达

2.2 nm23-H1蛋白的表达与宫颈鳞癌患者病理因素的关系

nm23-H1蛋白的表达与患者的淋巴结转移及国际妇产科协会(FIGO)分期有关(P＜0.05)。有淋巴结转移组中，nm23-H1蛋白的阳性表达率低于无淋巴结转移组。随着FIGO分期的升高nm23-H1蛋白的阳性表达率逐渐降低(P＜0.05)。nm23-H1蛋白的表达与患者年龄、肿瘤的组织病理分级及肿瘤大小无关(P＞0.05)。见表2。

3 讨论

子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，过早性生活、性生活紊乱、HPV感染等因素导致宫颈癌发病逐渐趋于年轻化，且发病率有逐年上升的趋势，严重威胁着广大女性的生命及健康。如何早期将具有潜在转移危险的患者筛选出来，给予积极治疗，是目前急需解决的问题之一。nm23基因是从鼠的黑色素瘤细胞中分离出来的一种与恶性肿瘤转移有关的基因，nm23基因对肿瘤转移的调控机制一直在进一步研究，但其在肿瘤转移抑制中发挥着重要作用，已为多数学者肯定［2，3］。人类nm23基因组中有两个基因，为nm23-H1、nm23-H2。目前普遍认为nm23-H1与肿瘤发生发展、转移关系密切［4］。nm23-H1是一种肿瘤转移抑制基因，nm23-H1编码核苷二磷酸激酶NDPK，其基因的蛋白产物酶参与体内三磷酸核苷的生成，在细胞分化中参与微管的集合以及 G蛋白介导的信号传递过程，使肌球蛋白轻链磷酸化而抑制细胞迁移，诱导凋亡，抑制分化，影响细胞的活动、粘连和附着，从而抑制细胞的侵袭和转移［5］。nm23-H1等位基因的突变、缺失、低表达与多种恶性肿瘤发生转移的潜能密切相关［6］。本研究显示nm23-H1蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率明显低于对照组(P＜0.05)和CINⅠ及CINⅡ的阳性表达率80.0%(16/20)，但与CINⅢ比较差异无统计学意义(P＞0.05)，与路平等［7］的研究一致，同时还发现在宫颈鳞癌中，临床分期越晚，nm23-H1表达越低，在有淋巴结转移宫颈癌组织中，nm23-H1的阳性表达率显著低于无淋巴结转移的组织，与王孝忠等［8，9］的研究一致。提示nm23-H1蛋白的表达与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关，表达降低预示预后不良。

表2 宫颈癌患者nm-23蛋白的表达与其临床病理特征的关系例(%)

1 Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor repressive potential J Natl Cancer Inst，1988，80: 200-204.

2 Liu SJ，Sun YM，Tian DF，et al.Downregulated NM23-H1 expression is associated with intracranial invasion of nasopharyngeal carcinoma.Br J Cancer，2008，98:363-369.

3 孙宇，黄关宏，王忠明.nm23基因抑制肿瘤转移的机制及其与子宫颈癌的研究进展.蚌埠医学院学报，2010，35:1318-1320.

4 郭亮，张敏，高洁凡.转移相关基因蛋白CD44v6和nm23在宫颈病变中的表达及意义.河北医药，2009，31:911-913.

5 范波，姚珍薇.宫颈癌中EphA2，nm23-H1蛋白的表达与淋巴结转移的相关性研究.中华妇幼临床医学杂志，2008，4:15-18.

6 王从玉，邓跃华，刘弋，等.nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义.中国肿瘤临床，2008，35:1117-1120.

7 路平，梁秋冬，李小瑞.不同宫颈组织中nm23-H1表达.中国误诊学杂志，2002，2:991-992.

8 王孝忠，刘福元，沈宏伟.nm23-H1在宫颈癌中的表达及其临床意义.中国妇幼健康研究，2007，18:493-495.

9 郭昕.PCNA和nm23在宫颈癌中的表达及其临床意义.临床医药实践杂志，2008，1:373-375.