厚朴有效成分最优提取方案的建立

杨杰

厚朴为木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮。文献报道，主要化学成分厚朴酚与和厚朴酚中枢松弛和光谱抗菌作用［1］。本实验运用反相高效液相色谱法测定厚朴提取液中厚朴酚与和厚朴酚的含量［1］，为最大程度提取厚朴中的有效成分提供了实验依据。

1 实验材料与方法

1.1 仪器与药品 1100型高效液相色谱仪(美国Agilent);紫外检测器;电子天平(上海方瑞仪器有限公司);JP300G型超声提取仪(武汉嘉鹏电子有限公司)。厚朴酚(对照品，中国药品生物制品检定所，批号:0729-200107)、和厚朴酚(对照品，中国药品生物制品检定所，批号:0730-9204)，甲醇(色谱纯，天津市西华特种试剂厂)。

1.2 实验方法

1.2.1 提取条件:①提取溶剂:取同一批号样品4.0 g，分别用超声提取和热浸回流法提取相同的时间，提取液用高效液相色谱法测定峰面积。分别用纯水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇和100%甲醇用最佳提取方式提取相同时间，提取液用液相法测定峰面积，确定出最佳提取溶剂浓度。②提取时间:取同一批号样品4.0 g，用最佳提取方式和最佳提取溶剂分别提取30、40、50、60 min，提取液用液相法测定峰面积，确定出最佳提取时间。

1.2.2 线性关系:精密称取对照品厚朴酚及和厚朴酚各4.8、4.0 mg，分别置10 m l量瓶中，甲醇溶解并补至刻度线混匀，分别吸取此溶液 0.125、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 ml置10 ml量瓶中，甲醇溶解并补至刻度线混匀，分别精密吸取原液及稀释液各10μl，用液相法测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，进行回归。

1.2.3 精密度:精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液(浓度分别为35.84、34.36μg/m l)10.0μl，重复进样6次，按上述色谱条件测定厚朴酚、和厚朴酚峰面积。厚朴酚RSD=1.34%，和厚朴酚RSD=1.24%。

1.2.4 稳定性:精密称取同一批号下的样品4.0 g，置50 ml容量瓶中，加入甲醇，超声处理50 min，放冷，定容，摇匀，过滤，即得。每隔2 h进样1次。

1.2.5 回收率:取同一批样品6份，分为2组，按高、低2种剂量，分别加入50 ml不同浓度的厚朴酚及和厚朴酚对照品甲醇溶液，按照样本制备方法制备待测液，测定并计算回收率。

2 结果

2.1 提取条件的选择 最佳提取方式为超声提取，溶剂为100%甲醇，时间50 min。

2.2 线性关系 厚朴酚:回归方程为Y=8 109.6X+16 033，r=0.9998，和厚朴酚:Y=9412.1X-11 900，r=0.9990。厚朴酚在6.000～480μg/ml，和厚朴酚在5.00～400μg/ml与峰面积呈良好线性关系。

2.3 精密度和稳定性 厚朴酚RSD=1.34%，和厚朴酚RSD=1.24%，精密度较好，方法可行。和厚朴酚与厚朴酚峰面积RSD分别为1.45%和1.06%，表明提取物测定液中厚朴酚、和厚朴酚在12 h内稳定，重复性好。

2.4 加样回收率 厚朴酚平均回收率为100.2%，RSD=1.93%(n=6);和厚朴酚平均回收率为98.8%，RSD=1.87%(n=6)。见表1。

表1 回收率实验测得结果 n=6

3 讨论

本文采用高效液相色谱法，对提取厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的提取条件作了筛选，分别考察精密度、重现性、稳定性和加样回收率，得到了较好的结果，证明此法能最大程度提取厚朴中有效成分。

1 胡旭佳，郭毅新，何红.HPLC测定顺气胃康胶囊中和厚朴酚与厚朴酚的含量.中国中药杂志，2002，27:467-469.