药对黄连、吴茱萸对高血压大鼠血压和血浆ET、CGRP的影响

卜宪峥，吴华芹，胡元会，褚瑜光，宋庆桥，王师菡

高血压病是一种以体循环动脉压升高为主要临床表现的全身慢性疾病，其发病率、致残率及致死率均居高不下，严重危害人类健康和生活质量，积极探索高血压的发病机制，寻求有效的治疗方法是医学界亟待解决的难题之一。本实验观察药对黄连、吴茱萸对自发性高血压大鼠（SHR）血压及血浆内皮素（endothelin，ET）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene－related peptide，CGRP）含量的影响，为中医药治疗高血压提供新思路。

1 材料与方法

1.1 动物 13周SHR，清洁Ⅱ级，24只，雌雄各半，正常 WKY大鼠8只，雌雄各半，体重280g±30g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供。

1.2 药物及试剂 黄连，选用毛茛科多年生草本川黄连的根茎，吴茱萸，选自芸香科植物吴茱萸的将近成熟果实。两味生药经鉴定均为正品，处方剂量为28g（大鼠用量为人的9倍），两药分按3∶1组成为连萸药对组，硝苯地平片，每片10mg（北京益民药业，批号：0501010）。ET、CGRP放免药盒（北京华英生物技术研究所提供，批号：061202）。

1.3 仪器 BP－6动物无创血压测试系统、BL－820通用8道生物机能实验系统（均为成都泰盟科技有限公司）。SIGMA－3K15离心机（法国SIGMA）。GC－911－γ－放射免疫计数器（中国科技大学实业总公司）。

1.4 分组及给药 24只SHR随机分为模型组（Model组）、硝苯地平组（Nif组）、连萸药对组（LY组），每组8只，以正常WKY大鼠8只为对照组（WKY），共4组，每组雌雄各4只。WKY组予生理盐水以10mL／（kg·d）灌胃。Model组生理盐水以10mL／（kg·d）灌胃。Nif组予硝苯地平溶液1mg·10 mL／（kg·d）灌胃。连萸药对组予3∶1剂量配伍的连萸药对浓缩液以10mL／（kg·d）灌胃。疗程均为4周。

1.5 大鼠尾动脉压测量 室温恒定，保持在20℃±2℃，所有大鼠在BP－6动物无创血压测试系统用尾部加压法，正式测压前，电热加温恒温箱至37℃，然后选择大小合适的大鼠固定套笼将大鼠固定于其中，并充分暴露大鼠尾部，将其固定在恒温状态下的测压台上，尾部套置红外线测定装置，待大鼠稳定后测压。在大鼠安静状态下，连续测收缩血压3次，取平均值作为测压结果。测压过程中，动作要轻柔，避免引起大鼠躁动使血压波动从而影响血压测量结果。正式灌胃测量前每天尾部加压测一次大鼠尾动脉血压，让大鼠适应每天将要进行的血压测量的环境和刺激，然后在正式灌胃后每天同一时间测量大鼠血压变化，比较大鼠灌胃前及灌胃4周末大鼠尾动脉收缩压变化。

1.6 ET、CGRP含量测定 在第4周末每组的8只大鼠在麻醉状态下进行实验。以2%戊巴比妥钠以40mg／kg体重的剂量麻醉处死，用5mL注射器取动脉血，迅速置于含10%EDTANa2100μL和100U抑肽酶试管中，混匀低温离心，离心5min，分离出血浆，取上清液置于聚丙乙烯塑料试管中，所有样本均于－70℃低温冰箱中保存备用。放免测定ET、CGRP的含量，在NSB管、标准管中分别注入缓冲液、测定物标准品、标本血浆，混匀，4℃放置15min，吸取上清液，测定各管沉淀的放射性计数（cpm），根据试剂盒公式计算血浆ET、CGRP浓度。

2 结 果

2.1 连萸药对对SHR血压水平的影响（见表1）与WKY组比较，SHR各分组灌胃前血压水平明显增高（P＜0.05）；与Model组比较，Nif组大鼠4周的血压水平均明显降低（P＜0.05）；连萸药对组大鼠4周的血压水平均明显低与 Model组（P＜0.05）。

表1 连萸药对对SHR血压水平的影响（±s）mmHg

表1 连萸药对对SHR血压水平的影响（±s）mmHg

周后正常组组别 n 用药前 用药4 8 121.25±11.18 122.38±9.83模型组 8 203.88±13.391） 211.38±17.251）硝苯地平组 8 204.13±14.151） 168.13±11.862）连萸煎剂组 8 205.38±14.561） 170.63±12.472）与正常组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05

2.2 连萸药对对SHR血浆ET、CGRP含量的影响（见表2）与WKY组相比，Model组ET含量升高，CGRP含量降低（P＜0.05）；与Model组比较，Nif组和LY组大鼠血浆ET含量降低（P＜0.05），Nif组大鼠 CGRP含量升高（P＜0.05），而 LY组CGRP含量升高更明显，与Model组比较，有统计学意义（P＜0.05）。

表2 连萸药对对SHR血浆ET、CGRP含量的影响（±s）

表2 连萸药对对SHR血浆ET、CGRP含量的影响（±s）

组别 n ET（pg／mL）CGRP（pg／mL）8 56.58±9.05 124.59±33.73模型组 8 85.52±12.881） 55.07±16.901）硝苯地平组 8 68.34±11.362） 80.45±21.902）连萸煎剂组 8 67.56±11.612） 91.65±28.272）3）与正常组比较，1）P＜0.05；与模型组比较，2）P＜0.05；与硝苯地平组比较，3）P＜0.05正常组

3 讨 论

近年来，血管活性物质在高血压的机制研究中越来越受到重视，已知ET是目前迄今为止最强的血管收缩剂［1］，而CGRP是目前已知体内最强的血管舒张神经肽［2］。高血压患者血浆ET的水平高于健康成人，而CGRP的水平低于健康成人［3］。二者的浓度随着高血压病情的不同而相应变化，研究显示高血压I期患者ET和CGRP的浓度较正常人无明显变化，而Ⅱ期、Ⅲ期变化显著，随高血压病情发展ET升高，而CGRP随之降低［4］。且二者存在此消彼长的关系，当作为具有血管舒张作用CGRP减少时，它抑制血管平滑肌增殖及抑制ET的释放作用减弱，从而导致ET浓度升高［5］，而ET浓度升高导致平滑肌细胞Na＋内流引起Ca2＋内流的作用增强，对抗CGRP的作用增强［6］，导致血压增高，增加了对靶器官的破坏作用。本实验结果显示，与WKY组比较，模型组中ET的含量明显增加，而CGRP的含量显著减少，在高血压发病机制中，ET／CGRP的严重失衡是一个重要原因，与文献报道相符［3－6］。

黄连、吴茱萸药对是临床治疗高血压的经验组方，二者配伍具有良好的清心平肝，解郁化湿功效，既能清郁结之热又无凉遏之弊，针对高血压患者常见之肝火偏亢、心火旺盛、夹痰夹湿者具有很好的降压疗效。黄连、吴茱萸单味药及其活性成分具有一定降压作用［7，8］。本试验证实黄连、吴茱萸3∶1剂量配伍的连萸药对具有一定降压作用，其降压效果与西药Nif相当。且研究发现该复方能明显降低高血压大鼠血浆ET含量，升高CGRP含量，调节两者之间的失衡，这可能是其降压的重要机制。

［1］张金贵，刘光耀.内皮素与血压调节：高血压的内皮素机制研究［J］.中国病理生理杂志，1993，9（3）：442.

［2］Yangisawa M，Kurihara H，Kimura S，et al.A development vascor strict or peptide by vascular endothelial cells［J］.Nature，1988，332：411－415.

［3］黄振平，林莲初，丁世忠，等.高血压病患者血浆中6种神经肽含量的变化［J］.临床中老年保健医学，1999，2（2）：67－68.

［4］王勇，张亚光.高血压病患者血浆内皮素与降钙素基因相关肽变化的意义［J］.中国卫生检验杂志，2005，15（8）：986.

［5］谭敦勇，姚光海，赵东，等.降钙素基因相关肽对内皮素释放的影响［J］.中国病理生理杂志，1994，10（4）：545－547.

［6］Ashida T，Kawaao Y，Yoshimi H，et al.Effects of ouabaia and vera－pami1 on endothelia included contraction of meseateric artery is young spontaneously hyperteasive rats［J］.J Cardiovasc Pharmacol，1991，17（suppl7）：174－176.

［7］代国友，潘晓鸥，罗红霞.黄连的药理研究进展［J］.中国药房，2004，15（11）：694－696.

［8］逯振宇，蔺兴遥，崔佳.吴茱萸对心血管药理作用的研究［J］.中医药研究，2002，18（2）：44－45.