三种AmpC酶表型检测方法临床比较分析

朱向阳

安徽省铜陵县人民医院检验科，安徽铜陵 244100

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2008年12月～2010年12月应用头孢西丁进行初筛试验后筛选出的满足AmpC酶表型筛选条件的198株革兰阴性杆菌，以AmpC基因聚合酶链反应(PCR)检测结果作为金标准，设为对照组，分别采取氯唑西林(CLO)、三维试验、改良Hodge试验，分别设为观察组A、B、C，并与PCR检测结果作对比，观察三种检测方法的阳性率、敏感度及特异性。

1.2 检测方法

1.2.1 初筛与制备 本院应用头孢西丁进行初筛试验，对临床选取的198株革兰阴性菌采取纸片扩散法进行AmpC酶的表型筛选，经纸片扩散法检测显示FOX抑菌圈直径在18mm内，则认为满足AmpC酶表型筛选条件。将初筛的菌株经过夜培养后的纯分离菌落置于5mL的肉汤中接种，然后放置在35℃下的孵箱进行4h的培养，再以离心半径为9.2cm，速度为2000r/min进行20min的离心试验，然后去除上清液，把沉淀物进行5～7次的反复冻融，再以离心半径为9.2cm，速度为12000r/min，进行20min的离心试验，取上清液选作酶的粗提取物[1]。

1.2.2 观察组A（氯唑西林(CLO)检测）观察组B（三维试验）观察组C（改良Hodge试验）

1.2.5 对照组（PCR试验）对初筛的菌株进行多重PCR检测，并将其产物进行测序，将其结果与Blast进行比对，此检测我院暂无法开展，需送到市人民医院协助检测。

1.3 统计学方法

本组检验的数据均经卡方软件V1.61版本检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 三组检测结果比较

2.2 AmpC基因扩增、测序的结果

198株革兰阴性杆菌中，PCR检测AmpC基因扩增为阳性有81株，阳性率为40.9%，其中弗劳地枸橼酸杆菌5株（6.2%）、肺炎克雷伯菌15株（18.5%）、鲍曼不动杆菌 30株（37.0%）、阴沟肠杆菌31株（38.3%）。81株AmpC基因扩增为阳性的菌株经双向测序后，将其结果与Blast进行比对，5株弗劳地枸橼酸杆菌为CMY-2型AmpC酶，15株肺炎克雷伯菌为DHA-1型AmpC酶，31株阴沟肠杆菌为EBC型AmpC酶，81株AmpC基因扩增为阳性的菌株中，其核苷酸序列与相应的AmpC酶的同源性均在98%以上。

表1 三组检测方法的临床效果比较[n(%)，n=菌株]

3 讨论

本研究显示，AmpC酶进行表型筛选，对比其他的表型筛选法，以PCR试验为金标准，改良的Hodge试验符合率最高，其敏感度与特异性也优势突出。在选取的198株革兰阴性菌中，对于30株鲍曼不动杆菌与31株阴沟肠杆菌采取改良 Hodge试验的AmpC酶的敏感性的符合率存在显著差异，肠杆菌科的细菌在Hodge试验中的敏感性及其符合率较高，分别为100%和93.5%，而鲍曼不动杆菌的敏感性及其符合率偏低，仅为33.3%和60.0%，因此，在本研究中的三组AmpC酶表型检测方法中，改良Hodge试验对于鲍曼不动杆菌的有效性仍需要进一步考究[2]。综上所述，CLO对于AmpC酶表型的检测的敏感度与符合率均较低，采取改良Hodge试验的敏感度与特异性均良好，符合率最高，属于AmpC酶表型的检测中较为简便、快速、有效的手段，具有重要的临床实用意义。

[1]侯伟伟，蒋燕群.三种AmpC酶表型检测方法比较[J].检验医学，2010，25（2）：122-124.

[2]李轶，蒋燕群，汤瑾，等.大肠埃希菌、克雷伯菌中质粒AmpC酶的流行分布[J].检验医学，2006，21(5)：517-520.