丹参调肝颗粒的薄层色谱法鉴定

刘丰贤

（湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013）

丹参调肝颗粒是由丹参、虎杖、白芍、枸杞、白术、枳壳、郁金、猪苓等12味中药组成，功能：行气活血，调理肝脾。主治：气滞血瘀，肝脾不调，证见两胁刺痛或痛有定处，胁下痞块，面色晦暗，赤缕红掌，皮肤甲错，神疲心烦纳差，腹胀便溏，舌淡紫或紫暗，脉弦涩。慢性乙型肝炎，肝硬化而见上述症状者[1]。本实验主要研究了丹参调肝颗粒的质量控制方法，实验表明薄层色谱法可以方便快捷的对制剂的药材进行定性检查。

1 仪器及药品

1.1 主要仪器

FA1204B电子分析天平(上海精科)；RE-2000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；ZF7C三用紫外分光仪(上海康华生化仪器制造有限公司)。

1.2 主要药品及试剂

硅胶G(青岛海洋化工厂)；白芍苷对照品、丹参酮IIA对照品、丹酚酸B对照品、虎杖对照药材(均为中国药品生物鉴定所提供)；甲醇、甲苯、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚等均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 丹参酮IIA薄层鉴别[2]

2.1.1 供试品溶液的制备

取本品粉末10 g,加乙醚50 mL,振摇,放置1h,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯2 mL,移至中性氧化铝柱 (100目-120目,5 g,内径15 mm)上,用95%乙醇10 mL洗脱,收集洗脱液,于冰箱放置20 min,滤过,挥干溶剂,残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解,作为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备

取丹参酮IIA0.5 mg,加乙酸乙酯1mL使溶解,作为对照品溶液。

2.1.3 阴性对照品的制备

按处方量比例取缺丹参的其余药材,模拟工艺方法制备成阴性样品,照供试品溶液制备方法同法制备阴性对照溶液。

2.1.4 薄层鉴别

照薄层色谱法(中国药典2005附录VI B)试验[1],吸取上述供试品溶液10 μL,阴性对照品10 μL,对照品溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,用石油醚-醋酸乙酯(8:2),展开,取出,晾干。供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上,显相同的暗红色斑点,阴性对照无干扰。结果见图1。

2.2 丹酚酸B的薄层鉴别[3]

2.2.1 供试品溶液的制备

取本品粉末 5 g，加水10 mL充分振摇使溶解，加盐酸至pH到2，乙酸乙酯萃取3次，每次20 mL，合并萃取液，减压回收乙酸乙酯至干，加甲醇2 mL溶解，作为供试品液。

2.2.2 对照品溶液的制备

取丹酚酸B 1 mg，加甲醇1 mL，作为对照品溶液。

2.2.3 阴性对照品的制备

按处方量比例取缺丹参的其余药材,模拟工艺方法制备成阴性样品,照供试品溶液制备方法同法制备阴性对照溶液。

2.2.4 薄层鉴别

照薄层色谱法(中国药典2005附录VI B)试验[1],吸取上述供试品溶液10 μL,阴性对照品10uL,对照品溶液各5 μL,分别点于同一硅胶F254薄层板上,用甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2:3:4:2:0.5),展开,取出,晾干。紫外灯下检视，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色斑点,阴性对照无干扰。结果见图2。

2.3 虎杖的薄层鉴别[3]

2.3.1 供试品溶液的制备

取本品20 g，研成细粉，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水10 mL、盐酸2 mL，超声处理30 min，冷却，用乙醚提取5次，每次15 mL，合并乙醚液，用水洗涤2次，每次20 mL，弃去水溶液，乙醚液挥干，残渣加1 mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 取虎杖对照药材

1 g，加甲醇 5 mL，超声处理 15 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加1 mL甲醇使溶解，制成对照药材溶液。

2.3.3 阴性对照品的制备

另取除虎杖外的其他处方量药材，按制备工艺制成缺虎杖的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。

2.3.4 薄层鉴别

照薄层色谱法(中国药典2005附录VI B)试验[1],分别吸取上述溶液各约10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水 (12:4:0.8:0.15:2)为展开剂，展开，取出，晾干，氨熏显色。供试品色谱中在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点，缺虎杖的阴性样品无干扰。结果见图3。

2.4 白芍的薄层鉴别[3]

2.4.1 供试品溶液的制备

取本品15g，研成细粉，加甲醇回流提取二次，每次加甲醇50 mL提取1 h，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水50 mL使溶解，用水饱和正丁醇提取4次，每次25 mL，合并正丁醇液，先用氨试液洗涤2次，每次20 mL，再用水洗涤 2次，每次 20 mL，弃去氨水液、水液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加10 mL水使溶解，上D101大孔树脂柱 (约10 g，内径1 cm，长约12 cm，树脂先用70%乙醇冲洗，再用水冲洗，重复以上操作两次，水湿法装柱)，用50 mL水洗脱，收集水洗脱液后再上柱洗脱后，弃去水洗脱液，先用40%乙醇60 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加2 mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。

2.4.2 对照品溶液的制备

另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1 mL中含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4.3 另取除白芍外的其他处方量药材，按制备工艺制成缺白芍的阴性样品，同法制成阴性样品溶液。

2.4.4 薄层色谱

照薄层色谱法(中国药典2005附录VI B)试验[1],分别吸取上述溶液各约10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃烘烤至斑点显色。供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上不显相同颜色的斑点，阴性对照无 干扰。结果见图4。

Fig1 TLC chromatograms of Tanshinone IIA

Fig2 TLC chromatograms of Salvianolic acid B

Fig3 TLC chromatograms of Polygonum cuspidatum

Fig4 TLC chromatograms of white peony roots

3 讨论

在做丹参的薄层色谱鉴别时曾选用 (《中国药典》2005年版一部)丹参的鉴别项下制备方法,用乙醚提取液制备的供试品溶液,点于硅胶G薄层板上,以苯-乙酸乙酯 (19:1),石油醚-乙酸乙酯(8:1和8：2及8:3),环己烷-乙酸乙酯 (6:1及7:1)等不同溶剂系统为展开剂,展开,结果分离效果均不理想,成分之间干扰大,斑点扩散呈花纹。由于本方中含有脂肪油类成分,易被乙醚提取,在用薄层层析时影响分离,因此,改用中性氧化铝柱处理样品,制备成供试品溶液,用上述不同溶剂系统为展开剂展开,石油醚-醋酸乙酯 (8:2)为展开剂分离效果良好。同时由于本制剂为水提取制剂，故增加水溶性丹酚酸B的检查，方法简单，结果可靠，确认为本品中丹参的薄层色谱法鉴别。

其他两味药材白芍和虎杖，均按(《中国药典》2005年版一部)相应的鉴别项，效果较好。

实验结果表明，本文所述方法简便、快捷，可作为丹参调肝颗粒的质量控制方法之一。

[1]刘丰贤，刘江，周鹏.HPLC法测定丹参调肝颗粒中丹参酮ⅡA的含量[J].湖南师范大学学报(医学版),2010,7(4):19-20.

[2]崔淑莲,蒋建斌,喻祖青.乙肝扶正片的质量标准研究[J].中成药,2009,31(9):1385-1389.

[3]李子鸿,刘东文,李怀国,等.新伤去瘀口服冻干颗粒质量标准的研究[J].中药材,2008,5(31):763-765