天津部分地区志贺菌临床株血清分型及抗生素耐药性分析

李艳芬，程玉谦，梁 帆，王 俊，祁 伟

（天津医科大学第二医院感染科，天津市感染性疾病研究所，天津300211）

志贺菌所引起的细菌性痢疾是常见的肠道传染病,随着抗生素的广泛应用，志贺菌的耐药率正在逐年上升，严重威胁着人类健康。本研究对天津部分地区2009-2011年分离的志贺菌临床株及本研究所保存的1981-1983年分离的志贺菌，进行血清分型及耐药性分析，了解本地区志贺菌的血清分型和抗生素耐药情况，分析其变化趋势。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 收集天津地区多家三级甲等医院2009-2011年肠道门诊患者粪便标本的志贺菌154株，其中宋内志贺菌140株，福氏志贺菌14株；1981-1983年由天津市感染性疾病研究所收集真空干燥低温冷冻保存复活的30株志贺菌，其中福氏志贺菌29株，宋内志贺菌1株。

1.2 试剂 福氏志贺菌诊断分型血清购自宁波天润生物药业有限公司；沙门氏菌-志贺氏菌琼脂（SS）固体培养基购自杭州天和微生物试剂有限公司；水解酪蛋白（MH）琼脂购自上海伊华生物科技有限公司。药敏纸片包括氨苄西林、头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、亚胺培南、四环素、链霉素、庆大霉素、阿米卡星、诺氟沙星、左氧氟沙星、复方磺胺甲恶唑（SMZco）共12种，购自北京天坛生物制品研究所。

1.3 方法

1.3.1 菌株分离、培养、鉴定 细菌培养根据临床检验操作规程，将新鲜粪便标本接种于SS琼脂上，经37℃恒温培养箱培养18～24 h，挑取疑似志贺菌菌落，分纯培养后进行生化鉴定。1981-1983年分离的30株志贺菌通过LB营养肉汤及血平皿复苏存活并鉴定。

1.3.2 血清分型 采用玻片凝集法，生理盐水作对照。

1.3.3 抗生素药物敏感试验 采用改良Kirby-Bauer纸片扩散法进行检测，挑取培养18～24 h的单个菌落，稀释至0.5麦氏浊度，用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，贴抗生素纸片，放入35℃恒温箱中，孵育18～24 h，所有菌株严格按照美国临床和实验室标准化研究所（CLSI/NCCLS）2010标准判断及记录结果。

1.4 数据统计处理 实验数据采用SPSS17.0统计软件对结果进行统计分析，采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 菌型分布 见表1。1981-1983年组30株志贺菌，其中福氏志贺菌29株，占96.67%，宋内志贺菌1株，占3.33%；福氏志贺菌中血清1b型占58.62%（17/29），是数量最多的血清型，血清2a型占20.69%（6/29），血清 1a型占 13.79%（4/29），血清2b、4a型各分离出1株；而2009-2011年分离出的154株志贺菌中宋内志贺菌140株，占90.91%，福氏志贺菌14株，仅占9.09%，血清分型较分散，未发现血清1b、4a型，出现了新的血清型5b、X变种及Y变种。

表1 福氏志贺菌血清分型（n）Tab 1 Serotypesof Shigella flexneri（n）

2.2 耐药性检测 结果见表2。因1981-1983年分离的宋内志贺菌仅有1株，此次药敏分析不包括在内。

表2 不同时期志贺菌药敏试验结果比较[n(%)]Tab2 Com parison of antim icrobial resistance rates in different years[n(%)]

2.2.1 2009-2011年组志贺菌耐药性比较 不同志贺菌的耐药性不一致，福氏志贺菌对头孢噻肟、头孢曲松、诺氟沙星的耐药率高于宋内志贺菌（P<0.05），对庆大霉素的耐药率低于宋内志贺菌（P<0.05），两者对氨苄西林、四环素、链霉素、复方磺胺甲恶唑的耐药率均较高，已达80%以上，而对头孢他啶、阿米卡星、左氧氟沙星的耐药率较低。福氏志贺菌对四环素、链霉素的耐药率均较高，而对头孢他啶、亚胺培南、阿米卡星、喹诺酮类的耐药率较低；其中，福氏2b、4a、X变种、Y变种对三代头孢、亚胺培南、庆大霉素、阿米卡星、诺氟沙星均敏感。

2.2.2 不同时期福氏志贺菌耐药性比较 1981-1983年组福氏志贺菌对四环素的耐药率最高，为93.10%，其次是链霉素、复方磺胺甲恶唑，分别为72.41%、31.03%，对氨苄西林、庆大霉素的耐药率均低于20%，未发现三代头孢、亚胺培南、阿米卡星及喹诺酮类药物耐药菌株；而2009-2011年组福氏志贺菌对链霉素的耐药率为100%，其次是四环素、氨苄西林、复方磺胺甲恶唑，分别为92.86%、85.71%、85.71%，对三代头孢等其他药物耐药率均低于30%，未发现亚胺培南及阿米卡星耐药菌株。

2.2.3 多重耐药性 1981-1983年分离的志贺菌中3种及3种以上抗生素多重耐药菌为9株，占31.03%，而2009-2011年分离的志贺菌中多重耐药菌为148株，占96.10%，明显高于1981-1983年组，且差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

志贺菌是引起细菌性痢疾的主要病原菌，世界各地的志贺菌群每隔20～30年会发生一次明显的变迁，各血清型之间也存在演化,在原有血清型的基础上进化出更能适应环境改变的新亚型[1]，但总的来说，发达国家以宋内志贺菌占优势，发展中国家以福氏志贺菌为主[2]。2009年我国细菌性痢疾检测分析结果显示，福氏志贺菌仍为最常见菌种，占67.26%，其次为宋内志贺菌（32.74%），但存在地区差异性，贵州、福建、北京的优势菌群已转变为宋内志贺菌[3]。不同地区福氏志贺菌的流行血清型不同[4-5]，同一地区不同年份的优势血清型也不相同[6-7]。本试验对比研究了1981-1983年组和2009-2011年组志贺菌的血清分型，发现在1981-1983年分离的30株志贺菌中，福氏志贺菌占96.67%，其中血清1b型有17株，为优势血清型。回顾本研究资料，1990年7-10月间检出的73株志贺菌中宋内志贺菌（52.0%）比例略高于福氏志贺菌（45.3%），既往1996年检出33株志贺菌中福氏志贺菌27株，占81.82%，宋内志贺菌仅有3株（9.09%）[8-9]。而2009-2011年分离的154株志贺菌中，福氏志贺菌仅占9.09%，宋内志贺菌占了90.91%，成为近几年来的优势菌，这与国内其他地区的报道类似[3]；未发现血清1b型，其它血清型分布也与1981-1983年组有明显差异，福氏2a型数量最多，并且出现了1981-1983年组未发现的血清型5b、X变种及Y变种，呈多样化趋势。由此可见，天津部分地区志贺菌血清型分布随着时间变迁发生了明显变化，优势血清型也随之改变，因此加强对志贺菌的监测工作，注意新菌型的出现，了解菌型的变化趋势，对细菌性痢疾的防控工作及流行病学调查具有重要意义。

由于近年抗生素的过度使用，志贺菌耐药菌株呈现逐渐加重的趋势，并产生多重耐药。本试验研究不同时期分离的两组志贺菌发现，相较于1981-1983年组福氏志贺菌，2009-2011年分离的福氏志贺菌不但大多数亚型已出现耐药菌，而且除亚胺培南、阿米卡星、四环素外，对其他药物的耐药率均有不同程度的升高，其中氨苄西林耐药率的增长最严重，由17.24%增长至85.71%，其次是复方磺胺甲恶唑（31.03%～85.71%）；福氏志贺菌与宋内志贺菌对多种抗生素的耐药率也存在明显差异，且均有统计学意义（P<0.05）。本文结果显示阿米卡星对志贺菌属在体外仍具有一定的抗菌活性，但根据CLSI的研究，氨基糖苷类药物即使体外有活性，但临床无效，因此治疗细菌性痢疾应注意合理用药。所检测菌株药敏结果还显示5种及5种以上抗生素多重耐药菌株也由1981-1983年组的0上升至2009-2011年组的 11.69%（P<0.05）。2009-2011年分离的志贺菌临床株对复方磺胺甲恶唑、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均高于国外报道[10]。由于保存条件等因素的影响，本试验1981-1983年组的志贺菌株数量较少，进一步确切研究还需增加样本量。

综上所述，天津市部分地区志贺菌的优势菌型随时间改变已发生了变化，耐药性也随之改变，耐药菌比例不断升高，多重耐药情况严峻，因此临床治疗中必须严格掌握抗生素应用指征，防止耐药情况的继续恶化。

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