重庆城口县产蛋种鸡新城疫抗体水平检测

阳 勇，张薇薇

（1.重庆市城口县农业委员会，重庆 城口 405900；2.重庆市城口县动物卫生检疫检验监督所，重庆 城口 405900）

鸡新城疫抗体水平是揭示鸡体免疫状况和感染能力的一项重要指标，尤其在非典型新城疫疾病诊断中具有重要价值。为了有效控制其发生流行，各大进出口鸡场均定期对鸡群血清进行新城疫免疫抗体水平监测。定期随机地抽取鸡群中0.5%～1%的鸡进行抗体水平检测，根据检测结果来确定免疫程序和免疫时间，可以很好地控制鸡非典型新城疫的发生。近年来，重庆市城口县大力发展城口山地鸡，为了了解城口县城口山地鸡种鸡的新城疫抗体水平，本文于2012年7月采用血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）对城口县5个城口山地鸡种鸡场的新城疫抗体水平进行了检测，现将试验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 200份被检血清 分别来源于城口县良鲜养鸡场（A）、高观镇施礼养鸡场（B）、修齐镇旭辉养鸡场（C）、新联盟养鸡专业合作社（D）和金安养鸡专业合作社（E）5个城口山地鸡种鸡场。随机取样，按常规方法进行翅静脉采血，每只1～2mL，分离血清置4℃条件下备用。1.1.2 已知血清 鸡新城疫阳性血清、阴性血清均由西南大学荣昌校区预防兽医学教研室提供，阳性血清抑制效价为1∶128。

1.1.3 标准抗原 鸡新城疫活疫苗（La Sota），齐鲁动物保健品有限公司生产，批号是1112014-1。

1.1.4 0.5%鸡红细胞悬浮液 按文献资料的方法配制。

1.1.5 稀释液 0.85%灭菌生理盐水，临用时配制。

1.1.6 常规仪器 96孔微量U型反应板、100 μL微量加样器、MM-1微型混合器，由西南大学荣昌校区预防兽医学教研室提供。

1.2 试验方法

1.2.1 La Soto系疫苗接种鸡胚制备抗原 将疫苗用灭菌生理盐水作10倍稀释，在10日龄易感鸡胚尿囊内接种0.1mL，凡接种后72～120h内死亡且病变显著的鸡胚，分别收集其尿囊液于消毒试管内，保存于冰箱中备用。

1.2.2 鸡新城疫病毒红细胞凝集（HA）试验 首先用100mL微量加样器向96孔微量U型反应板第1～10孔各加入稀释液25μL；接着向第l孔内加入鸡新城疫病毒液25μL，并作倍比稀释至第9孔，从第9孔中弃去25 μL，第10孔不加病毒液作对照；再用微量加样器向每孔内加入稀释液25 μL，然后每孔分别加入0.5%鸡红细胞悬液25 μL。加样完毕后于微型混合器上振荡1 min，室温下放置30～60min后观察结果。操作术式见表1。

表1 鸡新城疫病毒红细胞凝集试验（HA） μL

从表1得出：HA试验的凝集价为1∶640。

1.2.3 鸡新城疫病毒红细胞凝集抑制（HI）试验 分别对每份被检血清进行试验，首先用100μL微量加样器向96孔微量U型反应板第1～8孔各加稀释液25 μL，第9孔加稀释液50 μL，第10孔加稀释液25 μL，第9、10孔分别作红细胞对照；然后在第1孔内加被检血清25 μL，并作倍比稀释至第8孔，再从第8孔中弃去25 μL；接着用100μL微量加样器从1～8孔和第10孔中加入4个血凝单位的抗原液25μL；再将96孔微量U型反应板在微型混合器上振荡1min，置室温下30min；然后再在每孔中分别加入0.5%鸡红细胞悬液25 μL。加样完毕后，又在微型混合器上振荡1 min，置室温下30～60 min后观察结果。试验同时作阴性血清、阳性血清对照。操作术式见表2。

表2 鸡新城疫病毒红细胞凝集抑制试验（HI） μL

从表2得出：该被检血清红细胞的凝集抑制效价为1∶80。

2 试验结果

本试验检测了城口县5个城口山地鸡种鸡场共200份产蛋鸡的血清样品，其新城疫抗体检测结果列于表3。从表3得知：在5个城口山地鸡种鸡场的6000只产蛋鸡中随机检测了200只鸡的新城疫抗体水平，其抽检率为3.3%；各个种鸡场的新城疫抗体水平各不相同。

表3 城口县200份产蛋种鸡血清新城疫抗体检测结果

3 讨论与分析

3.1 首免日龄对新城疫抗体水平产生有影响 C和E鸡场的首免日龄分别是第7日和第8日，A、B、D鸡场的首免日龄分别为第6日、第5日、第4日，从检测结果可以看出，首免日龄在第7～8日的鸡场的抗体水平较高。据有关报道，按常规免疫程序于7～10日龄进行初次免疫，母源抗体滴度较高的雏鸡，首次免疫时间必须推迟，否则会导致免疫不全或免疫失败，本试验与之相符。

3.2 采血时间与最后一次新城疫免疫的时间间隔不同，抗体水平也不一样，并且不同的疫苗达到峰值的时间以及维持时间也不一样 据报道，接种Ⅳ系疫苗，HI抗体在接种后第5d开始上升，接种后第11 d达到峰值，持续6d保持高滴度抗体水平；接种Ⅰ系疫苗，HI抗体在接种后第4d开始上升，接种后第9d达到峰值；接种油乳剂灭活苗，HI抗体在接种后第5d开始上升，接种后第11d达到峰值，持续16d保持高滴度抗体水平。试验中C、E鸡场的采血时间与最后一次新城疫免疫的时间间隔是18 d、25 d；A、D、B鸡场的采血时间与最后一次新城疫免疫的时间间隔是30d、35d、40d，与报道相符。

本试验通过对5个种鸡场产蛋鸡的抗体水平进行检测，得出C和E鸡场的抗体水平较高，其余3个鸡场的抗体水平较低。据报道，HI效价低于3log2时，必须加强免疫，才能起到良好的保护作用；HI效价在4log2～5log2时，只对部分鸡只产生保护作用；在5log2～7log2时，不能抵抗强毒入侵，所以种鸡的HI抗体水平应在7log2以上。

4 结论

抽样检测了城口县5个种鸡场的200只鸡的新城疫抗体水平，结果显示各鸡场的抗体水平不尽相同。

[1]唐慧稳.非典型鸡新城疫的特点及防制研究[J].畜牧兽医科技信息，2007，6（5）：32-34.

[2]闰慎飞，闰民朝，常明进，等.鸡非典型新城疫的发生及防制[J].河南畜牧兽医，2006，27（10）：30-36.

[3]鲁晋秀，杨峰，程丽萍.非典型新城疫发生原因及防制措施[J].农村养殖技术：新兽医，2005，（12）：45-47.

[4]朱金瑞，任晓宇，赵立强，等.鸡非典型新城疫的诊断及免疫防制[J].兽药市场指南，2006，（11）：27-28.

[5]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].2版.北京：中国农业出版社，2005：107.

[6]温清萍，李玉娥，张险朋.影响鸡新城疫抗体水平监测的因素及分析[J].畜牧兽医科技信息，2005，（1）：39-40.

[7]傅先强，刘占君.养禽场禽病检验手册[M].北京：中国农业大学出版社，1997：97－104.

[8]周廷宣.非免疫鸡血清中鸡新城疫病毒抗体的测定[J].四川畜牧兽医，2005，32（11）：22.

[9]王淹都，白建，马海利.近期鸡新城疫的流行特点及防制[J].中国畜牧兽医，2005，（4）：60.

[10]韩登峤，王红.乌鸡新城疫的诊断与防治[J].中国家禽，2005，（10）：49.

[11]黎豢洪，橱克军.鸡新城疫的预防与控制[J].养禽与禽病防治，2006，（11）：34-35.

[12]张再清，马维卿，胡德基.鸡新城疫疫苗对不同鸡群的免疫试验[J].甘肃畜牧兽医，2002，（3）：9-11.

[13]辛苏文，马海利，裴晓炳，等.简析非典型鸡新城疫[J].中国畜牧兽医，2007，34（3）：101-102.

[14]胡率领，郜国涛，夏晓惠，等.免疫鸡群发生新城疫的原因分析及防制措施[J].河南农业科学，2006，（12）：95-97.