顶空毛细管气相色谱法测定非那甾胺原料药中有机溶剂残留量

郭文献，辜鹏程，李勤耕（重庆医科大学药学院，重庆 400016）

非那甾胺属4-氮甾体激素类化合物，是首个特异性的5 α-还原酶抑制剂，口服有效；主要用于治疗良性前列腺增生，可使增大的前列腺减小，改善尿流等症状及雄激素性脱发[1-2]；其相对分子质量仅为373，为脂溶性。

药物中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用或产生而又未能完全去除的有机溶剂。由于很多有机溶剂对环境、人体都有一定的危害，因此，为保障药物的质量和用药安全以及保护环境，控制残留溶剂量具有重要意义。非那甾胺在合成过程中，使用了甲醇、丙酮、三氯甲烷及甲苯等4种有机溶剂，但关于其有机溶剂残留的研究，国内尚未见文献报道。笔者根据人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）[3]颁布的残留溶剂研究指导原则和2010年版《中国药典》的相关规定[4]，并参考有关文献[5-6]，采用顶空气相色谱法，以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂，同时测定上述4种有机溶剂残留量。结果表明，该方法简便、灵敏、重复性好，可用于非那甾胺原料药中有机溶剂残留量的测定。

1 材料

6890气相色谱仪、氢火焰离子化检测器（FID）、7694 E顶空进样器（美国Agilent公司）；ME2355型电子天平（德国Sartorius公司）。

非那甾胺原料药（重庆医科大学医药研究所提供，批号:101201、110306、110325、110404、110512，纯度分别为:99.5%、99.2%、99.1%、99.4%、99.2%）；甲醇、三氯甲烷、丙酮和甲苯均为色谱纯，DMSO为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Phenomenex ZB-624毛细管柱（30 m×0.32 mm×1.8 μm）；DMSO为溶剂；柱温采用程序升温:初始温度50℃，保持20 min，并以10℃/min的速率升至200℃，保持20 min；进样口温度:200℃；FID检测口温度:250℃；载气:N2，流速:1.0ml/min；分流比:5∶1；顶空进样，平衡温度:80℃，平衡时间:45 min，进样时间:1 min，定量环温度:100℃，传输线温度:110℃。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取甲醇150mg、丙酮250mg、三氯甲烷30mg、甲苯44.5 mg，置于同一50 ml量瓶中，用DMSO溶解，并稀释至刻度，摇匀即得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液2.5 ml，置于25 ml量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。测定时精密量取对照品溶液5 ml，置于20 ml顶空进样瓶中，密封，摇匀。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取供试品约0.1 g，置于20 ml顶空进样瓶中，精密加入DMSO 5 ml，密封，振摇使溶解，即得。

2.4 系统适用性试验

取“2.2”、“2.3”项下的对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，记录色谱。结果，4种溶剂分离良好，理论板数均不低于5000，详见图1。

图1 气相色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；1.甲醇；2.丙酮；3.三氯甲烷；4.甲苯Fig 1 GC chromatogramsA.reference substances solution；B.sample solution；1.methanol；2.acetone；3.chloroform；4.methylbenzene

2.5 线性关系考察

精密称取甲醇300mg、丙酮250mg、三氯甲烷30mg、甲苯44.5 mg，置于同一个50 ml量瓶中，用DMSO溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为标准曲线贮备溶液。精密量取10 ml，置于50ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀；再分别精密量取0.5、1.0、2.5、7.5、12.5、10.0 ml分别置于50、50、50、50、50、10 ml量瓶中，分别用DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准工作溶液a、b、c、d、e、f。

分别精密量取5 ml上述不同质量浓度的标准工作溶液，分别置于20 ml顶空进样瓶中，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，记录色谱图，通过积分确定峰面积。以峰面积（A）为纵坐标，以各溶剂相应质量浓度（c）为横坐标，进行线性回归，得回归方程及检测质量浓度线性范围，结果见表1。

表1 各溶剂回归方程及检测质量浓度线性范围（n＝6）Tab 1 Regression equation and linear range of each solvent（n＝6）

2.6 精密度试验

分别精密量取对照品溶液5 ml，置于6个20 ml顶空进样瓶中，依次进样，结果4种溶剂峰面积值的RSD均小于4.5%，表明本方法精密度良好。

2.7 回收率试验

精密称取同一批号原料药（批号:101201）各约0.1 g，置于9个20 ml顶空进样瓶中，分为低、中、高水平3组（n＝3），每组分别精密加入标准工作溶液b、d、f各5 ml，进样测定，计算平均回收率。结果平均方法回收率为94.7%～97.5%，RSD＜2.1%（n＝3），详见表2。

表2 回收率试验结果（n＝3）Tab 2 Results of recovery rate tests（n＝3）

2.8 检测限试验

用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3时计算检出限。结果甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯的检测限分别为10.93、0.788、0.355、0.0216 μg/ml。

2.9 样品中有机溶剂残留量测定

取5批样品，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，以外标法计算4种有机溶剂的含量。结果5批样品中均未检出甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯。

3 讨论

非那甾胺易溶于DMSO、丙酮等有机溶剂，而在水中难以溶解。基于此，在选择溶剂时，N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和DMSO都可作为溶剂。但DMF稳定性较差，易产生杂质，故选择DMSO为溶剂，效果较好，能满足试验要求。

ICH[3]和2010年版《中国药典》[4]都规定，在药品中甲醇、三氯甲烷、甲苯均属于第2类限制性残留溶剂，限度分别为0.3%、0.06%、0.089%；丙酮属于第3类低毒性残留溶剂，应控制其残留量，限度为0.5%。本试验5批样品中甲醇、丙酮、三氯甲烷、甲苯均未检出，符合规定。

一般对含卤素的溶剂采用电子捕获检测器（ECD）进行检测，以获得更高的响应值，周妍等[7]建立的测定非那雄胺中的二氯甲烷和三氯甲烷2种有机溶剂残留量的方法中就是使用ECD。但因为三氯甲烷的限度为0.06%，FID的灵敏度已能满足检测要求；另外从生产工艺控制上来说，同时完成甲醇、丙酮、三氯甲烷及甲苯这4种溶剂的检测，仅采用FID的方法更简便、经济，因此，本方法选择FID。

由于合成工艺的不同、所用溶剂不同，非那甾胺原料药中可能残留的有机溶剂不同。刘继华等[8]综合5家药厂的合成工艺，建立了同时测定非那雄胺中11种有机溶剂残留量的方法。本研究中需要检测的非那甾胺原料药在合成过程中主要使用了甲醇、丙酮、三氯甲烷及甲苯等这4种有机溶剂，因此建立了检测非那甾胺原料药中这4种有机溶剂残留量的方法。

本方法4种有机溶剂的检测限为0.0216～10.93 μg/ml，灵敏度可以满足非那甾胺原料药中有机溶剂残留量测定的需要。

[1]Gormley GJ.Finasteride:a clinical review[J].Biomed Pharmacother，1995，49（7/8）:319.

[2]Keith D，Kaufman MD，Elise A，et al.Finasteride in the treatment of men with androgeneticalopecia[J].J Am Acad Dermatol，1998，39（4）:578.

[3]周海钧.药品注册的国际技术要求:质量部分[M].北京:人民卫生出版社，2001:343.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:附录204-206.

[5]吴春丽，张俊霞，史云涛，等.顶空毛细管气相色谱法测定来曲唑原料药中有机溶剂残留量[J].中国药房，2010，21（17）:1601.

[6]姜建国，宋更申，张西如，等.顶空气相色谱法测定洛伐他汀原料药中的有机溶剂残留量[J].中国药房，2011，22（17）:1607.

[7]周妍，刘波平，罗香，等.顶空毛细管气相色谱法测定非那雄胺中有机溶剂的残留量[J].分析测试学报，2007，26（1）:131.

[8]刘继华，刘屹，李慧义，等.气相色谱法测定非那雄胺中11种有机溶剂残留量[J].药物分析杂志，2009，29（3）:475.