参松养心胶囊对兔心肌梗死后交感神经重构的影响

徐 红

(泰山医学院附属泰山医院心内科，山东泰安 271000)

近年来研究发现心肌梗死后存在心脏自主神经的增生和空间分布异常，即神经重构现象。心肌梗死后再生重构纤维以交感神经为主，在围梗死期心肌修复过程中交感神经重构是产生心源性猝死的重要原因［1］。酪氨酸羟化酶(TH)可用于标记心脏交感神经纤维以探讨心肌梗死后心律失常与神经重构的相关机制［2－5］。参松养心胶囊(SSYX)是中药复方制剂，具有明显抑制心律失常作用。以往大量动物实验证明，SSYX抗心律失常的作用与其多离子通道阻滞有关，也与其抑制心室重构的非离子通道阻滞作用有关［6］。本研究在心肌梗死早期应用SSYX干预8周后，采用电生理试验和免疫组织化学的方法探讨SSYX在心肌梗死后交感神经重构中的作用。

1 材料与方法

1．1 动物模型的制备

50只新西兰大白兔普通级，编号 SCXK(鲁)20050015，2．5 ～3 kg，由山东中医药大学实验动物中心提供。

MI模型制备:3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉，固定于手术台备皮。沿胸骨中线切开皮肤，长约3．0 cm，暴露胸骨及肋软骨。贴紧胸骨左缘剪断第4～5肋骨，以乳突撑开器撑开切口，暴露纵隔及心脏，保持两侧胸膜完整，剪开心包，暴露出冠状动脉。左心耳下缘至心尖部的中下1/3处用6/0线穿过心肌浅层缝扎前降支，记录心电图。心电图示ST段抬高，且结扎水平以下心肌局部颜色变暗，搏动减弱，观察20分钟后逐层关胸。

1．2 实验动物的分组

35新西兰兔MI模型制备后，30只存活，随机分为心肌梗死+参松养心胶囊组(SSYX组，n=15)和心肌梗死组(MI组，n=15)。SSYX组自术后第1天给予参松养心胶囊药粉0．8 g/kgμd灌胃;MI组给予0．9%氯化钠5 ml/kgμd灌胃;另取15只兔作为假手术组(Sham组)，冠状动脉穿线但不结扎，同期喂养8周。

1．3 电生理试验

术后8周所有成模兔以3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉，心电监护，开胸，充分暴露心脏左室游离壁，缝制心包吊床。2支直径0．3 mm起搏电极，相距0．3 cm，在梗死边缘区刺入2 mm，Sham组起搏电极放置在心脏的相应部位。应用心脏电生理刺激仪(DF-5A型，苏州市东方电子仪器厂)行S1S2刺激，以－5 ms逐步递减直至诱发室速或室颤或心肌不应期。以S1S2刺激如未诱发出室速或室颤，则在不应期的基础上增加30 ms，加发S3重复递减刺激，和S1S1持续刺激8分钟;如未达刺激终点停止刺激5分钟后重复上述步骤。刺激终点:诱发出持续性单形性室性心动过速(MVT);直接诱发出心室颤动(Vf)、心室扑动(VF)或多形性室性心动过速(PVT);完成所有操作仍未诱发室性心律失常。

1．4 免疫组织化学法

电生理试验完毕后，立即取下心脏，生理盐水洗净，各组动物均选取梗死灶周(梗死区苍白边缘3 mm)或相应部位、非梗死左室游离壁心肌(远离梗死区苍白边缘2 cm)，10%中性甲醛固定自作蜡块，制成4 μm切片。一抗为酪氨酸羟化酶抗体(Millipore，美国)，根据二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(博士德公司)说明，采用SABC法进行免疫组织化学检测，DAB显色，复染后封片。

1．5 神经纤维密度及分布测定

参照Cao等［4］报道方法观察神经纤维形态、分布以及密度。选择梗死灶周和血管周围作为主要观察部位，如果无法确定损伤心肌或无心肌损伤存在，测定包含最多神经结构区域内的神经纤维密度。在40×物镜视野下采用Image-Pro Plus 4．0图像处理分析软件自动识别TH阳性神经纤维，计算TH阳性神经纤维或结构在选区中所占的面积，用(μm2/mm2)表示。以3个包含最多神经结构视野的神经密度的平均值代表该玻片的神经密度。

1．5 统计学分析

2 结果

2．1 动物的基本情况

制作MI模型过程中，心电图I和avL导联ST段弓背上抬，部分实验兔心电图I、II、avF导联ST段弓背上抬，冠状动脉结扎线以下局部心肌颜色呈暗紫色，搏动减弱。模型制作过程中5只兔死亡，Sham组无相应变化。二次开胸行电生理试验时，MI组和SSYX组心电图可见病理性Q波，梗死区心肌呈苍白色;Sham组无相应变化。

2．1 各组间电生理参数

在程序电刺激试验中，与Sham组相比，MI组梗死灶周心肌有效不应期(ERP)明显延长(P＜0．01)。经参松养心胶囊干预后，SSYX组较 MI组ERP有所缩短(P＜0．05)。Sham组有2例(2/15，13．3%)诱发出心室颤动(Vf);MI组有3例(2/15，13．3%)诱发出室性心动过速(VT)，5例诱发出Vf(5/15，33．3%)，室性心律失常(VA)总诱发率为46．7%。而 SSYX 组有 1例(l/15，6．7%)诱发出VT，3 例诱发出 Vf(3/15，20．0%)，VA 总诱发率为26．7%。VA总诱发率在各组间均有显著性差异(表 1)。

表1 各组间电生理数据比较

2．2 神经纤维形态、密度及空间分布

Sham组TH阳性神经多分布于血管周围和心肌束间的结缔组织中，走行与心肌细胞方向一致;MI组TH阳性神经空间分布紊乱，在心肌束间的结缔组织、小血管周围以及梗死与存活心肌相交错的梗死灶周均有分布，多聚集于梗死灶周，且部分神经纤维粗大，甚至聚集成束，密度较Sham组增高(P＜0．01)。经参松养心胶囊干预8周后，SSYX组梗死灶周TH阳性神经密度降低，形态和空间分布趋于正常化，走向趋于与心肌纤维方向一致，粗大及聚集纤维少见。非梗死左室游离壁MI组TH阳性神经密度较Sham组有所增加，主要分布于血管和心肌束间的结缔组织中，可见部分聚集。(P＜0．05)，SSYX组与Sham组无明显差异(表2，图1)。

表2 各组梗死灶周和非梗死左室游离壁TH阳性神经纤维密度比较(±s)

表2 各组梗死灶周和非梗死左室游离壁TH阳性神经纤维密度比较(±s)

注:与 Sham 组相比，*P ＜0．01;与 MI组相比，#P ＜0．01。

组别 梗死灶周神经密度(μm2/mm2) 左室游离壁神经(μm2/mm2)2533±173 2343±177 SSYX 组 2823 ±181# 2445 ±159#［P=0．374 vs．Sham］MI组 3505±235* 3179±190 Sham组*

图1 免疫组织化学标记梗死灶周和左室游离壁TH阳性神经纤维

A Sham组梗死灶周TH阳性神经纤维分布规律，形态纤细与走向肌纤维平行。B MI组梗死灶周TH阳性神经纤维分布紊乱，形态各异，数目明显增多。C SSYX组梗死灶周TH阳性神经纤维数目减少，形态、分布接近正常，走向大致与肌纤维平行。

D Sham组非梗死左室游离TH阳性神经纤维分布规律，形态纤细与走向肌纤维平行。E MI组非梗死左室游离壁TH阳性神经纤维分布较紊乱，数目增多。F SSYX组非梗死左室游离壁TH阳性神经纤维形态、分布接近于Sham组。

3 讨论

近年来大量研究证实MI后心脏自主神经出现再生和增生，交感神经密度和空间分布发生改变，在围梗死期的修复过程中交感神经重构与心源性猝死密切相关［4］。Nori等［2］研究发现心肌梗死后 2 天内存在心肌失神经支配，但从第6天至第105天，神经纤维逐渐增多，且再生神经纤维大多数呈TH阳性，证实再生神经纤维以交感神经为主。再生神经末稍可形成类似于神经瘤样的schwann细胞轴突复合体，这种复合体可以在不恰当的时间释放不恰当量的NE［7］，从而导致心肌对室性心律失常的易感性增高，促发心源性猝死。

本研究结果表明，MI后8周在梗死灶周及非梗死左室游离壁均存在不同程度的交感神经的再生及增生，明显高于Sham组，尤其在梗死灶周TH阳性神经纤维密度增加，分布紊乱，再生纤维直径粗大，数量增多，且有的聚集呈束，该结果与既往文献报道相似［8，9］。

经参松养心胶囊治疗后神经重构得以改善，SSYX组TH阳性神经密度较MI组显著降低，神经纤维形态和分布更接近于Sham组。动物实验［11］发现在结左冠状动脉前降支后1周(MI愈合期)，梗死灶周是最易诱发VT/Vf的地带，梗死周边区神经密度显著高于梗死远端［10］。

本研究电生理实验显示MI组较Sham组，梗死灶周心肌有效不应期延长(122．6±8．3 ms)，室性心律失常发生率明显增高(46．7%)，经SSYX干预后，有效不应期延长恢复至(106．1±6．5 ms)，室性心律失常诱生率降低(26．7%)。近年来大量研究表明MI后交感神经再生、过度增生和局部空间分布的异常，即交感神经重构，与电重构和心肌组织重构共同作用，可能是促使MI后发生室性心律失常及猝死的重要原因。本研究结果表明，MI后早期参松养心胶囊干预使MI后交感神经的形态和空间分布趋于正常化。参松养心胶囊可能通过改善心脏交感神经支配的不均一性，降低心肌间电生理的异质性;并改善再生神经的异常功能，增加心肌电生理稳定性，从而降低MI后室性心律失常的发生率。

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