用鸽鸡红细胞进行禽流感血凝抑制试验的比较

胡祖余，王举勇，栗 新

（安徽省六安市裕安区动物疫情测报站，安徽 六安237000）

禽流感是由A型流感病毒引起的畜禽传染病，可导致养禽业的重大经济损失，还可引发动物疫情传播，甚至威胁人类健康。肉鸽养殖作为特种养禽业，接种禽流感疫苗是防控重大动物疫病的重要环节。在评价肉鸽免疫禽流感疫苗免疫效果时［1－2］，常采用国家技术监督局出版的《高致病性禽流感诊断技术》（GB／T18936－2003）［3］，该标准要求采用鸡红细胞作为指示细胞。禽流感病毒既可凝集鸡、鸭、鹅红细胞，也可凝集鸽红细胞。部分地区肉鸽饲养量较大，鸽红细胞的采集比较容易，那么如果用鸽红细胞作指示细胞进行禽流感血凝抑制试验是否可行，与鸡红细胞相比较结果是否一致，特进行本次试验。

1 材料与方法

1．1 材料 H5亚型（H5N1Re－5）禽流感灭活疫苗免疫的鹅、鸡、鸽血清各20份；H5（Re－5）禽流感血凝抑制抗原（哈尔滨维科生物技术有限公司提供，批号：201101）；未经禽流感疫苗免疫的1%鸽、鸡红细胞（自配）；微量振荡器、恒温水浴锅、离心机、移液器等。

1．2 方法 分别用鸡和鸽红细胞测定H5抗原的血凝价。采用水禽血清处理方法处理被检血清：56℃恒温水浴30min，再加等量1%鸡或1%鸽红细胞作用30min，3 000r／min离心3min取上清待检。样品HI抗体效价检测方法参照文献［1］。

1．3 试验分组 A组：被检血清不作处理，鸡红细胞作指示细胞；B组：被检血清不作处理，鸽红细胞作指示细胞；C组：被检血清用鸡红细胞处理，鸡红细胞作指示细胞；D组：被检血清用鸡红细胞处理，鸽红细胞作指示细胞；E组：被检血清用鸽红细胞处理，鸡红细胞作指示细胞；F组：被检血清用鸽红细胞处理，鸽红细胞作指示细胞。

2 结果

2．1 用鸡、鸽两种红细胞进行血凝试验（HA），测定H5抗原的血凝价都为211。

2．2 鹅血清经分组检测，H5HI抗体效价见表1。

表1 鹅血清H5效价分组检测结果 （log2）

由表1可见，在检测鹅血清禽流感抗体效价时，当用鸡红细胞作指示细胞时，会出现非特异性凝集现象（A组：16／20），改用鸽红细胞后，情况未得到改善（B组：15／20），而凝集孔数却有所增加，且抗体效价相差较大。因此，鸽红细胞不能解决鹅血清的非特异性凝集现象。在对鹅血清进行处理后（C、D、E、F组），只有C组非特异性凝集现象明显减少（2／20），且检测结果与A组较接近；而其他3组要么凝集孔数增加（D、F组），要么检测结果与A组差异较大（E组）。由此可见，在检测鹅血清禽流感HI抗体时，鸽红细胞与鸡红细胞相比，没有任何优越性，不适于作为指示细胞。

2．3 鸽血清经分组检测，H5抗体效价见表2。

表2 鸽血清H5抗体效价分组检测结果 （log2）

由表2可见，在检测鸽血清禽流感抗体效价时，用常规方法检测（A组），会出现一定比例的非特异性凝集现象（8／20）；而采用鸽红细胞作指示细胞后，非特异性凝集现象全部消失（B组）；如果对鸽血清仿照水禽血清处理方法，分组处理后（C、D、E、F组），用鸽红细胞作指示细胞的D、F非特异性凝集现象全部消失，用鸡红细胞作指示细胞的C、E虽有非特异性凝集现象发生，但发生比例（4／40）和凝集孔数大大下降。从检测值来看，用鸡红细胞作指示细胞的A、C、E三组偏低，比用鸽红细胞作指示细胞的B、D、F三组检测值平均低一个抗体滴度，差异极显著。所以在检测鸽血清禽流感抗体效价时，用鸽红细胞作指示细胞的检测效果明显优于鸡红细胞。

2．4 鸡血清经分组检测，H5抗体效价见表3。

表3 鸡血清H5抗体效价分组检测结果 （log2）

由表3可见，在检测鸡血清禽流感抗体效价时，用鸡红细胞作指示细胞的A、C、E三组结果基本一致；而用鸽红细胞时，则不论是未对血清进行处理的B组，还是进行过处理的D、E组，都不可避免地出现了多孔的非特异性凝集现象，且检测结果与A组相比，差异较大。因此，鸽红细胞不适于用作鸡血清的禽流感抗体检测。

3 分析与讨论

3．1 用鸡、鸽红细胞进行血凝试验时，测定抗原血凝价一致，说明禽流感抗原对两种红细胞的凝集能力基本相同。

3．2 通过本次试验可以看出，鸽红细胞除了可以作为鸽血清禽流感抗体检测的指示细胞外，检测其他家禽血清时，会出现较多的非特异性凝集现象，严重地影响了检测结果，不适于进行其他禽类血清的禽流感抗体检测。

3．3 本试验还可以看出，用鸽红细胞检测鸽禽流感免疫血清时，检测效果明显优于鸡红细胞。这也验证了同源红细胞检测同源禽免疫血清，可排除非特异性凝集现象，提高检测准确率［5－6］。

［1］ 胡玉军，冉多良，左勇．不同禽流感疫苗接种肉鸽的免疫效果试验［J］．新疆畜牧业，2010（3）：37－38．

［2］ 李兴玉 ，王强，杨晓梅，等．禽流感（H5＋9）二价灭活疫苗对珍禽的免疫效果观察［J］．中国人兽共患病学报，2011，27（7）：674－676．

［3］ 国家标准局．GB／T18936－2003，高致病性禽流感诊断技术［S］．

［4］ 朱燕秋，张济培，谢海燕，等．水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨［J］．中国兽医杂志，2009，45（2）：42－43．

［5］ 胡祖余，徐宜芳，潘声友，等．不同禽红细胞对水禽禽流感血凝抑制试验结果的影响［J］．中国家禽，2007（5）：38．