连翘颗粒剂的急性亚急性毒性试验研究

吴 悦，陈俭清，赵玉莲，李贤贤，李 鹤，李艳华

(东北农业大学动物医学院，哈尔滨 150030)

连翘颗粒剂是针对现阶段细菌的广泛耐药性［1，2］，而研制出的能减少耐药性的中成药制剂，具有清热解毒之功效，主要用于预防和治疗猪链球菌引起的疾病，有效的解决了猪链球菌耐药性的问题［3－6］。其主要成分连翘是木犀科连翘属［7］，具有抗菌、强心、利水、清热解毒等功效。为了对连翘颗粒剂的安全性进行客观评价，根据农业部新兽药一般毒性试验技术要求［8］，对其进行了急性毒性试验和亚急性毒性试验研究，为新药的临床阶段提供理论依据。

1 材料

1．1 试验动物 清洁级昆明系小鼠，体重在17～20 g之间，雌雄各半，雌性未产无孕，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1．2 试验药物及化学试剂 连翘颗粒剂，自行研制的耐药抑制剂其主要成分是连翘酯苷。具有清热解毒，散结消肿之功效，临用前用蒸馏水配成相应的浓度;测定生化指标(GPT、GOT、AKP、肌酐和尿素氮)的试剂盒(批号:20111010)，南京建成生物工程研究所。

1．3 试验仪器 BT224S型电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司;7504型紫外分光光度计，上海精科实业有限公司;DK－8D型电热恒温水槽，上海精宏实验设备有限公司;TGL－16G离心机，湖南星科科学仪器有限公司;DH6000A型恒温箱，天津市泰斯特仪器有限公司;光学显微镜等。

2 方法

2．1 急性毒性试验 取20只小鼠随机分为两组，每组雌雄各半。试验组一次性灌胃给药100 g/kg(最大给药剂量)，对照组灌以等容积的生理盐水。连续观察7 d。根据上下法［9］，找出0%和100%的死亡率的药物浓度。

2．2 亚急性毒性试验

2．2．1 动物分组及给药剂量 将80只小鼠随机分成四组，每组20只，雌雄各半。分别为连翘颗粒剂高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组，给药剂量根据预试验结果，按最大给药量从高到低分别给药为100 g/kg、33．3 g/kg、10 g/kg，对照组灌于等量的生理盐水。用金属灌胃器经口给药，每天2次。试验期间所有小鼠标准饮食，自由饮水。

2．2．2 检测指标 分别在给药的第7日和第14日时，对各组小鼠进行一般症状检查。将小鼠断尾采血，然后对其血液生理指标 (血红蛋白、红细胞、白细胞、白细胞分类计数)进行测定。将小鼠进行眼球采血后，分离血清，进行血液生化指标(GPT、GOT、AKP、肌酐和尿素氮)的检测。

2．3 统计学处理 对一般症状检查采用 t检验［10］方法进行统计学分析。血液生理生化试验结果数据均采用平均值±标准差(X±s)的形式表示。用Spss17．0中One－way AVONA的LSD法进行差异显著性分析。

3 结果

3．1 急性毒性试验最大耐受量测定结果 当给药量5000 mg/kg时，致死量仍然为0%，无法测出半数致死量(LD50)，因受试药物的浓度或体积限制，只能测出最大耐受量。

以100 g/kg的药物浓度给小鼠灌胃，给药当天小鼠被毛光滑，有腹泻症状，粪便呈黄褐色，采食、活动减少;第2日后小鼠采食量、活动量及粪便情况都恢复正常，与空白组无明显差异。到第7日时，小鼠未出现死亡状况。

3．2 亚急性毒性试验结果

3．2．1 连翘颗粒剂对昆明系小鼠一般症状的影响

在试验期间，均未发现有小鼠因药物原因而出现的死亡状况。试验中各组小鼠的进食量、饮水量、精神状况、被毛光泽度无异常变化。各组小鼠的体重均在正常范围内变化。结果表明各组差异不显著，见表1。

3．2．2 连翘颗粒剂对昆明系小鼠血液生理指标的影响

连翘颗粒剂对昆明系小鼠生理指标的影响结果见表2。3个剂量组的血红蛋白、红细胞数、白细胞数、淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比与对照组间差异均不显著(P＞0．05)。红细胞计数各组14 d比7 d相比较，除高剂量组外其他三组的值略有升高，其中中低剂量组增加幅度较大。白细胞计数7 d和14 d各组比较变化均不明显，14 d与7 d各剂量组相比较均有不同程度的降低。淋巴细胞百分比和中性粒细胞百分比在第14日时都比第7日时有较大幅度的增加。血红蛋白在第14 d时除高剂量组降低外，其他三组均有不同程度的增加。

表1 连翘颗粒剂对昆明系小鼠体重的影响(n=20)

表2 连翘颗粒剂对昆明系小鼠血液部分生理指标的影响(X ±s，n=20)

3．2．3 连翘颗粒剂对昆明系小鼠生化指标的影响连翘颗粒剂对昆明系小鼠生化指标的影响结果见表3。第7日高剂量组的GOT值高于其他三组，在第14日时高剂量组的GOT与对照组差异显著(P＜0．05);在第14日，各组的GPT均有不同程度的增加;除中剂量组的CR值减少，其他三组的CR值有增加;BUN的值均有不同程度的增加，其中对照组和中剂量组的增加幅度较大;空白组和高剂量组的AKP增加，而中低剂量组的AKP减少。除第14日的GOT高剂量组与对照组差异显著(P＜0．05)外，其他各组的各项指标均差异不显著(P＞0．05)。

表3 连翘颗粒剂对昆明鼠部分生化指标的影响(X ±s，n=20)

4 讨论

连翘颗粒剂为自主研发的耐药抑制剂，主治猪链球菌引起的相关疾病。连翘颗粒剂是向连翘提取物中加入乙醇，经滤过、回收、浓缩等步骤后，加入糊精和糖粉所得到的混合物制备成颗粒状所制成的［11－12］。连翘是我国传统中药，已被载入药典，用于治疗风热感冒、高热烦渴等症状，但目前，连翘在用于动物疾病的防治方面的研究较少［13］。所以连翘颗粒剂的研发，目的是要解决由猪链球菌所引起的相关疾病的耐药性问题。

从连翘颗粒剂的急性、亚急性毒性试验结果分析，在用药期间各剂量组的昆明系小鼠均未出现因药物原因而死亡的情况。根据新兽药一般毒性试验技术要求，短期给予药物毒性较低，比较安全。在试验期间，小鼠的体重均有不同程度的增加。各剂量组之间差异不显著，表明药物对小鼠的食欲及健康状况没有影响。

血液生理指标是检验药物毒性的很重要的指标，试验结果表明，红细胞数、白细胞数、中性粒细胞数和淋巴细胞数、血红蛋白的含量与对照组比较差异均不显著，故判断药物的毒性低。已有研究表明，根据化学物急性毒性(LD50)剂量分级表，连翘酯苷分级为低毒［14］。而连翘酯苷不止对实验动物本身，对胚胎、胎儿和致畸性也均无明显毒性［15］。由此可见，连翘酯苷作为连翘颗粒剂的主要成分，在以往的实验中证实了其低毒安全的特性。

血液生化指标是测定药物对肝肾的毒性作用，本试验结果表明，除第14日的谷草转氨酶(GOT)测定项的高剂量组出现了差异显著(P＜0．05)外，其他各剂量组的血液生化指标均无明显差异。因转氨酶是反映肝脏功能的重要指标，且只有肝脏受到严重伤害时谷草转氨酶才会出现偏高，可以看出，长期服用高浓度的该药物对肝脏有一定的损害，但中、低剂量组与对照组相比差异不显著，说明中、低剂量比较安全。

研究发现连翘酯苷在体内外实验中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌均有较好的抑制作用［16－17］，应用前景广泛。近期研究表明，连翘中苯乙醇苷类成分具有较强抗菌活性，在评价连翘及其以抗菌为主要功效的制剂质量时，以连翘酯苷作为主要特征成分比连翘苷更合适［18］，但其抗菌作用机制有待于进一步的研究。

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［8］ 中华人民共和国农业部．新兽药一般毒性试验技术要求［S］．

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