HPLC测定痛风贴中姜黄素的含量

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(长春中医药大学，长春 130117)



·方药研究·

HPLC测定痛风贴中姜黄素的含量

苗艳平，王丹，廉冬雪，张小东，王沛*

(长春中医药大学，长春 130117)

目的 建立痛风贴制剂的质量控制标准。方法 采用高效液相色谱法(HPLC)测定姜黄素的含量，色谱柱：Agilent C18色谱柱(46 mm×250 mm，5 Micron)；流动相：乙腈-4%醋酸(48∶52)；检测波长：428 nm,柱温：(30±2) ℃。结果 姜黄素在0.025～0.150 μg范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为99.7%，RSD为0.7%。结论 该试验方法操作简单，提取物性质稳定，重复性好，检测结果准确、可信，可为痛风贴制剂质量控制提供科学依据。

痛风贴；姜黄素；高效液相色谱法

痛风贴制剂是以姜黄、萆 、木瓜、乌药等为主要原料药制成的纯中药复方制剂，具有活血化瘀，消肿止痛，排除血尿酸，疏风通络等功效。本文研究采用HPLC测定痛风贴中姜黄素的含量，进一步完善该制剂质量标准研究。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器 LCC-10AT型高效液相色谱设备，期中包含LC-10AT输液泵设备、LC-15C输液泵、SPD-10AV紫外可见检测仪器、色谱工作站；DK-S26型电热恒温水浴锅；AL204电子天平；KQ-250型超声波处理器。

1.2 试剂 甲醇色谱纯，冰醋酸优级纯,乙腈色谱纯,其余化学试剂均为分析纯。

1.3 药品 姜黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号A2K8-8GZG，规格约20 mg)；姜黄购自吉林大药房，经长春中医药大学鉴定教研室鉴定为药典所载正品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Agilent C18色谱柱(46 mm×250 mm，5 Micron)；流动相：乙腈-4%醋酸(48∶52)；检测波长：428 nm，柱温：(30±2)℃；理论塔板数按姜黄素峰计算，不低于4 000。

2.2 试液的配制

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取姜黄素对照品适量，加乙腈-4%醋酸(48∶52)溶解并制成每1 mL含姜黄素10 μg的溶液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为对照溶液[1]。

2.2.2 供试品溶液的制备 取复方药材适量，研成细粉，取粉末约1 g，精密称定，置实验烧瓶中，精密吸入甲醇25 mL，密塞，称定重量，加热回流提取30 min，称定重量，再用甲醇补足回馏提取损失的重量，摇匀，滤过，初滤液另器盛装，再接取续滤液，精密吸取续滤液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液[2]。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 取除姜黄以外的其他药材，按药典要求制备阴性对照品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液[3]。

2.3 系统适应性实验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按2.1项下色谱条件分别进样20 μL。结果：阴性样品色谱在姜黄素相应的位置上无吸收峰，表明阴性样品对测定无干扰。

2.4 线性关系试验 分别吸取对照品溶液2.5、5、7.5、10、12.5、15 μL注入液相色谱设备，测定。以标准品姜黄素的进样量(X)为横坐标，以测试设备所获峰面积(A)为纵坐标[4]，进行数理统计的线性回归处理，得回归方程：Y=7 7750X112 510(r=0.999 8)。结果表明，姜黄素在0.02～0.15 μg范围内与测试设备所获峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取姜黄素对照品溶液10 μL，按上述色谱条件连续进样6次,测定姜黄素峰面积的RSD为0.90%。实验结果表明所用实验仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液20 μL，室温放置，分别于0、1、2、3、6 h进样，测定其姜黄素面积积分值，峰面积的RSD为1.87%。实验表明所制供试品室温放置6 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批复方样品粉末，按上述方法制备供试品实验溶液，按上述色谱条件，测定其姜黄素含量，连续测定6次。结果平均质量含量为1.086%,RSD为1.47%。表明本品含量测定方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 采用加样回收率测定法[5],分别取已知含量的供试品粉末共9分，分别加入姜黄素对照溶液(0.1 mg/mL)4、5、6 mL各3分，分别按上述方法制备供试品溶液[6]。各取20 μL注入液相色谱仪器中,记录实验结果，同时计算回收率。结果平均回收率为99.7%，RSD为0.74%[7]。

2.9 样品含量测定 精密量取上述所制供试品溶液20 μL，注入同一台液相色谱仪器，按外标法测定，以峰面积计算，结果测得制剂中姜黄素含量为1.035%。

3 小结

通过对试验过程的多方考察和验证，经过科学的数理统计学方法的校验等的研究，笔者确定，本试验仪器和方法的精密度良好，试验方法操作简单，提取物性质稳定，质量检测方法和结果准确、可信。

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[4]杨以平,张师愚.HPLC法同时测定如意金黄散中大黄素、姜黄素、小檗碱的含量[J].辽宁中医药大学学报,2012,14(9):213-214.

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DeterminationofCurcuminContentinGoutpatchbyHPLC

MIAO Yanpin,WANG Dan,LI Dongxue,ZHANG Xiaodong,WANG Pei*

(Changchun university of Chinese medicine,Changchun 130117,China)

ObjectiveTo establish Gout-patch quality control standards.MethodsUsing HPLC to determine the content of curcumin,chromatographic column:Agilent C18 chromatographic column (46 mm×250 mm,5 Micron);Mobile phase:acetonitrile and 4% acetic acid (48:52);wavelength by detection:428 nm and column temperature:(30±2)℃.ResultsCurcumin has a good linear relationship with peak area in the scope of 0.025 ug～0.025 ug.The average recovery was 99.67% and RSD was 0.74%.ConclusionThe test method operation is simple and the properties of extractives are stable.It has good repeatability.The detection results are accurate and credible which can provide scientific basis for a Gout-patch quality control.

gout-paste;curcumin;HPLC

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.01.008

吉林省中医药管理局中药研究课题(2012-049)。

苗艳平(1971-)，女，大学本科，实验师。研究方向：药代动力学与质量标准研究。

] 王 沛，教授，硕士研究生导师，电话：13578701293，电子信箱:wapa1988@163.com。

R284.1

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2095-6258(2014)01-0020-03

2013-09-29)

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