eRF3b片段对Con A诱导的急性肝损伤的保护性作用研究

刘志鹏，员美娜，梁 辰，刘斯静，吴晓雪，刘殿武*(.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，河北 石家庄 05007；2.内蒙古自治区呼和浩特市食品化妆品监督管理所学校食堂食品安全监管科，内蒙古 呼和浩特 0000；.河北医科大学公共卫生学院社会医学与卫生事业管理教研室，河北 石家庄05007；.河北医科大学期刊社，河北 石家庄 05007)

·研究快报·

eRF3b片段对Con A诱导的急性肝损伤的保护性作用研究

刘志鹏1,2，员美娜3，梁 辰1，刘斯静4，吴晓雪1，刘殿武1*
(1.河北医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室，河北 石家庄 050017；2.内蒙古自治区呼和浩特市食品化妆品监督管理所学校食堂食品安全监管科，内蒙古 呼和浩特 010010；3.河北医科大学公共卫生学院社会医学与卫生事业管理教研室，河北 石家庄050017；4.河北医科大学期刊社，河北 石家庄 050017)

肝炎,自身免疫性；伴刀豆球蛋白A；eRF3b片段

肝脏疾病是一类严重的公共卫生问题，很多原因均可导致肝脏发生病变，长期肝损伤将最终发展为肝衰竭[1]。伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的急性肝损伤模型是一个较理想的T细胞介导的肝炎小鼠模型，常用来模拟人病毒性和自身免疫性肝病[2]。本课题组早期利用弱阳离子磁珠纯化和基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱分析寻找肝硬化和肝癌潜在的早期血清生物学标志物的过程中，分离得到一个相对分子质量为4 210 000的多肽[3]，进一步分析显示该多肽为真核肽链释放因子3b(eukaryotic peptiae chain release factor GTP-bind subunit,eRF3b)的一个36个氨基酸片段，其在慢性肝炎患者中表达水平高于肝硬化和肝癌患者。本研究观察人工合成的该eRF3b片段对Con A诱导的小鼠急性肝损伤的预防及治疗作用，旨在为临床治疗肝病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物来源及分组：本研究使用6～8周龄雄性Balb/c小鼠124只，购于河北省实验动物中心。本研究共分为4部分实验，分别为预防性给药实验、预防性给药生存分析实验、治疗性给药实验、治疗性给药生存分析实验，将小鼠随机分为14组。其中，预防性给药实验4组，分别为正常组、模型组、阳性组及多肽组，每组8只小鼠；预防性给药生存分析实验3组，分别为模型组、阳性组及多肽组，每组10只小鼠；治疗性给药实验4组，分别为正常组、模型组、阳性组及多肽组，每组8只小鼠；治疗性给药生存分析实验3组，分别为模型组、阳性组及多肽组，每组10只小鼠。

1.2 处理方式

1.2.1 预防性给药实验：模型组、阳性组及多肽组小鼠分别给予生理盐水0.25mL、地塞米松500μg/kg或eRF3b片段150μg/kg，1h后均给予12mg/kg Con A。正常组小鼠2次均给予生理盐水0.25mL。Con A注射12h后处死小鼠，采集血清用全自动生化分析仪检测各组血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平；分离肝组织，石蜡包埋后进行HE染色。

1.2.2 预防性给药生存分析实验：模型组、阳性组及多肽组分别注射生理盐水0.25mL、地塞米松500μg/kg及eRF3b 150μg/kg片段，1h后均给予致死剂量25mg/kg Con A，观察各组小鼠Con A注射后72h内的生存情况，进行生存分析。

1.2.3 治疗性给药实验：模型组、阳性组及多肽组小鼠均给予12mg/kg Con A，0.5h后分别给予生理盐水0.25mL、地塞米松500μg/kg或eRF3b片段150μg/kg。正常组小鼠2次均给予生理盐水0.25mL。检测Con A注射12h后各组血清ALT和AST水平，肝组织进行HE染色。

1.2.4 治疗性给药生存分析实验：模型组、阳性组及多肽组小鼠均给予致死剂量25mg/kg Con A，0.5h后分别给予生理盐水0.25mL、地塞米松500μg/kg及eRF3b片段150μg/kg，观察各组小鼠Con A注射后72h内的死亡情况，进行生存分析。

1.3 统计学方法：应用SPSS13.0进行统计学分析。多组均数比较采用Kruskal-WailH检验，组间两两比较采用LSD检验；生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验。P<0.05差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 eRF3b片段预防性给药对Con A所致肝损伤的作用：Con A注射12h后，模型组小鼠血清ALT和AST水平均显著高于正常组(P<0.01)；阳性组和多肽组血清ALT和AST水平均显著低于模型组(P<0.01)；多肽组ALT水平高于阳性组(P=0.043)，AST水平与阳性组差异无统计学意义(P=0.768)。HE染色结果显示，正常组小鼠肝组织结构清晰、有序排列，模型组小鼠肝组织中出现大片状坏死区域及淋巴细胞浸润，其余各组中均未见明显坏死区域。

2.2 eRF3b片段预防性给药对给予致死剂量Con A小鼠生存率的影响：模型组、阳性组及多肽组小鼠Con A注射后72h生存率分别为20%、80%和70%，中位生存时间分别为11、72和72h。多肽组和阳性组小鼠生存率均显著高于模型组(P<0.01)，生存时间显著延长；而多肽组与阳性组之间差异无统计学意义(P=0.668)。

2.3 eRF3b片段治疗性给药对Con A所致肝损伤的作用：Con A注射12h后，模型组小鼠血清ALT和AST水平均显著高于正常组(P<0.01)；阳性组和多肽组小鼠血清ALT及AST水平均显著低于模型组(P<0.01)；多肽组ALT和AST水平与阳性组相比差异均无统计学意义(P=0.898、0.840)。HE染色显示，多肽组和阳性组小鼠肝组织中均未见明显坏死区域。

2.4 eRF3b片段治疗性给药对给予致死剂量Con A小鼠生存率的影响：模型组、阳性组及多肽组小鼠Con A注射后72h生存率分别为20%、60%和50%，中位生存时间分别为13、72和58h。与模型组相比，eRF3b片段和地塞米松显著提高了致死剂量Con A诱导小鼠的生存率(P=0.026、0.011)，延长了生存时间；而阳性组与多肽组之间差异无统计学意义(P=0.792)。

3 讨 论

有研究[4]显示，Con A所诱导肝损伤主要表现为血清ALT和AST水平显著升高，肝组织出现广泛坏死和凋亡。本研究中，与正常组相比Con A模型组血清转氨酶水平显著升高，且肝组织中出现典型肝坏死表现和淋巴细胞浸润，结果与文献报道一致。实验显示，eRF3b片段预防性及治疗性给药均显著降低血清ALT和AST水平，同时肝损伤明显减轻。说明eRF3b片段可有效预防和治疗Con A所致肝损伤。进一步研究显示，eRF3b片段预防性及治疗性给药均显著提高经致死剂量Con A处理小鼠的生存率、延长生存时间。因此，有充分理由认为该eRF3b片段对Con A所诱导肝炎有较好的预防和治疗作用。

[1] WANG C,NIE H,LI K,et al.Curcumin inhibits HMGB1 releasing and attenuates concanavalin A-induced hepatitis in mice[J].Eur J Pharmacol,2012,697(1/3):152-157.

[2] SHAO X,QIAN Y,XU C,et al.The protective effect of intrasplenic transplantation of Ad-IL-18BP/IL-4 gene-modified fetal hepatocytes on Con A-induced hepatitis in mice[J].PLoS One,2013,8(3):e58836.

[3] 李曼,贾媛,员美娜,等.真核肽链释放因子eRF3b在人肝组织及体外肝细胞中的表达[J].河北医科大学学报,2012,33(9):1091-1092.

[4] VOLAREVIC V,MITROVIC M,MILOVANOVIC M,et al.Protective role of IL-33/ST2 axis in Con A-induced hepatitis[J].J Hepatol,2012,56(1):26-33.

(本文编辑：许卓文)

2014-10-15；

2014-10-30

河北省卫生厅适用技术跟踪项目(GL2012059)；河北省卫生厅医学科学研究重点课题(20110041)

刘志鹏(1985-),男,内蒙古乌兰察布人，内蒙古自治区呼和浩特市食品化妆品监督管理所医师，医学硕士，从事肝病分子流行病学研究。

*通讯作者。E-mail:liudw56@tom.com

R575.1

B

1007-3205(2014)12-1458-02

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.12.035