C-erbB-2蛋白在贲门癌中的表达及其与预后的关系

陆雪明，王树钦，林松青

C-erbB-2蛋白在恶性肿瘤中的表达及其临床意义正受到人们密切关注，特别是在乳腺癌方面已达成共识[1]，但在贲门癌中有关C-erbB-2蛋白表达的报道较少。本文通过对200例贲门癌手术组织标本使用免疫组化分析方法检测C-erbB-2蛋白的表达情况，分析C-erbB-2蛋白过表达与贲门癌病理类型、分化程度、分期、生存情况等的相关性，从而阐明C-erbB-2蛋白过表达与贲门癌预后之间的关系，为后期贲门癌靶向治疗的研究提供科学依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取2010年1月至2012年6月在揭阳市人民医院经病理确诊且行手术治疗的贲门癌病例200例。其中男147例，女53例，男女比例为2.8∶1。年龄37～76岁，中位年龄61.5岁，其中60岁以下67例，60岁以上(包括60岁)133例。肿瘤最大直径≤5 cm 111例，>5 cm 89例。病理类型：腺癌169例，黏液性腺癌25例，印戒细胞癌6例。分化程度：高分化65例，中分化73例，低分化62例。肿瘤侵犯食管下段8例。无淋巴结转移者71例，有淋巴结转移者129例。按2002年UICC临床分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期73例，Ⅲ期 99例。所有患者术前均未行放、化疗，手术均由同一组人员完成，术后均按2009年版NCCN贲门癌诊疗规范进行随诊及治疗。本研究随访工作截止于2013年12月，中位随访时间38个月，随访率100%。

1.2 方法 采取兔抗人C-erbB-2肿瘤多克隆抗体及免疫组化二步法试剂盒(上海长岛抗体试剂公司)并严格按照说明进行操作。用已知阳性贲门癌标本切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。C-erbB-2蛋白定位于细胞膜。强度标准采用Hoffmann[2]的评判法，免疫组织化学阴性(-)：不染色或<10%的细胞膜染色；免疫组织化学弱阳性(+)：>10%的细胞膜染色较浅或仅有部分膜染色；免疫组织化学中度阳性(++)：>10%的细胞膜或外膜轻到中度染色；免疫组织化学强阳性(+++)：>10%的细胞膜360°强染色或U字形强染色。本次结果判定：阴性结果为免疫组织化学阴性(-)及免疫组织化学弱阳性(+)；中度阳性(++)需经FISH检测C-erbB-2基因有无扩增再作判断；阳性结果(即过表达)为免疫组织化学强阳性(+++)。

1.3 统计学处理 所有分析均在SPSS 13.0统计软件包中进行，方法为χ2检验，生存率分析采用Log-rank检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 C-erbB-2蛋白在贲门癌中的表达情况 在200例中，贲门癌组织C-erbB-2蛋白表达阴性48例，弱阳性44例，中度阳性45例，强阳性63例，强阳性率为31.5%。

2.2 C-erbB-2蛋白在贲门癌中的表达与临床病理因素的关系 具体数据见表1，C-erbB-2在不同性别、年龄、肿瘤大小及食管是否受累中的阳性率的比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。而在组织类型、分化程度、淋巴结转移、浸润深度及TNM分期中，各组 C-erbB-2蛋白的表达阳性率差异有统计学意义(均P<0.05)。

表1 C-erbB-2蛋白表达水平与贲门癌临床病理因素的关系

2.3 C-erbB-2蛋白表达与贲门癌预后之间的关系 本研究随访工作截止于2013年12月，中位随访时间38个月，随访率100%。92例C-erbB-2蛋白表达阴性病例的1年、3年生存率分别为100%、66.3%，45例C-erbB-2蛋白表达可疑阳性病例的1年、3年生存率分别为97.8%、48.9%，而63例C-erbB-2蛋白表达阳性病例的1年、3年生存率分别为95.2%、39.7%。三组3年生存率差异有统计学意义(均P<0.05)。

3 讨论

原癌基因C-erbB-2 (又称HER-2)属于酪氨酸激酶癌基因家族，位于人类第17号染色体长臂的7q21，编码185 ku，具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白(P185)[3]。正常情况下处于非激活状态，若C-erbB-2基因激活，则具有肿瘤转化活性。因为C-erbB-2基因激活与C-erbB-2蛋白表达有较好的相关性，因此检测过度表达的蛋白产物可间接反映C-erbB-2基因状态，从分子水平认识肿瘤的本质[4]。C-erbB-2蛋白在贲门癌组织中的表达阳性率从6%～43%不等[5]，造成如此大差异的原因很多，其中缺乏对贲门癌C-erbB-2蛋白表达结果的判断标准是重要原因之一。本研究采用目前较为认可的Hoffmann评分法对C-erbB-2蛋白表达评分，增加了结果的可信度。本组贲门癌C-erbB-2蛋白的表达主要在细胞膜，阳性率31.5%，高于Gravalos等[6]研究的胃食管连接部癌的25%。本组结果显示在不同性别、年龄、肿瘤大小及食管是否受累等方面C-erbB-2的阳性率组间比较差异无统计学意义(均P>0.05)。在组织学类型方面，印戒细胞癌C-erbB-2阳性表达率为66.7%，明显高于腺癌(30.8%)及黏液性腺癌(28.0%)。另外，本研究结果显示高、中、低分化癌组的C-erbB-2表达阳性率分别为21.5%、30.1%、43.5%，即随组织学分级的增高，其表达阳性率增加。C-erbB-2 过表达提示肿瘤分化程度低，恶性程度高。这与Janehne等[7]的研究报道不符，可能与研究的病例构成、研究方法等有关。本研究还表明淋巴结是否转移及各临床分期C-erbB-2蛋白表达阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)，与韩少良等[4]的研究相似。

本次结果表明C-erbB-2蛋白表达阴性者的生存率明显高于阳性者，两者差异有统计学意义(P<0.05)，但由于病例偏少，且随访时间偏短，结果的统计学意义尚待进一步研究分析，对5年生存率的意义也有待统计分析。陈斌等[8]报道C-erbB-2蛋白表达阳性者中位生存时间显著低于阴性者。2009年发表的TOGA试验结果表明，对免疫组织化学标记C-erbB-2蛋白表达为+++，或C-erbB-2基因表达为++，经FISH检测C-erbB-2基因有扩增的贲门癌患者可用化疗加赫赛汀的治疗方案[9]。因此认为C-erbB-2蛋白表达情况在贲门癌治疗选择中起重要作用。

本研究结果表明C-erbB-2蛋白与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移和临床分期等密切相关，且初步显示出与生存率的相关性。因此，C-erbB-2蛋白是贲门癌预后的一项判断指标。我们将进一步进行C-erbB-2基因检测，继续严格随访病人以完善相关统计学资料，并将更多合适病例入组，同时将进行赫赛汀在贲门癌C-erbB-2蛋白表达阳性病例的临床研究，为后期贲门癌靶向治疗的研究提供依据。

参考文献：

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[5] Meza JJ,Au HJ,Sawyer MB.Trastuzumab for gastric cancer [J].Expert Opin Biol Ther,2009,9(12):1543-1551.

[6] Gravalos C,Jimeno A.HER2 in gastric cancer: a new prognostic factor and a novel therapeutic target[J].Ann Oncol,2008,19(9):1523-1529.

[7] Janehne J,Urmacher C,Thaler HT,et al.Expression of HER2 Pneu oncogene product P185 in correlation to clinicopa_thological and prognostic factors of gastric carcinoma[J].Cancer Res Clin Oncol,1992,118(6):474-497.

[8] 陈斌,罗荣城,崔斐.胃癌HER-2/neu基因表达与预后的相关性[J].南方医科大学学报,2006, 26(3):344-347.

[9] Petrelli NJ,Winer EP,Brahmer J,et al.Clinical Cancer Advances 2009: major research advances in cancer treatment, prevention, and screening-a report from the American Society of Clinical Oncology[J].J Clin Oncol,2009,27(35):6052-6069.