金银花对小鼠皮肤光老化的保护作用

冯承恩，李润祥，黄庆芳，丁 莹

(1. 广东药学院 医药化工学院，广东 中山528458；2.广州市皮肤病防治所，广东 广州510095)



金银花对小鼠皮肤光老化的保护作用

冯承恩1，李润祥2，黄庆芳1，丁 莹1

(1. 广东药学院 医药化工学院，广东 中山528458；2.广州市皮肤病防治所，广东 广州510095)

目的：研究金银花醇提取物对紫外线致小鼠皮肤光老化的保护作用。方法：将60只小鼠随机分成5组：正常对照组、模型组、模型+基质组、模型+低剂量金银花组及模型+高剂量组,除对照组外，其它各组小鼠模拟日光紫外线(UVA+UVB)光老化皮肤损伤照射，建立光老化动物模型。观察皮下血管及皮肤结构改变，测定皮肤丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性。结果：低、高剂量金银花组小鼠与空白组相比，波浪状弹性纤维，断裂及卷曲程度较轻；与模型组相比，皮肤MDA含量降低，GSH-px含量减少，而SOD含量有所增加。结论：金银花提取物对紫外线照射后小鼠光老化有一定的保护作用。

金银花；紫外线；皮肤光老化

金银花(honeysuckle flower)是忍冬科植物忍冬及同属多种植物的干燥花蕾，其主要活性组分为绿原酸，具有抗炎、抗氧化、利胆保肝、降血脂等药理活性[1]，广泛用于食品保鲜剂和抗衰老剂等[2]。但其醇提取物对紫外线照射引起小鼠皮肤光老化的防护作用却少有报道。本实验通过模拟紫外线建立小鼠光老化动物模型，观察金银花醇提取物对皮肤光老化的保护作用。

1 实验材料

1.1 药物

取金银花32g，与60%乙醇按固液比1∶25溶解，浸提温度80℃，提取2次，时间均为1h，提取液合并过滤浓缩后，于4℃保存备用。

1.2 动物

KM小鼠60只，体重(18～22)g，6周，雌性，由南方医科大学实验动物中心提供(许可证号：SCXK(粤)2006-0015)。

1.3 试剂

金银花(广州致信中药饮片有限公司，批号：Y2012007)。考马斯亮兰蛋白测试、丙二醛试剂测定盒(批号：20121009)、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶试剂测定盒(批号：20121209)，试剂盒均来自南京建成生物工程研究所。

1.4 仪器

SS-01型紫外线光疗仪(上海希格玛高技术有限公司)，UV1102紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)。

2 方法

2.1 实验分组

将小鼠60只随机分成空白组、模型组、模型+基质组、模型+低剂量金银花组及模型+高剂量组 5组，每组12只。

2.2 模拟紫外线照射小鼠致光老化

参考国内光老化动物模型方法建立动物模型[3]。照射前，剃掉背部约2cm×3cm的皮发。模型组不涂药，金银花组涂0.1mL(低、高剂量浓度分别为0.2g/mL、0.4g/mL)的金银花醇提取物，基质组涂60%乙醇，空白对照组外用生理盐水30min，除空白对照组外，各组小鼠模拟紫外线光老化皮肤损伤照射。固定小鼠，头部区遮光，40W UVB灯管2根(312nm)及40W UVA灯管2根(365nm)模拟日光组合配置照射。UVA辐照强度1.12mW/cm，UVB辐照强度0.118mW/cm。辐照时间以小鼠皮肤开始出现轻度泛红为准，并按小鼠耐受适应性的增强做渐进性增时调整。2天1次，连续12周，累计照射剂量约为UVA 198 J/cm2，UVB 4.26J/cm2。

2.3 MDA含量及SOD、GSH-px活性测定

实验结束处死动物后，立即取下背部脱毛区全层皮肤，观察其皮下血管的变化。取1/3皮肤作理病组织切片。另取背部1/3皮肤，刮除皮下脂肪，将皮肤剪成肉糜状，按9倍皮肤重量的生理盐水混合放入冰水中匀浆，匀浆时间10s/次，间隙30s，连续5次，打成5%乳白色匀浆，4℃下以3500r/min离心10min，取上清液，按试剂盒说明分别测定SOD、GSH-Px活性及MDA含量。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 肉眼观察皮下血管变化

空白组小鼠皮肤无结节、血管正常，模型组小鼠皮肤粗糙、松弛干燥、脱屑，出现粗深皱纹，皮肤色素沉着，血管出现严重血瘀点，小鼠皮肤光老化模型成功；金银花低剂量组皮肤较平滑，稍松弛，出现轻微充血；金银花低高剂量组皮肤表面光滑，无充血现象。整个实验期间各组小鼠体重比无显著性差异(P>0.05)。

3.2 光镜下真皮弹性纤维病理学改变

空白组小鼠真皮层可见波浪状弹性纤维，无卷曲扭结，排列有序。模型组小鼠皮肤弹性纤维发生变性或消失，纤维呈嗜碱性变，出现变粗、扭结聚集，甚至消失；金银花高、低剂量组小鼠真皮层弹性纤维波浪状，少见断裂、破碎，与模型组比较有所改善。金银花高、低剂量组之间有一定的差别，高剂量组的弹性纤维受损程度较轻。

3.3 皮肤组织中SOD、MDA及GSH-px测定结果

与模型组相比，金银花醇提取物高、低剂量组SOD活性明显下降，MDA含量明显增加，GSH-px活性下降，差异具有统计学意义(P<0.05)，并呈明显的剂量依赖性，见表1。

4 讨论

近年来，国内外应用多种不同中药或其提取物对皮肤光老化的防治取得了颇有成效的研究[4]。《本草纲目》记载金银花“久服轻身，延年益寿”，夏秋服用金银花茶能防暑降温、降脂减肥、养颜美容。对一百多种中药材的紫外吸收率研究[5]，发现金银花的平均紫外吸收率分别为：20.9(UVA)、51.1(UVB)、70.4(UVC)。孙莎莎等[6]研究发现金银花提取物在锦纶上具有吸附和抗紫外线性能。

以往关于紫外线对皮肤老化的作用研究，多采用单一光源(UVB或UVA)，注重于短时间大剂量紫外线照射后引起的生化改变或长时间慢性照射后的皮肤形态学改变。本实验采用复合光源(UVB+UVA)模拟日光，更符合自然条件，长时间中小剂量紫外线照射小鼠皮肤，可最大程度地模拟皮肤光老化的生理过程。模型组小鼠皮肤组织的SOD降低，MDA升高，真皮纤维排列紊乱，可能因紫外线照射使皮肤组织内产生大量自由基或使组织抗氧化防御体系作用减弱所致，由此可见模拟紫外光照射致小鼠皮肤光老化模型建立成功。

组别SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)GSH-px(U/mgprot)空白组243.98±34.9633.11±2.998.43±1.89模型组188.79±19.44#87.28±4.12#1.66±1.62##模型+基质组192.17±12.8183.05±3.031.98±1.46模型+低剂量组221.89±28.32*46.52±1.87*3.32±1.63模型+高剂量组225.00±24.67**40.52±2.73**6.77±1.34*

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.001；与空白组比较，#P<0.05，##P<0.05。

将金银花醇提取液作为外用剂型，经皮肤用于剃毛后的昆明小鼠皮肤，可明显提高小鼠皮肤组织中MDA含量，降低SOD、GSH-px活性；而高剂量金银花组能显著减少UVR辐射所致小鼠皮肤组织中MDA的生成，降低细胞损伤的程度，减少细胞毒性及蛋白质、核酸等大分子真皮结构的交联聚合作用，同时显著提高SOD及GSH-px活性，表现出不同程度的光保护效果。推测金银花外用抗光老化作用可能通过减少氧化产物生成，提高抗氧化物酶活性，保护细胞免于氧化损伤，并可使氧化变性的大分子功能还原恢复，从而达到抗皮肤光老化作用[7-10]。

在光老化发生机制中，目前已经公认的有活性氧簇自由基学说、基质金属蛋白酶(MMP)学说、线粒体损伤学说等。本实验结果表明，金银花醇提取液可以提高光老化皮肤抗氧化物酶活性，改变氧化产物含量，达到抗皮肤光老化作用。

[1] 全国中草药编写组.全国中草药汇编上册[M].第2版.北京:人民卫生出版社，1996:553.

[2] 国家药典委员会．中国药典(一部)[M]．北京：化学工业出版社,2005:196-197.

[3] 郭鲁义，李春雨，张宁，等．实用光老化动物模型建立方法的探讨[J]．中国美容学,2008，17(2)：235-237.

[4] 陈绍斐，马丽俐．中药对皮肤光老化防治作用的研究进展[J]．中国中西医结合皮肤性病学杂志,2008，7(1)：57-60.

[5] 陈淑映，罗德祥，何锦钧，等.一百种常用中草药乙醇提取液的防晒性能测定[J].国际医药卫生导报，2005，11(6):67-69.

[6] 孙莎莎.金银花提取物在锦纶上的吸附和抗紫外性能[J].印染，2009，35(22)：4-8.

[7] 沈玲玲，胡志军，王志良，等. 金银花中总黄酮的提取及其消除自由基的研究[J]. 时珍国医国药，2011，22( 5)：1169-1171.

[8] 杨新建，段素云，宋琳琳，等．金银花中总黄酮的提取及其抗氧化活性的研究[J]. 安徽农业科学，2012，40( 12) :7047-7049.

[9] 张泽生，乌兰．金银花中绿原酸的体外抑菌和抗氧化性的研究[J].天津科技大学学报,2005，20( 2) : 5-8,34.

[10] WU LAN. Effect of chlorogenic acid on antioxidant activity of Flos Lonicerae extracts[J] .Jouranl of Zhejiang University Science B,2007,8(9):673-679.

(责任编辑：李岚春)

Honeysuckle Light on The Skin of Mice After Exposure to UVA Protective Effect

Feng Chengen1，Li Run xiang2，Huang Qingfang1，Ding Ying1

(1.Chemistry and Chemical Engineering Department of Guang Dong Pharmaceutical University，Zhongshan 528458 ；2.Guangzhou Institute of Dermatology，Guangzhou 510095)

Objective:To study the influence of honeysuckle extract using on Photo-aging mice skin caused by UV radiationt.Methods:The 60 mice were randomly divided into five groups：normal control group, photo-aging model group, model+ matrix group , model+ honeysuckle extract low-dose group and model+ honeysuckle extract high-dose group . The photo-aging skin mice models were obtained long-term by UV exposure. To observe the back surface of the skin changes and changes in dermal blood vessels, simultaneous detection of the malondialdehyde(MDA)、superoxide diamutase (SOD)and glutathione peroxidase(GSH-px) by biochemical methods.Results:Few broke、convolute、amorphous elastic fibers were observed in the groups treated with low and high dose group，and some wavy elastic fibers were also observed. Skin decreased SOD activity, MDA content increased. Compare to the photo-aging model group, skin MDA content was lower, SOD content increased, and the high dose than low dose significantly.Conclusion:The extract of honeysuckle has a photo protective effect on the skin of photo-aging mice.

Honeysuckle; UV; Photo-aging

2014-04-14

冯承恩(1978-)，女，广东药学院医药化工学院实验师，研究方向为皮肤病药理学。

李润祥(1976-)，男，广州市皮肤病防治所副主任医师，研究方向为皮肤性病学。

R285.5

A

1673-2197(2014)12-0003-02