高效毛细管电泳在西北中藏药黄酮类化合物中的应用研究

高瑞斌，杨 艳，董树清，倪京满，郭 玫*，赵 亮

(1.甘肃中医学院 药学系 中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室，甘肃 兰州 730000；2.中国科学院兰州化学物理研究所 西北特色植物资源化学重点实验室，甘肃 兰州 730000；3.兰州大学 药学院，甘肃 兰州 730000)



高效毛细管电泳在西北中藏药黄酮类化合物中的应用研究

高瑞斌1，杨 艳3，董树清2，倪京满3，郭 玫1*，赵 亮2

(1.甘肃中医学院 药学系 中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室，甘肃 兰州 730000；2.中国科学院兰州化学物理研究所 西北特色植物资源化学重点实验室，甘肃 兰州 730000；3.兰州大学 药学院，甘肃 兰州 730000)

西北中藏药作为中国特有的高原植物，长期生长于强辐射、日照时间长的环境下，具有有效成分含量高、生物活性强等优势。然而，目前对于该类药物的质量标准研究还十分有限，常用技术不能满足其质量和开发研究。因此采用新型分离分析技术，即高效毛细管电泳技术(HPCE)，利用其高效、快速、进样体积小、多模式等特点，对西北中藏药中黄酮类化合物展开分析研究。综述不同分离模式下利用电泳技术对西北中藏药中黄酮类化合物及其它活性成分进行研究的文献报道，以期为其开发利用提供科学依据。

高效毛细管电泳；黄酮类化合物；西北中藏药

高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE)也称为毛细管电分离法(CESM)，是离子或荷电粒子以电场为驱动力，在毛细管中根据其淌度或/和分配系数的不同进行高效、快速分离的一种新型技术。近几年许多学者利用毛细管电泳独特的分离优势，选取富含黄酮类成分的西部特色中藏药为研究对象，利用CE技术对该类成分进行了分离及含量测定，为进一步研究西北中藏药的质量标准奠定了理论基础。

1 不同CE模式研究中藏药黄酮类成分

毛细管电泳有多种模式，为样品的分离提供了诸多选择，尤其对复杂样品的分离分析有重要意义。根据不同的分离原理，多种类型的毛细管电泳被开发出来，为中藏药黄酮类成分的研究拓宽了道路。

1.1 毛细管区带电泳(CZE)应用研究

毛细管区带电泳(CZE)也称为自由溶液毛细管电泳，是毛细管电泳中最简单的一种分离形式，其介质为一种具有pH缓冲能力的均匀自由溶液，通常称为电泳缓冲液[1]。在采用CZE法分离中藏药中黄酮类物质时，黄酮上带有的邻羟基基团能与硼酸根形成配位键，使其带上负电荷，从而达到分离的目的。因此，CZE法被广泛用于黄酮类化合物的检测。运用CZE技术分析中藏药黄酮类化合物的报道见表1。

表1 CZE在中藏药中黄酮类成分分析中的应用

1.2 胶束电动毛细管色谱(MECC)应用研究

胶束电动毛细管色谱是将离子型表面活性剂(如十二烷基硫酸钠，SDS)加入缓冲溶液中，当其浓度足够大时即形成内核疏水、外部带电的动态胶束，可根据样品组分在水相和胶束相间分配行为的差异进行分离。MECC技术的突出优势在于使CE的应用范围拓展到中性物质的分离中，通常被认为是分离效果最好的色谱技术。表2即归纳了近年来运用MECC技术测定中药中黄酮类成分的相关文献报道。

表2 MECC在中药黄酮类成分分析中的应用

1.3 毛细管电色谱(CEC)应用研究

CEC是在毛细管中填充液相色谱固定相微粒，以电泳中的电渗流作为驱动力，根据样品和固定相之间的相互作用实现样品分离的技术，尤其适用于小分子物质的分离研究。刘海兴等[20-21]采用毛细管电色谱法对旱莲中的总黄酮含量进行了测定，所确定的电泳条件为：8mmol/L磷酸二氢钠-8mmol/L磷酸氢二钠缓冲溶液(pH=8.02)，运行电压为12kV，检测波长为254nm，实验结果证实了黄酮类成分是旱莲的主要活性成分，直接影响着其功效，也为旱莲的质量控制提供了新的方法。

此外，其它模式的电泳技术对药物成分研究也有一定的作用，如毛细管凝胶电泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE)、毛细管等电聚焦(Capillary Isoelectric Focusing，CIEF)、毛细管等速电泳(Capillary Isoelectric-phoresis,CITP)等。

2 HPCE在西北中藏药特有活性成分研究中的应用

很多学者在对中藏药中黄酮类成分进行研究的同时也对其它活性组分做了一定研究。表3收载了近年来运用HPCE技术对藏药中特有活性成分的研究报道。

3 结语

近年来，有关毛细管电泳的研究日益深入，其在分析、分离等方面的应用相比其他色谱方法更有优势，如高灵敏度、高速、样品耗用量少、重现性好、自动化等，这对于西北中藏药中黄酮类化合物的分离分析具有重要意义。随着商品化仪器的不断改进，毛细管电泳及其联用技术将会在生药资源丰富的西北地区发挥更大作用，为中藏药活性成分的研究提供更为广阔的应用空间。

表3 CE技术在藏药特有活性成分分析测定中的应用

[1] S TERABE, K OTSUKA, K ICHIKAWA, et al. Electrokinetic Separations with Micellar Solutions and Open-Tubular Capillaries[J].Ando,Anal.Chem., 1984, 56(1):11.

[2] LIU J J, Li S P, WANG Y T. Optimization for quantitative determination of four flavonoids in Epimedium by capillary zone electrophoresis coupled with diode array detection using central composite design [J]. J Chromatogr A,2006,11(3):344-349.

[3] XU X Q, QI X Z, WANG W, et al. Separation and determination of flavonoids in Agrimonia pilosa Ledeb.by capillary e1ecfrophoresis with electrochemical detection [J]. J Sep Sci,2005(28):647-652.

[4] W U T, GUAN Y Q, YE J N. Determination of flavonoids and ascorbic acid in grape fruit peel and juice by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J]. Food Chem,2007(100):1573-l579.

[5] XU X Q, YU L S,CHEN G N. Determination of flavonoids in Portulaca oleracea L.by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J]. J Pharm Biorned Anal,2006(41):493-499.

[6] JIANG T F,WANG Y H,LV Z H, et al. Determination of kava lactones and flavonoid glycoside in Scorzonera austriaca by capillary zone electrophoresis [J]. J Pharm Biomed Anal,2007(43):854-858.

[7] SUNTORNSUK L, ANURUKVORAKUN O. Precision improvement for the analysis of flavonoids in select Thai plants by capillary electrophoresis [J]. Electrophoresis,2005(26):648-660.

[8] LUO M N，LU H W, MA H Q, et al. Separation and determination of flavonoids in Lamiophlomis rotata by capillary electrophoresis using borate as electrolyte [J]. J Pharm Biomed Anal,2007(44):881-886.

[9] XU X Q, YE H Z, WANG W, et al. An improved method for the quantitation of flavonoids in Herba Leonuri by capillary electrophoresis [J]. J Agric Food Chem,2005(53):5853-5857.

[10] REN Z Y, ZHANG Y, SHI Y P.Simultaneous determination of nine flavonoids in Anaphalis margaritacea by capillary zone electrophoresis [J]. Talanta,2009(78):959-963.

[11] XU X Q, YE H Z, WANG W, et al. Determination of flavonoids in Houttuynia cordata Thunb.and Saururus chinensis (Lour. ) Bail.by capillary electrophoresis with electrochemical detection [J]. Talanta,2006(68):759-764.

[12] 王小艳,王洪伦,盛筱,等.毛细管区带电泳法测定油菜蜂花粉中黄酮苷元含量[J].天然产物研究与开发,2008(20): 1043-1047.

[13] 王建军,乔善磊,柴逸峰,等.毛细管区带电泳法快速分离测定知母内芒果苷和新芒果苷[J].药物分析杂志, 2006,26(1):79-81.

[14] 朱加.应用胶束电动毛细管色谱法分离测定银杏叶提取物中的芦丁和槲皮素[J].浙江农业学报,2001,13(4): 223-226.

[15] JIANG T F, DU X, SHI Y P. Determination of flavonoids from Pau1ownia tomentosa (Thunb) Steud by micellar electrokinetic capillary electrophoresis [J].Chromatographia, 2004(59):255-258.

[16] ZHU J,YU K,CHEN X,et a1. Comparison of two sample preconcentration strategies for the sensitivity enhancement of flavonoids found in Chinese herbal medicine in micellar electrokinetic chromatography with UV detection [J]. J Chromatogr A,2007,11(6):191-200.

[17] WANG S F, WU Y Q, JU Y. On-line concentraction by field-enhanced sample injection with reverse migrating micelles in micellar electrokinetic capillary chromatography for the analysis of flavonoids in Epimedium bievicornum Maxim [J]. J Chromatogr A,2003,10(17):27-34.

[18] 马玲云,魏锋,马双成,等.毛细管电泳法测定娑罗子药材中的黄酮苷类成分[J].药物分析杂志,2005,25(5):537- 540.

[19] ZHANG Y,CHEN J,ZHAO I,et al.Separation and determination of isoflavones in red clover by micellar electrokinetic capillary chromatography [J]. Biomed Chromatogr,2007(21): 987-992.

[20] 刘海兴,刘凤芹,于爱民,等.毛细管电色谱法测定旱莲中总黄酮的含量[J].潍坊学院学报,2005,5(6):95-100.

[21] 刘海兴,刘凤芹,于爱民,等.毛细管电色谱法测定槐花、槐角中总黄酮含量[J].化学试剂,2006,28(6):349-350.

[22] 祝馨怡,罗兴平,陈立仁,等.高效毛细管电泳法测定红景天中没食子酸的含量[J].中草药,2005,36(3):443-444.

[23] 马海宁,华玉娟,屠春燕,等.毛细管电泳分析藏红花植物细胞多糖中单糖组成[J].色谱,2012,30(3):304-308.

[24] ZHAO SG, LIU Q, CHEN XG, et al. Separation and determination of gentiopicroside and swertiamarin in Tibetan medicines by micellar electrokinetic eletrophoresis [J]. Biomed.Chromatogr,2004(18):10-15.

[25] 汪泰初,张和禹,李瑞雪.高效毛细管电泳法测定虫草制品中核苷类化合物[J].科学实验·中国蚕业,2010(3):10-12.

(责任编辑：尹晨茹)

High Performance Capillary Electrophoresis in the Northwest Tibetan Medicine Flavonoids in the Applied Research

Ruibin Gao1, Yan Yang3,Shuqing Dong2, Jingman Ni3, Mei Guo1*, Liang Zhao2*

(1.Key Laboratory of Chemistry and Quality of Traditional Chinese Medicines,Department of Pharmacy, Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China;2.Key laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Resources ,Lanzhou Institute of Chemical Physics of Chinese Academy of Sciences, Lanzhou 730000, China;3. Lanzhou University, Lanzhou 730000, China)

As a native plateau plant to China, Chinese-Tibetan medicine in Northwest has the characteristics of strong radiation, long sunshine, higher accumulation of effective ingredients and higher bioactivity. However, at present, the studies on the quality standard of such medicine are limited. Common techniques are no guarantee of the quality and research of Chinese-Tibetan medicine in Northwest. Therefore, we need to adopt a new-type technique for sample analysis and separation, i.e. high performance capillary electrophoresis (HPCE), expanding analysis research for flavonoids of Chinese-Tibetan Medicine in Northwest with the help of the characteristics of high efficiency、high speed、sampling with small size and multimode. This paper reviews the reports in literatures about the research of the electrophoresis technique (HPCE)for flavonoids and other active ingredients of Chinese-Tibetan medicine in Northwest in different separation modes.

High Performance Capillary Electrophoresis; Flavonoids; Chinese Tibetan Medicine

2014-01-08

中科院科技支新项目(2011-2013)；兰州市科技专项计划(2011-1-156)

高瑞斌(1986-)，男，甘肃中医学院硕士研究生，研究方向为中药有效成分与质量标准。

郭玫(1963-)，女，甘肃中医学院教授，硕士生导师，研究方向为中药有效成分及质量标准。

R285

A

1673-2197(2014)12-0005-04