康肾口服液的最佳制备工艺研究

王希东 范莉莉 李文俊 张正臣

·药物研究·

康肾口服液的最佳制备工艺研究

王希东 范莉莉 李文俊 张正臣

目的 研究康肾口服液的最佳制备工艺。方法比较水提法、双提法、醇提法3种提取方法，并对优者用正交设计法进行优化，考察提取温度、提取时间和提取次数3个因素。每个因素确定为2水平，选择L8(27)表。并按获得的最佳制备工艺进行连续3批试制。结果提取温度为最大影响因素，然后依次为提取时间、提取次数；连续试制3批，效果稳定。结论所得康肾口服液最佳制备工艺，方法稳定可靠。

康肾口服液；正交设计；制备工艺

康肾口服液是根据中医理论和现代药理研究成果拟定的院内协定处方。本制剂由人参、黄芪、白术、茯苓、淫羊藿、山药、地龙、红花、金樱子、芡实、甘草为原料制备而成，具有益气温阳，固本涩精，活血通络的作用和功效。用于慢性肾炎、肾病综合征、阳痿早泻。为了保证制剂质量，本文对其最佳提取工艺进行研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料 人参、黄芪、白术、茯苓、淫羊藿、山药、地龙、红花、金樱子、芡实、甘草均符合《中国药典》2010年版一部有关规定，购自河南省新乡市药材公司。人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，中国药品生物制品检定所提供。高效液相色谱仪HP1100，美国惠普公司生产。

1.2 实验内容

1.2．1 提取方法

1.2.1.1 水煎煮提取：经预试验，根据正交设计选出了最佳提取条件，即按处方比例称取各味药材共175 g，粉碎成10目粗粉，加水煎煮3次，40 min/次，水提液部分趁热滤过，滤液浓缩至相对密度为1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得样品A。

1.2.1.2 双提法提取：经预试验，根据正交设计选出了最佳提取条件，即按处方称取各味药材共175 g,粉碎成10目粗粉，加水煎煮3次，40 min/次，水提液部分趁热滤过，滤液浓缩至适量，放冷，加入95%乙醇使其达含醇量60%，静置24 h，取上清液，回收乙醇至无醇昧，浓缩至相对密度为1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得样品B。

1.2.1.3 不同浓度乙醇提取[1，2]：称取1/2量上述各味药材各3份，分别用20%、40%、50%、60%、70%、85%、90% 乙醇提取2次，溶媒量为8倍，每次提取时间为2 h。醇提取液合并，回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得样品 C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7。

1.2.2 考察指标及方法

1.2.2.1 样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定方法：人参为方中主要药味，本法采用高效液相法对方中人参以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re为指标进行含量测定。①色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Diamonsil C18(4.6×150 mm，5 μm)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(18∶82)为流动相；流速为1.0 ml/min；柱温为30℃；检测波长为 203 nm。理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于6 000。②对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。③供试品溶液的制备 取本品10 ml,用水饱和正丁醇振摇提取3次(30、20、10 ml)，合并正丁醇液，依次用氨试液20 ml，水20 ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，，摇匀，滤过，取续滤液，即得。④测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算出供试品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量，即得。

1.2.2.2 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量测定线性关系试验 取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re混合对照品溶液(含人参皂苷Rg1为0.53 mg/ml、含人参皂苷Re为0.37 mg/ml)，精密量取1、2、3、4、5 ml，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取各10 μl，分别注入液相色谱仪，人参皂苷Rg1回归方程为Y=1E+06X，相关系数r=0.9996；人参皂苷Re回归方程为Y=2E+06X，相关系数r=0.9997。测定峰面积，结果见表1。以峰面积(X)对进样浓度(C，mg/ml)进行线性回归，人参皂苷Rg1浓度在0.053～0.265 mg/ml范围内，峰面积与浓度线性关系良好，人参皂苷Re浓度在0.037～0.185 mg/ml范围内，峰面积与浓度线性关系良好。

表1 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re线性关系试验结果

1.2.2.3 精密度试验：取线性关系试验项下的3号溶液，精密量取10 μl，连续测定6次。峰面积的相对标准差RSD<2%。见表2。

表2 精密度试验结果

1.2.2.4 回收率测定：取已知含量的样品，加人参皂苷Rg1对照品溶液(0.53 mg/ml)2.5 ml和人参皂苷Re对照品溶液(0.37 mg/ml)2 ml，按供试品溶液制备方法制备，测定峰面积，计算测得量，结果平均回收率为99.12%，RSD为1.02%。见表3。

表3 回收率测定结果

1.2.2.5 稳定性试验：取同一批样品，按含量测定项下方法制备样品，得样品供试品溶液；取供试品溶液与对照品溶液，于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h及24 h分别进样，每次进样量10 μl，记录峰面积值。见表4。

2 结果

2.1 3种方法人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量比较 水提取法中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re损失较大，原因是常规水提法提取人参皂苷时，过滤十分困难，是由于人参中粘多糖与滤纸纤维形成一种膜状物质阻碍了提取液的抽滤。双提法对康肾口服液中主要药味人参的有效成分提取较完全，而不同提取温度、不同提取时间、不同提取次数提取，效果不同，因此对双提法工艺进行优化。见表5。

表4 稳定性试验结果

表5 三种方法人参皂苷Rg1、人参皂苷Re含量的比较

2.2 因素-水平的确定 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re溶于水中，采用水作溶媒进行提取。重点考察因素为提取温度、提取时间和提取次数3个因素。每个因素确定为2水平。见表6。

表6 正交实验因素水平表

2.3 正交设计表的选择 根据因素-水平及自由度，试验次数为8，考虑因素之间的交互作用，选择L8(27)表，根据正交设计表及因素-水平表。见表7。

2.4 试验方差分析 只有A因素效应获显著性意义(P<0.01)；其他均未获显著性意义，故可认为影响提取工艺的主要因素是A因素，获得提取工艺相对最优组合以提取量最高者为好，即A2B2C2，在100℃提取40 min，提取次数为3次。见表8。

表7 正交试验实施方案及计算表

表8 正交试验方差分析

注：经查F值表，F0.05(1,2)=18.5，F0.01(1,2)=98.5，F0.05(1,4)=7.71，F0.01(1,4)=21.2

3 讨论

人参为康肾口服液的主要药材，关于其提取很多报道。本实验分别用水煎煮法、双提法、醇提法进行比较研究，发现由于常规水提法提取人参皂苷时，过滤十分困难，是由于人参中粘多糖与滤纸纤维形成一种膜状物质阻碍了提取液的抽滤。同时，不同提取温度、不同提取时间、不同提取次数提取，效果不同，因此对双提法工艺进行优化。得最佳制备工艺，并连续3批按法试制，结果稳定可靠。

1 吴清，李云谷，杜守颖，等.当归、川芎提取工艺研究.中国实验方剂学杂志，1995，5：17-18.

2 张品，陈全成，郑毅丹,等.不同提取方法对人参皂苷提取率的影响.吉林农业大学学报，2003,25：71-72.

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.054

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张正臣，453000 中国人民解放军第371中心医院；

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1002-7386(2014)03-0437-03

2013-07-22)