温通止痛贴中黄芩苷含量的测定*

★ 陈浩 何小女 邓运明 万元泰

(1.江西省中医院 江西 南昌 330006 ；2.江西中医药大学 江西 南昌 330004)

众所周知[1，2]临床治疗中，类风湿性关节炎、风湿性关节炎、骨性关节炎等症多年来一直都属于疑难杂症，尤其在临床上使用中成药治愈更是收效甚微。本院邓运明教授[3]结合多年来临床实践经验自主研发的温通止痛贴剂采用中医疏通经络、祛除寒湿痹痛的机制，治疗类风湿性关节炎、风湿性关节炎、骨性关节炎等症临床治疗效果显著。为控制其质量，保证临床用药安全、有效，有必要对温通止痛贴质量标准再进行深入研究，因此采用HPLC法对温通止痛贴中黄芩苷的含量进行测定。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 电子天平BS 124S(北京赛多利斯仪器);超声波清洗器DL360B(上海之信仪器有限公司);微型植物试样粉碎机KN-500型(长沙康宁电子科技有限公司);恒温鼓风干燥箱DHG-9070A 型(上海精宏实验设备有限公司)；安捷伦1260。

1.2 试剂 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号：110715-201117)；色谱甲醇；水为超纯水，其余实验所用化学试剂均为分析纯试剂。

1.3 色谱条件 色谱柱：C18安捷伦液相色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相：甲醇: 0.125%磷酸(47∶53);检测波长：278nm;流速：1mL/min;柱温： 30℃。

2 含量的测定[4-10]

2.1 黄芩苷对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品9.7mg于50mL量瓶中，加适量甲醇使溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀，超声10min，过微孔滤头于小瓶，即得储备液。

2.2 供试品溶液的制备 刮取温通药膏50g于研钵中，研匀，精密称定5g于圆底烧瓶中。分别加入75%乙醇150，100mL于水浴(85℃)中回流提取两次，每次40min，放冷、滤过，合并滤液，置分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)萃取三次，弃去醚液，蒸干，残渣用甲醇定量转移至25mL量瓶中作为母液，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取母液5mL于25mL量瓶中，用甲醇定容，超声10min，过微孔滤头，取续滤液，即得供试品溶液。精密吸取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含58.2μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 线性关系的考察 精密取储备液取1, 2, 3, 5, 7mL溶解于5个10mL量瓶中，取甲醇稀释至刻度，摇匀，超声10min，以储备液及稀释的五个浓度的黄芩苷溶液建立标准曲线，每次进样量10μL，以对照品进样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y绘制标准曲线，求得回归方程：Y=31939X-74.533,r=0.9997(n=6)。结果表明：黄芩苷在进样量0.194～1.94μg范围内，进样量与峰面积呈良好线性关系。

2.4 阴性干扰试验 取阴性样品适量，按2.2项供试品方法制成阴性对照溶液。按照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL注入色谱仪中，记录色谱图如下。结果表明：在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上无色谱峰出现，方中其他组分对测定结果无影响。

2.5 精密度试验 精密吸取2.2项的对照品溶液连续进样6次，每次进样10μL，测得精密度RSD% =1.92%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性考察 取同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法制备的样品溶液，各进样10μL记录峰面积，结果RSD%为1.56%，说明本方法重复性好。

2.7 稳定性实验 精密吸取同一份供试品溶液10μL分别于0, 1, 4, 7, 10 ,12 h注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值，结果其RSD为1.67%。实验结果表明供试品溶液在12 h内测定稳定性良好。

2.8 回收率实验 采用加样回收法，精密称定已知含量的本品2.5g，共6份，精密加入对照品溶液5mL(0.7732mg/mL)，依“供试品溶液的制备”法制成供试品溶液，测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品测定 取本品三批样品(20121025、20121122、20121205)，按2.2供试品方法制备溶液，按含量测定方法测定，用外标法计算供试品黄芩苷的含量，结果分别为1.408mg/g、1.436mg/g、1.422mg/g。

3 讨论

3.1 取样品在200～350 nm波长范围内进行扫描，在278 nm处有最大吸收，故选择278 nm为检测波长。

3.2 本实验采用高效液相色谱法对温通止痛贴中黄芩苷含量进行测定，结果表明该方法简单、有效，具有良好的准确性与重现性且测定中无阴性干扰。通过对HPLC方法学的摸索为下一步固本颗粒质量标准的进一步完善提供了精确、合理的科学依据。

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