新的产色培养基 Chrom ID ESBL在检测产超广谱 β-内酰胺酶肠杆菌科细菌中的可靠性

陈 红 （湖北省黄冈市英山县人民医院检验科，湖北黄冈 438700）

·基础与转化医学·

新的产色培养基 Chrom ID ESBL在检测产超广谱 β-内酰胺酶肠杆菌科细菌中的可靠性

陈 红 （湖北省黄冈市英山县人民医院检验科，湖北黄冈 438700）

目的：评价 Chrom ID ESBL产色培养基检测产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌科菌株的可靠性．方法：共使用 2组肠杆菌科菌株对平板进行评估，第 1组细菌是我院 2010-04／2013-03各病区和门诊临床分离送检的样本，共982株，第2组细菌是本地区历往年分离培养，且确定产酶特性的肠杆菌科细菌20株．结果：Chrom ID ESBL显色平板可快速有效的筛查肠杆菌科细菌是否产 ESBLs．结论：Chrom ID ESBL产色培养基是一种快速可靠的对产 ESBLs的肠杆菌科菌株进行筛选的产色培养基．

肠杆菌科；超广谱 β-内酰胺酶；Chrom ID ESBL平板

1 材料和方法

1．1 材料

1．1．1 菌株来源 实验所用第 1组细菌是我院2010-04／2013-03各病区和门诊临床分离送检的样本，共982株，大肠埃希菌样本共624株、肺炎克雷伯菌样本共265株、其他变形肠杆菌样本共93株；第2组细菌是本地区往年分离培养，且确定产酶特性的肠杆菌科细菌20株，这些菌株中有肺炎克雷伯菌9株、大肠埃希菌7株、阴沟肠杆菌4株．质控标准菌株为大肠杆菌菌株（ATCC25922）与肺炎克雷伯菌菌株（ATCC700603，携带ESBLs SHV-18型）．

1．1．2 试剂 药敏纸片（BD公司生产）是头孢噻肟（30 μg）、头孢他啶（30 μg）、头孢噻肟-克拉维酸（30～10 μg）以及 头孢他啶-克拉维酸（30～10 μg）．产色培养基Chrom ID ESBL（梅里埃公司生产），血平板以及水解酪蛋白胨（MH）平板．

1．2 方法

1．2．1 ESBLs药敏纸片试验的确证 依循 CLSI（美国临床和实验室标准协会）纸片扩散确证实验的条件和方法进行确证［2］．使用第 1组细菌 982株，当其在MH平板上培养好后，分别进行四种纸片对比试验，纸片实验方案见表1．头孢类抗生素的用量为 30 μg，克拉维酸用量为10 μg，过夜培养，记录四种纸片各自抑菌圈的直径，当含①③纸片比②④纸片抑菌圈的直径大5 mm时，判断纸片实验阳性．

1．2．2 Chrom ID ESBL平板试验 将在血平板上培养的第2组细菌接种到 Chrom ID ESBL显色平板上，35℃，16～18 h培养过夜，并按照颜色判读试验结果．产ESBLs大肠埃希菌会呈现出粉红或酒红色，产 ESBLs的克雷伯菌属、沙雷菌属、枸橼酸菌属和肠杆菌属会显绿色、蓝色或褐色菌落，产 ESBLs的变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登斯菌属菌株在显浅灰或深灰色．

表1 纸片验证实验方案

2 结果

2．1 982株菌种纸片确证试验和 Chrom ID ESBL显色平板试验结果对比 确证试验中产ESBLs大肠埃希菌有401株，不产 ESBLs菌有223株，产ESBLs肺炎克雷伯菌有144株，不产ESBLs菌 121株，其他变形肠杆菌产ESBLs的为40株，不产 ESBLs的为53株．菌株直接接种到 Chrom ID ESBL平板上后，产ESBLs的菌株生长良好，不产 ESBL的菌株不能生长．产 ESBLs的大肠埃希菌中，红色菌落的菌343株，另有菌58（14．5%）株为白色菌落．产ESBLs的肺炎克雷伯菌呈蓝绿色菌落，其他变形肠杆菌则呈浅灰或深灰菌落，菌种的产酶特性和显色平板试验结果对比见表2．

表2 982株菌种纸片确证试验和 Chrom ID ESBL显色平板试验结果对比

2．2 已知产酶特性的 20株肠杆菌科菌株产色平板检测 产酶特性和基因型的 20株肠杆菌科菌株在Chrom ID ESΒL平板检测情况见表3．

3 讨论

ESBLs主要是由肠杆菌科的细菌生产，尤其是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌．ESBLs由质粒介导，可通过多种方式在细菌之中传递，从而导致耐药现象大面积扩散，进而引发严重的感染情况．为有效控制产ESBLs细菌的散播，纸片筛选和确证试验等筛选方法都被建立起来［3］．但以上这些方法均需要获得纯培养的菌种，操作不便．此次研究评估使用的ESBLs产色平板可快速可靠的筛选产 ESBLs的细菌，简便易行．

Chrom ID ESBL产色平板中含有多种抑制真菌以及革兰阳性菌药物，以头孢泊肟作为底物，主要用于筛选菌株是否产ESBLs，同时该平板还有1种天然底物和2种产色底物，以便于直接鉴定肠杆菌科细菌是否产 ESBLs．大部分的大肠埃希菌菌株都可产 β-葡萄糖醛酸苷酶，因此其菌落可在此平板上呈现粉红或酒红色，不产 β-葡萄糖醛酸苷酶的大肠埃希菌菌株显白色．克雷伯菌属等细菌皆可产β-葡萄糖苷酶，因此其菌落在平板上呈蓝色、绿色或棕绿色．变形杆菌属等细菌能产脱氨酶，这些菌株在平板上呈现浅灰或深灰色．以上结果表明，将菌株直接接种在 Chrom ID ESBL显色平板上可以达到筛选菌株产ESBLs与辅助鉴定的两方面效果．此次研究结果和纸片确证试验结果相比完全符合，效果令人满意．

近些年来，我国在分离革兰阴性杆菌产ESBLs的流行现状、基因型别以及检测方法等方面都进行了大量的研究．研究表明PER、VEB及CTX-M型［4］等基因型是我国各地区临床分离的肠杆菌科细菌主要的 ESBLs型．此次研究选取的20株通过双抑制剂平行纸片抑制试验和聚合酶链反应等生物学方法确认产酶基因型和表型的肠杆菌科细菌，这20株菌株是产ESBLs或／和产AmpC酶的菌株，携带的ESBLs主要基因型包括各种VEB、PER和CTX-M型等．此试验证明了 Chrom ID ESBL产色平板可有效筛选这些菌株．

综上所述，Chrom ID ESBL产色培养基可用于临床标本中肠杆菌科细菌是否产ESBLs的快速筛选．并且Chrom ID ESBL平板可大大缩短筛选产 ESBLs肠杆菌科菌株所用的时间，也为医院感染控制和临床抗感染的治疗等提供了有力支持．

［1］Wilkinson KM，Winstanley TG，Lanyon C，et al．Comparison of four chromogenic culture media for carbapenemase-producing Enterobacteriaceae［J］．J Clin Microbiol，2012，50（9）：3102－3104．

［2］韩立中，祝艳萍，等．ChromID ESBL显色平板对产 ESBLs肠杆菌科细菌筛选作用的评估［J］．检验医学，2010，2（25）：118－120．

［3］Carrër A，Fortineau N，Nordmann P．Use of ChromID extended-spectrum β-lactamase medium for detecting carbapenemase-producing Enterobacteriaceae［J］．J Clinical Microbiol，2010，48（5）：1913－1914．

［4］Dhara M，Disha P，Sachin P，et al．Comparison of various methods for the detection of extended spectrum beta lactamase in Klebsiella Pneumoniae isolated from neonatal intensive care unit，ahmedabad ［J］．Natl J Med Res，2012，2（3）：348－353．

The reliability of the New Chrom ID ESBL colored medium for detect of extended spectrum β-lactamase in Enterobactericaeae

CHEN Hong
Clinical Laboratory，People's Hospital of Yingshan County Hubei Province，Huanggang 438700，China

AIM：To Evaluate the reliability of Chrom ID ESBL medium for detection of extended spectrum β-lactamase in Enterobactericaeae．METHODS：2 sets of Enterobacteriaceae Bacteria to test the medium，1th set of collected bacteria samples was from March 2010 to April 2013 of our clinical hospital wards and outpatient，a total of 982，and 2nd set of 20 collected bacteria samples of our region was isolated，cultured and identified in previous years．RESULTS：Chrom ID ESBL medium can fast and effectively screening ESBLs．CONCLUSION：Chrom ID ESBL medium is a fast and reliable filtering of ESBLs．

Enterobactericaeae；extended-spectrum β-lactamases；Chrom ID ESBL medium

2095-6894（2014）05-009-03

R93．31

A

0 引言

医院和社区临床获得性感染的主要细菌是肠杆菌科细菌，同时由于 β-内酰胺类抗生素的临床应用，肠杆菌科细菌逐渐变异，其耐药问题愈发加重，临床的治疗遇到了很大的困难．为防止此细菌暴发流行，我们必须建立准确、快速以及易于操作的耐药菌的筛选方法，对高危人群进行流行病学检测［1］．近年来，已推出几种 β-内酰胺酶的筛选平板，但这些平板重点检测对第三代头孢菌素耐药的细菌，并不是产 ESBLs的肠杆菌科的细菌．最近开发出一种新的含显色酶的平板 Chrom lD ESBL，能用于筛查肠杆菌科细菌是否产 ESBLs．此研究采用 2组菌株作为该平板对产 ESBLs的肠杆菌科菌筛选的效果评价．

2014-08-16；接受日期：2014-09-01

陈 红．中专，主任技师．研究方向：临床微生物．Tel：0713-7012030 E-mail：635394623＠qq．com