腺苷脱氨酶试剂盒(酶偶联法)的临床验证

景燕祥

腺苷脱氨酶(ADA)广泛分布于人体各组织中, 以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高, 肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞,其活性约为血清的40～70倍, T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。ADA较谷丙转氨酶(ALT)、谷氨酰转肽酶(GGT)更能反映急性肝损伤, 并有助于探测AH的残留病变和肝脏病进展。ALT恢复正常而ADA持续升高者, 常易复发或易迁延为慢性肝炎。故ADA活性测定可作为慢性肝病的筛选指标［1］。因此, 作者ADA联合检测试剂盒(自动生化型), 进行临床验证和评价, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集正常人群、未经治疗的肝炎患者和各类非肝炎性(慢性)疾病患者的血清各300例以上。正常人群为健康体检人群标本, 采用当天生化检测的血清标本, 当天采集, 当天测定完毕；各类非肝炎性(慢性)疾病患者为门诊患者, 除外诊断明确的肝炎患者, 标本采用当天随机门诊抽血的生化血清标本, 当天测定完毕；肝炎患者标本, 为住院患者确认中已明确诊断肝炎, 且未经治疗的患者, 留取当天分离血清样品, -20℃冰箱保存, 约2周内测定。

1.2 方法 ADA试剂盒由上海执诚生物技术有限公司提供, 实验在Olympus AU640自动生化分析仪上进行。自动化分析基本参数 ：Sample volume 15.0 μl；R1 volume 75 μl；R2 volume 75 μl；Wavelength pri：570 nm ； method：rate；Reaction slope (+)；Measuring point: First(20)；Last(25)；Calibration Type(2AB)；Standard：C1 100 U/ml；C2 64 U/ml.

2 结果

根据检测试剂盒提供的结果判读说明, ADA结果≥18 U/ml判为阳性。观察健康体检人群、门诊患者群体和肝炎患者ADA的阳性检出率, 检测结果与统计分析见表1, 2。

通过观察正常人群、未经治疗的肝炎患者和各类非肝炎性(慢性)疾病患者的血清ADA量值变化和阳性率显示：健康体检人群组ADA检出的特异性为98.9%, 假阳性率为0.85%；肝炎患者组ADA检出的阳性率为74.23%, 假阴性率为25.77%；随机门诊患者组(排除诊断明确的肝炎患者, 可能存在急性炎症和未明确诊断的肝炎患者)ADA检出的阳性率为7.65%；对肝脏疾病的分类统计中显示：其检出的阳性率最高为肝硬化>酒精性肝病>肝癌>先天性肝病。

表1 体检人群、门诊患者群体和肿瘤患者TSGF的阳性检出率(±s, %, n)

表1 体检人群、门诊患者群体和肿瘤患者TSGF的阳性检出率(±s, %, n)

分组 例数 ADA量值(U/ml)阳性例数(ADA>18)阴性例数(ADA≤18)阳性率健康体检人群组 353 45.40±11.02 3 350 0.85随机门诊患者组 327 51.65±10.02 25 303 7.65急性肝炎患者组 326 68.93±10.90 242 84 74.23

表2 分组统计(±s, %, U/ml)

表2 分组统计(±s, %, U/ml)

项目 例数 ADA量值 阳性例数(ADA>64)阴性例数(ADA≤64)阳性率自身免疫性肝病 48 49.90±13.83 5 48 10.4酒精性肝病 73 70.42±9.22 55 18 75.3肝硬化 52 72.11±8.82 45 7 86.5先天性肝病 29 67.72±10.66 20 9 69.0肝癌 27 69.32±10.75 20 7 74.1各种病原体感染 46 72.15±8.69 38 8 82.6其他疾病 90 63.76±12.53 53 37 58.9

3 讨论

腺苷脱氨酶是一类非特异性的物质, 它并不能作为肝炎的诊断指标, 而更多的应该作为肝炎的观测指标。ADA是反映肝损伤敏感指标, 可作为肝功能常规项目之一, 肝实质损害时, 血清ADA活力升高。血清中ADA主要来源于肝脏,因为它是肝细胞的胞浆酶, 所以任何原因造成的肝细胞损伤,其肝细胞膜的通透性就会增强, 致使血清中的ADA酶的活性升高, 故该酶可以作为反映肝实质损伤的指标［2］。

3.1 判断急性肝损伤及残存病变研究表明, 在急性肝炎时血清ADA活性增高, 其阳性率高于ALT和γ-谷氨酰转肽酶(γ2GT)。而且由于ADA恢复正常较迟, 较ALT、γ2GT更能正确反映急性肝实质损害, 并有助于探测急性肝炎的残存病变。但重症肝炎发生酶胆分离时, 尽管ALT不高, 而ADA常明显升高。急性肝炎后期ADA升高率高于ALT, 其恢复正常时间也较后者迟, 并与组织学恢复一致。ALT恢复正常而ADA持续升高者, 常易复发或易迁延为慢性肝炎。

3.2 协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优［3］。许多研究中都发现, 慢性活动性肝炎(CAH)、肝硬化患者血清中ADA值显著升高, 且较持久, 因而可判断慢性肝病的程度［4］。另外, 慢性活动性肝炎ADA活性明显高于慢性迁延性肝炎(CPH), 因此, 检测ADA有助于CAH和CPH的鉴别诊断。

3.3 有助于肝纤维化的诊断ADA活性差异与肝细胞损害关系不大, 与肝纤维化程度相关。肝纤维化程度增加, ADA活性增加。

本次临床验证所用的试剂盒是自动生化型, 优势力之处主要是：样品用量省, 可以在自动生化仪上编程测定, 提高了分析精密度。

临床症状和影像学检查是肝炎诊断的重要依据, 但当肝炎缺乏特殊的症侯群, 早期更无症状。各种影像学所能显示的各不相同, 所以要实现早期诊断实际上是十分困难的。作者强调诊断应从形态推进到物质, 坚信物质先于形态的观点,才能在诊断上有所突破 。ADA在各种肝炎早期即可升高已确实无疑。但在病程中各期的变化情况可能与疾病种类有关,尚需累积资料。

［1］熊立凡.临床检验基础.北京：人民卫生出版社, 2004:213-315.

［2］徐克诚, 孟宪镛.临床肝胆病学.天津：天津科技出版社,1987:282-283.

［3］李延伟, 赵洪涛, 品晓霞, 等.血清腺苷脱氨酶测定对肝脏疾病的诊断价值.实用内科杂志, 1990, 10(4):206.

［4］吴瑶, 沈云峰, 张玲, 等.腺苷脱氨酶的检测及在肝病中的意义.江汉大学学报(自然科学版), 2003, 31(2):76-77.