桂枝甘草汤“辛甘化阳”配伍对低温环境大鼠能量代谢的影响*

姚凤云，王炳志，彭淑红，王 馨，左铮云

(江西中医药大学基础医学院，江西南昌330004)

配伍是方剂“活的灵魂”，方剂配伍原理探究是方剂研究的核心［1］。辛甘化阳是方剂性味配伍中五味配伍法之一，亦称辛甘助阳或辛甘扶阳。该配伍理论的渊源要追溯到《内经》时代，《素问·至真要大论》在阐述药物性味时指出“辛甘发散为阳”。金代医家成无己在《注解伤寒论》中首先提出“辛甘化阳”的概念。医圣张仲景擅用此法，《伤寒论》作为一部以治疗狭义伤寒证为主的经典著作，辛甘化阳思想贯穿其始末［2］，而其中最具代表性的方剂当推桂枝甘草汤。故笔者以桂枝甘草汤为研究对象，从能量代谢角度对“辛甘”配伍“化阳”的原理与内涵进行探讨，为方剂性味配伍原理研究提供新的思路，为继承和发扬“辛甘化阳”配伍理论，指导临床合理运用桂枝甘草汤“辛甘化阳”配伍治疗心阳虚证提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动 物

SFP级 SD雄性大鼠，44～47日龄，体质量(200±20)g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号:SCXK(湘)2011－0003。

1.2 药品、试剂与仪器

桂枝甘草汤由桂枝12 g、甘草6 g组成，药材购自北京同仁堂(亳州)饮片有限公司，产地分别是广西、内蒙古，批号分别为30110387，301133667。

总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、葡萄糖(GLU)试剂盒，均由中生北控生物科技股份有限公司生产，批号分别 121471，125811，123001;胰岛素(INS)、胰高血糖素(GC)、三点甲状腺原氨酸(T3)Elisa试剂盒，均由武汉优尔生科技股份有限公司生产，批号分别为 L131113353、L131029673、L131018386。RXZ智能型人工气候箱，宁波江南仪器厂产品;Sysmex CHEMIX－180全自动生化分析仪，日本制造;CT14RD型低温冷冻离心机，上海天美生化仪器设备工程有限公司产品;Chromate 4300酶标仪，美国Awareness公司产品。

1.3 药物制备方法

参照《伤寒论》原文桂枝甘草汤煎煮方法并加以改进。各组药材分别加10倍量水，浸泡30 min，煎煮2次，每次40 min，合并2次滤液，浓缩至1∶1液(即1 g生药/mL药液)，放置4℃冰箱，备用。

1.4 动物分组

大鼠常温(23±2)℃饲养1周后，按体质量随机分为空白对照组、桂枝甘草汤组、单味桂枝12 g组、单味甘草6 g组4组，每组20只。

1.5 饲养环境

动物分组后，除给药时间外，均放置于人工气候箱饲养。仪器条件设置:白天6℃、湿度55%，夜晚4℃、湿度66%，昼夜交替光照，24 h为1个循环。

1.6 给药方法

各组动物均放置于以上环境条件饲养，并于每天下午灌胃给予相应的药物，给药剂量见表1，给药体积10μL/g，空白对照组给予等体积的纯净水，并记录每只老鼠日平均摄食量，每3天称量动物体质量1次。

1.7 检测指标

于低温饲养第15天、30天，每组各处理10只动物。具体方法:于给药后50 min，氨基甲酸乙酯(1 g/kg)麻醉，仰卧固定，打开腹腔，自腹主动脉采血6～8 mL，室温静置30 min，放置于低温离心机，4℃、4 000 r/min离心10 min，分离血清检测 TC、TG、GLU、INS、GC、T3含量。动物处理前禁食但不禁水14 h。

1.8 统计学方法

2 结果

桂枝甘草汤及其拆方对低温环境大鼠血清TC含量、TG含量、GLU水平、INS水平和T3含量的影响，见表1。

各组大鼠血清TC含量随饲养时间延长呈递减趋势，其中桂枝甘草汤组和桂枝12 g组下降幅度尤为明显，与同组15 d时对比，差别有统计学意义(P ＜0.05)。

给药15 d时，给药组大鼠血清TG水平均呈现下降趋势，其中甘草6 g组与空白对照组对比，差别有统计学意义(P＜0.05)。持续饲养30 d时，除甘草6 g组外，其他各组大鼠血清TG水平均低于同组15 d水平，其中空白对照组和桂枝甘草汤组较之差别有统计学意义(P ＜0.05或 P ＜0.01)。

各组大鼠GLU含量随饲养时间延长均呈递增趋势，各组30 d的GLU含量与同组15 d对比，差别均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。给药15 d时，桂枝甘草汤组和甘草6 g组大鼠GLU水平较空白对照组均呈现增高趋势，其中甘草6 g组较之差别有统计学意义(P＜0.05)。持续饲养30 d时，各组血糖继续增高，桂枝甘草汤组和甘草6 g组的GLU含量均高于空白对照组(P＜0.05)。

给药15 d时，各给药组大鼠血清INS含量均高于空白对照组，其中甘草6 g组较之差别有统计学意义(P＜0.05)。持续饲养30 d时，各组大鼠血清INS均低于同组15 d水平，其中桂枝甘草汤组INS水平低于30 d时空白对照组，但差别无统计学意义(P ＞0.05)。

给药15 d时，桂枝甘草汤组和桂枝12 g组动物血清GC含量均低于同期空白对照组，其中桂枝12 g组较之差别有统计学意义(P＜0.05)。随着饲养时间的延长，除甘草6 g组外，其余各组大鼠血清GC水平均呈现反弹式递增，其中桂枝甘草汤组、桂枝12 g组与同组15 d组对比，差别有统计学意义(P ＜0.01或 P ＜0.05)，桂枝甘草汤组水平接近同期空白对照组。

给药15 d时，桂枝12 g组血清T3含量显著高于同期空白对照组，差别有统计学意义，(P＜0.05)。给药30 d时，各组血清T3含量均高于同组15 d水平，其中空白对照组、桂枝甘草汤组和甘草6 g组升高幅度尤为突出，差别有统计学意义(P＜0.01);各给药组T3含量又均低于同期空白对照组，其中桂枝甘草汤组较之差别有统计学意义(P＜0.05)。

表1 各组大鼠血清TC、TG、GLU含量对比 n=10，±s

表1 各组大鼠血清TC、TG、GLU含量对比 n=10，±s

注:与同期空白对照组对比，*P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;与同组15 d对比，#P＜0.05，##P＜0.01。

组 别 给药剂量/(g·kg－1)TC/(mmol·L －1)TG/(mmol·L －1)GLU/(mmol·L －1)15 d 30 d空白对照组 － 2.566±0.239 2.351±0.426 0.445±0.279 0.240±0.094# 5.061±0.794 6.034±0.741 15 d 30 d 15 d 30 d##桂枝甘草汤组 1.62 2.512 ±0.391 2.241 ±0.261# 0.370 ±0.143 0.239 ±0.08## 5.507 ±0.935 7.031 ±0.532*##桂枝 12 g 组 1.08 2.583 ±0.472 2.134 ±0.238# 0.322 ±0.128 0.218 ±0.141 4.833 ±0.493 6.345 ± 1.08##甘草 6 g 组 0.54 2.436 ±0.312 2.334 ±0.225 0.278 ±0.061* 0.281 ±0.062 5.904 ±1.014* 7.117 ± 1.186*#

续表各组大鼠血清 INS、GC、T3含量对比 n=10±s

续表各组大鼠血清 INS、GC、T3含量对比 n=10±s

注:与同期空白对照组对比，*P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;与同组15 d对比，#P＜0.05，##P＜0.01。

组 别 给药剂量/(g·kg－1)INS/(ng·L－1)GC/(ng·L－1)T3/(ng·L －1)15 d 30 d空白对照组 － 156.21±52.25 156.7±40.27 22.18±7.14 27.92±6.64 762.23±457.59 1603.79±243.74 15 d 30 d 15 d 30 d##桂枝甘草汤组 1.62 198.22 ±81.38 154.1 ±34.88 18.78 ±9.31 27.78 ±4.75## 686.89 ±249.62 1172.98 ±380.88*##桂枝12 g组 1.08 183.84 ±46.45 160.38 ±40.41 15.65 ±5.37* 22.25 ±8.74# 1336.24 ±770.55* 1473.54 ±243.37甘草6 g组 0.54 203.87 ±29.07* 195.86 ±66.41 24.05 ±8.01 23.79 ±6.78 888.08 ±197.13 1434.23 ±365.79##

3 讨论

桂枝甘草汤出自于《伤寒论》，原文第64条:“发汗过多，其人叉手自冒心，心下悸，欲得按者，桂枝甘草汤主之。”该方由桂枝、甘草两味药物组成，方中桂枝四两，辛甘性温，入心而助阳，为君药;甘草二两，甘温入脾而补中益气，为臣佐药。二药相伍，辛甘和化，共奏温通心阳之效［3］。临床常用该方加减治疗冠心病、心力衰竭等心血管疾病属心阳虚证者［4－5］，是张仲景“辛甘化阳”配伍的代表方剂。所谓“辛甘化阳”，是指由辛味药和甘味药相合，以化生或资助“阳气”的一种配伍方法，又称“辛甘助阳”或“辛甘扶阳”［2，6］。此处的“阳气”即五脏阴阳精气理论所指的具有温煦、推动、兴奋等作用的气，是人体生命活动的物质基础，是影响人体生命健康的关键，是生命的动力和源泉”，正如《素问·生气通天论》所云:“阳气者，若天与日，失其所则折寿而不彰。”［7］现代医学则提出“能量”是生命的动力，线粒体作为能量转换的主要场所，能为人体提供95%以上的能量，被誉为“生命动力工厂”，是人体生命活力的重要体现者［8］。故笔者将中医“阳气”与现代医学“能量”联系起来，从能量代谢角度探讨桂枝甘草汤“辛甘化阳”配伍的原理与内涵。INS是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素，具有调节代谢过程的功能，是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。GC是一种由胰岛α－细胞分泌的激素，与INS的作用相反，是一种促进分解代谢的激素，能促进糖原分解和糖异生作用，使血糖明显升高，也可促进胰岛素和胰岛生长抑素的分泌［9］。T3是由甲状腺滤泡细胞合成及分泌的激素，是甲状腺激素中最主要的活性物质，具有控制甲状腺激素代谢的重要作用，而甲状腺激素能调节线粒体能量代谢，加速糖和脂肪代谢，特别是促进许多组织糖、脂肪及蛋白质的分解氧化过程，使机体的耗氧量和产热量增加［10－11］。

实验结果表明:温度对大鼠血清TC、TG、GLU、INS、T3、GC等指标的代谢有一定的影响，在4～6℃低温环境下，随饲养时间的延长，TC、TG水平呈下降趋势，而GLU、T3、GC水平则呈增高态势。桂枝甘草汤对以上指标的代谢在同等温度条件有一定的干预作用，随着给药时间的延长，可降低大鼠血清TC、TG、INS、T3水平，其中对 T3的影响最为显著;可增高GLU、GC含量，并且其作用是通过桂枝、甘草配伍共同实现的。综上所述，桂枝甘草汤“辛甘化阳”配伍原理的内涵与线粒体能量代谢有关，其中随给药时间延长，对血清T3、GLU、GC含量影响最为显著。

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