运用流式细胞术对75例急性白血病免疫分型的表型分析

张 航 杨 梅

（贵阳中医学院第二附属医院检验科，贵州 贵阳550001）

随着流式细胞术（FCM）对AL免疫分型检测的应用，大大提高了AL分型的准确性，AL形态分型与临床的符合率仅有70%左右，结合免疫分型后AL分型准确率可达到90%以上。现就应用FCM对我院75例初诊AL患者进行免疫表型分型的资料分析如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选择75例经FAB分型初诊为AL的我院2011年3月至2014年6月住院患者，男性39例，女性36例；年龄13～77岁。按FAB分型标准［1］分为：急性髓系白血病（AML）45例，其中M02例，M19例，M220例，M34例，M45例，M54例，M61例；急性淋巴细胞白血病（ALL）25例，其中L17例，L213例，L35例；另有5例未能明确分型。

1.2 仪器与试剂 流式细胞分析仪为美国Beckmen Coulter公司生产，型号Epics－XL；试剂为美国贝克曼库尔特公司生产的单克隆抗体，髓系标志抗体有：MPO、CD13、CD14、CD33、CD41、CD117、GlyA；T淋巴标志抗体有：cCD3、CD2、CD5、CD7；B淋巴标志抗体有：cCD79a、CD10、CD19、CD20；NK细胞抗体有：CD（16＋56）；非系列抗体有：CD45、CD34、HLA－DR；同型对照抗体：IgG1、IgG2a；白细胞破膜剂、红细胞溶血剂均购自贝克曼库尔特公司。

1.3 方法 胞膜抗原检测，采用三色荧光抗体直接标记肝素抗凝的骨髓悬液（细胞数＞1×106／mL），每管加荧光抗体20μL，加骨髓悬液100μL，混匀置室温避光反应30min，同时做同型对照；加溶血剂3mL溶血30min后，用PBS洗涤1次，加0.5mL PBS重悬待测；胞质抗原检测：采用四色荧光抗体标记经破膜处理过的骨髓白细胞，每管加荧光抗体20μL，经破膜的骨髓白细胞悬液（细胞数＞1×106／mL）100μL，混匀置室温避光反应30min，同时做同型对照，用PBS洗涤1次，加0.5mL PBS重悬待测。FCM检测分型，流式细胞仪检测，每次计数10 000个细胞以上，通过侧向散射光信号（SSC）与CD45双参数散点图设门，框选出异常细胞群（原幼细胞群），分析门内细胞胞膜或胞质白血病抗原的表达情况；细胞膜抗原表达率≥20%，细胞质抗原表达率≥10%，判定为阳性表达；免疫分型依据国际白血病欧洲协作组（EGIL）的积分标准［2］。

2 结 果

45例AML，单纯型AML31例，Ly＋AML14例，各 抗 原 阳 性 率 依 次 是 CD13（95.56%）、CD33（86.67%）、MPO（82.22%）、CD117（71.11%）、HLADR（62.22%）、CD7（26.67%）、CD14（20.00%）、CD5（13.33%）、CD19（4.44%）。10例 T－ALL，单纯 TALL8例，My＋T－ALL2例，各抗原阳性率依次是CD2（100%）、cCD3（100%）、CD7（90.00%）、CD5（70.00%）、CD13（28.57%）。14例 B－ALL，单纯 BALL11例，My＋B－ALL 3例，各抗原阳性率依次是CD19（100%）、CD79a （92.86%）、CD10（71.42%）、CD20（57.14%）、CD13（14.29%）、CD33（7.14%）。FAB不能明确分型的5例AL，4例为MAL，其中2例 AML／T－ALL，主要表达抗原有CD13、CD33、CD2、CD7、MPO、cCD3、HLA－DR、CD34；1 例 JJAML／BALL，主要表达抗原有 CD13、CD14、CD10、CD19、MPO、cCD79a、CD34；1例AML／T－ALL／B－ALL，主要表达 抗 原 CCD13、CD33、CD7、CD10、MPO、cCD3、cCD79a、HLA－DR、CD34。另1例表达CD2、CD7、CD（16＋56），符合NK细胞白血病表型。1例FAB形态初诊ALL－L2的患者，最后通过免疫分型确诊为AUL，表达抗原有CD34、HLA－DR、CD7。见表1。

表1 75例AL免疫表型

3 讨 论

CD45是所有白细胞的共同抗原，但不同白细胞和不同分化阶段CD45的表达强度不同，SSC反映细胞颗粒性和成熟度，所以利用SSC／CD45双参数散点图设门，能有效地把白血病细胞群（原始／幼稚细胞）和正常细胞群区分开来［3］。FCM进行白血病免疫分型获得白血病细胞的抗原表达信息，用系列积分法将其分为单纯型AML、单纯型ALL、变异型（Ly＋AML和 My＋ALL）、MAL、AUL。本资料45例AML中，阳性率靠前的抗原分别是 CD13（95.56%）、CD33（86.67%）、MPO（82.22%）、CD117（71.11%），可见 CD13、CD33、MPO对髓系白血病的诊断具有重要意义，尤其是胞质MPO对诊断AML有决定性作用。有研究显示CD117极少表达于ALL，所以CD117被作为鉴别AML和ALL的重要抗原［4］；CD34是干／祖细胞相关抗原，随着造血细胞的分化成熟而逐渐消失，CD34、HLA－DR多表达于低分化类型M0、M1、M4、M5，分化较成熟的 M3极少表达，本研究中的4例M3高表达CD13和CD33，不表达CD34、HLA－DR，与文献报道一致［5］。研究中1例患者在SSC／CD45散点图中出现两群异常细胞，其中一群细胞C45＋主要表达CD13、CD33、CD117、CD34、HLA－DR，而另一群CD45－仅有GlyA表达，结合形态符合M6；变异型（Ly＋AML）14例，以CD7表达常见，其次是CD5、CD19。

现有的FAB分别标准很难区分T－ALL和BALL，而FCM免疫分型就可以根据白血病细胞抗原的表达信息将其明确分开。本研究中10例TALL，主要表达抗原是CD2、cCD3、CD7、CD5，以上抗原诊断T－ALL具有很高价值，尤其是胞质抗原cCD3最为特异。14例B－ALL主要表达抗原是CD19、cCD79a、CD10、CD20，这些抗原对诊断 BALL具有很高价值，以胞质抗原cCD79a最为特异。My＋ALL 5例，以CD13表达常见、其次是CD33。因此FCM免疫分型对ALL判断细胞来源，区分TALL和B－ALL及亚型都具有重要意义。

本研究中FAB不能明确分型的5例AL患者，通过FCM免疫分型表达抗原积分法显示，明确4例为MAL，其中2例同时表达髓系和T淋巴系抗原，1例同时表达髓系和B淋巴系抗原，1例同时表达髓系和T、B淋巴系抗原，系属抗原积分均＞2分。胞质抗原MPO、cCD3、cCD79a积分均为2分，可见MPO、cCD3、cCD79a对鉴别混合白血病具有重要意义。混合白血病诊断中对于仅表达个别或次要相关抗原，系属积分＜2分，不能诊断为双系或双表型白血病，应归为Ly＋AML或My＋ALL。由于白血病细胞起源和分化的异质性，MAL可能表型为双系列或双表型、双克隆甚至多种类型组成的混合型，在实际工作中要明确分类较为困难，需要进一步研究。NK细胞白血病特异表型为CD3－／CD（16＋56）＋，本研究中1例FAB不能明确分型的患者通过FCM免疫分型符合NK细胞白血病表型。AUL特点是无系属抗原表达，但常有非系属抗原CD34、HLA－DR及CD7表达［6］，本研究中1例患者FAB初诊为ALL－L2，经FCM免疫分型的结果显示是CD34＋／HLA－DR＋／CD7＋，其它系属抗原均为阴性，最终确诊为AUL。

应用FCM对白血病免疫分型，具有特异、准确、快速、重复性好的特点，弥补了FAB形态分型的不足，提高了AL诊断的准确性，尤其是对复杂类型白血病的诊断具有重要价值。

［1］ 张之南，沈悌.血液病诊断与疗效标准［M］.3版.北京：北京出版社，2007：103－121.

［2］ Bene MC，Castoldi G，Knappe W，et al.Proposal for the elassification of acute leukemias，European Group for the immnological characterization of leukemias（EGIL）［J］.Leukemia，1995，9（10）：1783－1786.

［3］ 王建中.临床流式细胞分析［M］.上海：上海科学技术出版社，2005：281.

［4］ El－Sissy AH，El－Mashari MA，Bassuni WY，et al.Aberrant lymphoid antigen experession in acute myeloid leukemia in Saudi Arabia［J］.J Egypt Natl Canc Inst，2006，18（3）：244.

［5］ Sarraf P，Frederich RC，Turner EM，et al.Multipile cytokines and acute inflammation raise mouseleption levels：potential role in inflammatory anorexia［J］.J Exp Med，1997，85（1）：171－175

［6］ 陶德定，舒丹，李方和，等.流式细胞术用于混合型白血病及急性未分化型白血病的诊断［J］.同济医科大学学报，2000，29（1）：21－22.